野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

研究报告

野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

孙晓梅，仝品芬，匡德宣，陈玲霞，王文广，陆彩霞，代解杰

(中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心，

云南省重大传染病疫苗研发重点实验室，昆明650118)

【摘要】目的调查野生树鼩(Tupaiabelangeri Chinensis) 感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定，为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考，为实验树鼩寄生虫控制提供依据。方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便，虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察；绦虫采用压片、固定染色，以及线虫经透明后体视镜观察，虫卵与成虫相对应鉴定。结果野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86%，主要感染种类有3种，经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫，感染率分别为27.67%，30.06%和51.52%。三种蠕虫的混合感染率为4.55%。两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态。 结论 野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高。对野外引入的新种源必须隔离检疫，进行针对性的药物治疗，才能有效地控制肠道寄生虫病的传播。

【关键词】树鼩；肠道蠕虫；长膜壳绦虫；奇口线虫；粪类圆线虫

[基金项目]国家科技支撑计划 (2011BAI15B01-21)，云南省科技创新平台建设(2013DA002)。

[作者简介]孙晓梅(1963-)，女，研究方向：实验动物病原学研究。E-mail： sxm@imbcams.com.cn。

[通讯作者]代解杰(1961-)，男，研究员。E-mail： djj@imbcams.com.cn。

【中图分类号】R33【文献标识码】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.002.004

Survey of intestinal helminth infection in wild tree shrews

(TupaiabelangeriChinensis)

SUN Xiao-mei, TONG Pin-fen, KUANG De-xuan, CHEN Ling-xia, WANG Wen-guang, LU Cai-xia, DAI Jie-jie

(Center of Tree shrews Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and

Peking Union Medical College, Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research & Development on Severe

Infection Diseases, Kunming 650118, China)

Abstract【】ObjectiveTo analyze and understand the epidemic situation of intestinal helminthe infection in wild tree shrews (Tupaia belangeri Chinensis), and to provide useful reference and support for prevention and treatment of parasitic infection in tree shrews. Methods 203 wild tree shrews were used in this study. Stool ova in the smear from fresh feces and after incubation were observed and identified by routine microscopic examination. Cestodes were observed in press slide after fixation and staining, and nematodes were observed under a stereoscope after clearing. The ova were identified with corresponding adult parasites. Results In this survey, we found the total prevalence rate of intestinal helminthes in this wild tree shrew population was 75.86%, mainly including three kinds of important parasites, namely, Hymenolepis diminuta 27.67%, Rictularia sp. 30.06%, and Strongyloides stercoralis 51.52%, respectively. Mixed infection rate of the three species was 4.55%. For Rictularia sp. and Strongyloides stercoralis, embryonated eggs were often observed in their fresh feces. ConclusionsIntestinal helminth infection rate is rather high in the wild tree shrews. Quarantine inspection is necessary for new intake. Different control measures and surveillance should be taken to control the dissemination of intestinal helminth infection in tree shrews.

【Key words】Tree shrews; Intestinal helminthes;Hymenolepisdiminuta;Rictulariasp.;Strongyloidesstercoralis

寄生虫感染不仅危害实验动物健康，对实验结果造成影响，甚至引起人兽共患疾病的传播，在使用实验动物开展生命科学研究过程中必须重视对实验动物寄生虫的控制。近年来，对树鼩(tree shrew，Tupaiabelangeri)的基因组研究发现，树鼩在神经、代谢和免疫系统等方面与人类具有较高的同源性，特别适合于病毒免疫学、神经生物学和代谢性疾病研究，受到越来越多的科研工作者重视[1]。作为我国特有的实验动物新品种，开展树鼩标准化种群的饲养繁殖和质量的控制是重要的基础性工作。鉴于昆明郊区野生树鼩种群数量较为丰富，目前已经成为实验树鼩繁育的种源补充来源地，而对此的研究报道又非常有限。因此，清晰了解野生树鼩自身携带的寄生虫感染谱，有利于开展实验树鼩寄生虫质量控制研究和标准化种群建立。

1材料和方法

1.1动物

203只野生树鼩来源于昆明西郊，引入后饲养于隔离观察室进行检疫。

1.2设备及材料

Eclipse 80i Nikon显微镜，SMZ1500 Nikon体视镜，美国产Forma恒温培养箱；史克肠虫清，卡红，盐酸，乙醇，甘油，载玻片，牙签，试管。

1.3方法

1.3.1粪便检查：抓取并保定树鼩，多数树鼩在抓取过程中因紧张而主动排出粪便,对无粪便者可轻轻按摩其腹部使其排便。每只采取豌豆粒大小新鲜粪便标本，置于载玻片上，加生理盐水搅匀涂片，厚度以能透过涂片看清书上字迹为宜。直接显微镜下检查寄生虫虫卵。

1.3.2幼虫培养：方法同钩蚴培养法[2]。培养1周后体视镜可观察到试管底部有游动的幼虫。用吸管插入试管底部小心地吸出，置载玻片上。

1.3.3成虫制片：对尸解获得的绦虫进行制片、鉴定。绦虫分别截取头颈部、成节和孕节三段进行压片；采用卡红染色，制片步骤为先脱水，再染色，然后封片，镜检；卡红染液配制：卡红4 g，盐酸2 mL，水15 mL，85%乙醇95 mL。先将卡红溶解在盐酸与水中，煮沸后加85%乙醇95 mL，加热片刻，滴加氨液中和盐酸，过滤后使用[2]。

对粪便检查到有线虫卵的动物，给予史克肠虫清进行驱虫，次日收集粪便洗出成虫。将线虫和培养后获得的幼虫置载玻片上，加甘油乙醇透明，然后体视镜或显微镜观察[3]。甘油乙醇溶液：甘油(5～10)mL，加入70%乙醇(90～95)mL。

