玉树冬虫夏草原草中主要化学成分分析*

白飞荣，李辉，姚粟，刘洋，张露，扎西才吉，程池

1(中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中心，北京，100015)

2(玉树藏族自治州三江源药业有限公司，四川玉树，810003)

冬虫夏草［Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung，J.M.Sung，Hywel-Jones ＆ Spatafora］［1］是冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上形成的子座及僵虫(幼虫尸体、菌核)的复合体，主要生长于我国的四川、青海、云南、西藏和甘肃等省区海拔3 500～5 000 m的高山灌丛和草甸中。

青海省虫草资源非常丰富，数量和质量均居全国之冠。其中处于三江源核心区的玉树冬虫夏草产量占青海省总产量的60%以上，所产的冬虫夏草个头大、质量好，是我国最重要的冬虫夏草来源地。本研究对玉树产地冬虫夏草主要化学成分进行较全面的分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品收集

新鲜冬虫夏草于2013年5月采自青海玉树藏族自治州的郭钦(海拔5 100 m)和哈秀乡(海拔4 800 m)。

1.1.2 样品处理

新鲜冬虫夏草在室内阴干，利用组织研磨器研碎过60目筛，过筛粉末用于成分研究的提取与测定，所有试验均设置重复组，取平均值。

1.1.3 主要试剂与仪器

腺苷、虫草酸、虫草素标准品(色谱纯，中国食品药品检定研究院)，葡萄糖标准品(分析纯，Sigma公司)，无水乙醇、苯酚、浓H2SO4(均为分析纯)，甲醇(色谱纯)，自制双蒸水。

高温电炉(SXZ-8-10)，上海一恒科技有限公司;电子分析天平(FA-B)，上海精密仪器有限公司;分光光度计(DU-800)，岛津LC-20A高效液相色谱仪(SHIMADZU);SE812J氮吹仪，北京帅恩科技有限责任公司;原子吸收光谱仪(AA-240S)，美国VARIAN;组织研磨仪(TL-2010)，北京艾科塞恩斯有限公司;超声波振荡器(JY92-IIN)，宁波新芝生物科技有限公司。

1.2 测定方法及原理

1.2.1 水分、灰分和蛋白质测定方法

水分采用GB 5009.3-2010进行测定;灰分采用GB5009.4-2010进行测定;蛋白质采用GB 5009.5-2010进行测定。

1.2.2 氨基酸测定方法

采用GB 5009.124-2003进行测定。

1.2.3 无机元素测定方法

Fe、Mg、Mn:GB/T5009.90-2003;K、Na:GB/T5009.91-2003;Zn:GB/T5009.14-2003;Ca:GB/T5009.92-2003;Cu:GB/T5009.13-2003;Pb:GB 5009.12-2010。

1.2.4 粗多糖测定方法［2］

采用苯酚-硫酸分光光度测定法，乙醇沉淀得到多糖组分，在浓H2SO4作用下脱水生成的糠醛衍生物能与苯酚缩合成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中多糖浓度成正比，在485 nm处有最大吸收峰，故可在此波长下进行比色定量。

1.2.5 虫草素(C10H13N5O3)和腺苷(CC10H13N5O4)的测定方法

采用高效液相方法测定，色谱柱:Shim-pack VPODS 250 mm × 4.6 mm，5 μm;检测器:VWD-3000RS，检测波长254 nm;流动相:V(水)∶V(甲醇)=88∶12;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL，用紫外检测器来测定虫草素和腺苷的含量。具体实验步骤参照文献［3-4］。

1.2.6 虫草酸(D-甘露醇)的测定方法

采用高效液相方法测定，色谱柱:糖类和有机酸分析柱300 mm ×7.8 mm(8%)，8 μm;检测器:RID 40℃;流动相:0.002 5 mol/L H2SO4;流速:1.0 mL/min;柱温:80℃;进样量:20 μL，根据保留时间定性，用示差检测器来测定虫草酸的含量。具体实验步骤参照文献［4］。

2 结果与分析

2.1 水分、灰分、蛋白质测定结果

根据1.2.1方法进行测定，具体结果见表1。测定结果显示2个样品中水分、灰分、蛋白质含量大致相同。

表1 冬虫草夏草原草基础成分测定结果Table 1 The results of basic ingredient from nature O.sinensis

2.2 氨基酸测定结果

通过1.2.2方法对18种氨基酸进行测定(结果见表2)。由结果可知，2个样品中氨基酸总量基本一致，且同一种氨基酸含量均没有较大的差异，所有氨基酸中谷氨酸含量最高(达到3.68%)，蛋氨酸含量最低。

2.3 无机元素测定结果

根据国标GB/T5009方法对9种无机元素进行测定(结果见表3)，2个虫草样品间除Mn和Pb元素含量差别较大外，其他元素含量无明显差异，2个样品均以K元素含量最高(达到1.55×104mg/kg)。

表2 氨基酸测定结果 %Table 2 The determination results of amino acids

表3 无机元素的测定结果 mg/kgTable 3 The determination results of inorganic elements

2.4 多糖、腺苷、虫草素、虫草酸测定结果

根据1.2.4～1.2.6的方法对多糖、腺苷、虫草素、虫草酸进行测定(结果见表4)。多糖测定的标准回归方程为y=4.188 3x+0.005 2(R2=0.998 0)，x代表多糖(mg)，y代表吸光度;腺苷检测标准回归方程为y=0.497 69x+0.034 85(R2=0.999 9)，x代表腺苷浓度(μg/mL)，y代表峰面积(mAU·min);虫草酸检测标准回归方程y=5.199 23x-0.036 79(R2=0.999 8)，x代表虫草酸浓度(mg/mL)，y代表峰面积(μRIU/min)。测定结果显示2个样品多糖含量无明显差异，郭钦样品的腺苷和虫草酸含量相对较高(分别为0.33 mg/g，131.75 mg/g)，2样品中均未有虫草素检出。

表4 功效成分测定结果Table 4 The determination results of functional components

3 讨论

文中测定得到玉树州2个产地冬虫夏草的灰分为(4.6% ～4.7%)、粗蛋白为(31.57% ～33.75%)、总氨基酸为(23.12% ～23.73%)与文献报道的基本一致，粗多糖含量(10.53% ～11.19%)略低于相关文献中的测定结果(12% ～28%)［5-8］。

腺苷的测定结果(0.18～0.33 mg/g)与李绍平［9］毛细管电泳法分析四川、西藏冬虫夏草样品的结果(0.1～0.3 mg/g)相吻合，且符合《中国药典》(2010)规定的冬虫夏草腺苷含量不得低于0.01%的规定。虫草酸测定结果(105.34～131.75 mg/g)，与周苏等［10］青海虫草的测定结果(115.99 mg/g)相吻合。无机元素测定结果中铁的含量(1 220～1 350 mg/kg)高于周苏［10］等的测定结果(云南 660 mg/kg，西藏791 mg/kg，青海734 mg/kg)近1倍，原因可能与虫草采集地的土质情况有关联，其他元素的测定结果与张晓峰［11］等《中国虫草》内收集的各地虫草样品测定结果基本吻合。

本实验的2个样品中未检测到虫草素，此结果与周苏等［10］的测定结果一致，其只在蛹虫草中检测到虫草素，在西藏、云南、青海的冬虫夏草样品中均未检测到，可能与提取方法有关或者是冬虫夏草代谢产生的这种化合物原本含量就较低。

［1］ Sung G H，Hywel-Jones N L，Sung J M，et al.Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi［J］.Studies in Mycology，2007(01)，57:5-59.

［2］ NY/T 1676-2008.食用菌中粗多糖含量的测定［S］.北京:中国农业出版社出版，2008.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(第一部)［S］.北京:化学工业出版社，2010:附录36-37.

［4］ 顾振宇，吴雪美，张虹，等.高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量［J］.中国食品学报，2007，7(3):144-147.

［5］ 李楠，宋健国，刘金云，等.蛹虫草与冬虫夏草的化学成分比较［J］.吉林农业大学学报，1995，17(增刊):80-83.

［6］ 彭国平，李红阳，袁永泰.冬虫夏草与人工蛹虫草的成分比较［J］.南京中医药大学学报，1996，12(5):26-27.

［7］ 胡敏，皮惠敏，郑元梅.冬虫夏草的化学成分及药理作用［J］.时珍国医国药，2008，19(11):2 804-2 806.

［8］ 严冬，梁举春.冬虫夏草化学成分研究综述［J］.黑龙江科技信息科技论坛，2013(5):96.

［9］ 李绍平，李萍，季晖，等.毛细管电泳法测定冬虫夏草中核苷类的含量［J］.药物分析杂志，2001，21(2):77-79.

［10］ 周苏，邢增涛.冬虫夏草及虫草制品中活性成分检测方法的建立及含量测定［D］.上海:上海海洋大学，2013:7-60.

［11］ 张晓峰，刘海清，黄立成，等.中国虫草［M］.西安:陕西科学技术出版社，2008.