2结果

2.1调查结果

203只野生来源的树鼩肠道粪便中，共检查出3种蠕虫虫卵，结合成虫的形态特征进行鉴定，分别为长膜壳绦虫(Hymenolepisdiminuta)、奇口线虫(Rictulariasp.)和粪类圆线虫(Strongyloidesstercoralis)，感染率见表1。肠道蠕虫的总感染率为75.86%；粪便中常见到两种或三种蠕虫混合感染的情况，三种混合感染率为4.55%，奇口线虫和粪类圆线虫混合的概率较高。

2.2虫卵与成虫形态特征

本次调查中，从长膜壳绦虫孕节和奇口线虫卵巢中获取的虫卵与粪便中排除的虫卵作一一对应鉴定，显示了明显的形态特征，见表1、图1～3(见文后彩插3)。长膜壳绦虫头部特征见图1b，经卡红染色后，每个成节内含3个横列的球形睾丸非常明显，见图1c；奇口线虫典型特征是在腹部两侧可见梳状盾片，靠身体中后端渐渐稀疏为栉刺，见图2b；粪类圆线虫单独感染的粪样经过孵化培养，2 d后能看到游动的蚴虫，培养7 d后取出鉴定，此时观察到数量较多的丝状蚴，并具有粪类圆线虫的典型形态特征[3]，见图3b。通常在树鼩粪便中看到的奇口线虫和粪类圆线虫的卵，多为含胚胎的形态，见图2a、3a。

表1　野生树鼩携带主要肠道蠕虫形态和感染率

3讨论

本次开展的野外来源的树鼩肠道蠕虫调查，共发现3个优势虫种，分属于绦虫纲和线虫纲，虽种类不多但感染率非常高，达到75.86%，混合感染较普通，三种混合感染的占4.55%,大型虫体-长膜壳绦虫的最大感染强度达到单只动物感染12条。本研究主要采用粪便直接涂片检查虫卵，结合尸解、驱虫以及幼虫培养方法，获得成虫，进行一一对应的鉴定，掌握了昆明西郊栖息的树鼩携带的主要肠道蠕虫感染谱，为今后针对性开展树鼩寄生虫病的预防措施提供了重要的参考数据，为实验树鼩寄生虫的控制提供了依据。其次，在现有的树鼩肠道寄生虫研究报道中，作者很少提供可供借鉴的形态鉴定特征图片。

野生树鼩多有肠道蠕虫的感染，原因与它在野外的栖息环境和食性密切相关。昆明西郊多以次生林和山地森林为主，是野生树鼩天然的栖息地，种群数量比较丰富，树鼩为杂食性，以昆虫、果实和谷物为主，更偏向于昆虫。长膜壳绦虫属绦虫纲膜壳科(Hymenolepididae)膜壳属(Hymenolepis)绦虫，为世界性分布，多寄生于鼠类小肠，也寄生于人体，是重要的人兽共患寄生虫病原，感染该寄生虫动物表现为营养不良、贫血、体重减轻，甚至肠阻塞。长膜壳绦虫的生活史必须要经过中间宿主才能完成，中间宿主包括蚤类、甲虫、鳞翅目等20余种昆虫，常见的有大黄粉虫、谷娥、印度客蚤；树鼩喜食昆虫，尤其是黄粉虫[4]，树鼩易携带长膜壳绦虫，可能是通过食入带有长膜壳绦虫似囊尾蚴的昆虫而被感染。我们在尸解的一只树鼩小肠中最多取出12条长膜壳绦虫，虫体长10～18 cm、宽0.3～0.4 cm，虫体塞满整个小肠和结肠，已造成三段肠套叠和肠阻塞，导致动物死亡，事实表明长膜壳绦虫可严重感染树鼩并致病，是树鼩的寄生虫病病原。以往报道的长膜壳绦虫虫体长多为(20～60) cm，而我们测量到的较短，可能与树鼩体型小有关。

本次调查显示，野生树鼩感染奇口线虫的感染率为30.06%，与田保平等[5]报道的36%的感染率结果较为接近，在有限的树鼩寄生虫调查研究中都有树鼩携带奇口线虫的报道[6]，证明树鼩是除了啮齿类动物以外奇口线虫的自然宿主。其最明显的特征是在虫体腹侧有两行明显的栉刺贯穿全身，病理发现它会造成小肠慢性炎症病变。

粪类圆线虫虫体非常细小，虫体分杆状的自由生活型和丝状的寄生型，主要宿主是人，虫卵在小肠粘膜内发育孵化，随粪便排出的有虫卵和杆状蚴，作者在粪便检测中也常看到活动的杆状蚴，与虫卵培养出来的幼虫一致，它能引起肠粘膜卡他性发炎，严重时粘膜损害处有如蜂窝，感染机体一般有腹泻、消瘦及其他症状。

本次对树鼩检出的三种主要肠道蠕虫种类都属于啮齿类动物肠道寄生虫感染谱范围之内[7]，这是否跟树鼩与啮齿类动物具有相同的生活环境和习性相关？还需要进一步的研究来证实；它们对树鼩均具有一定的致病性，形态特征也比较明显。因

此，对野外引入的新种源必须隔离检疫，开展针对性的药物驱虫，才能有效地控制肠道寄生虫病的传播。

致谢：衷心感谢云南省畜牧兽医研究院黄德生研究员在寄生虫鉴定方面给予的悉心指导！

参考文献：

[1]许凌,范宇,蒋学龙,等. 树鼩进化分类地位的分子证据 [J]. 动物学研究,2013,34(2): 70-76.

[2]张西臣,李建华,主编.动物寄生虫病学 [M]．北京 科学出版社,2010.1.

[3]余森海,许隆祺,主编.人体寄生虫学彩色图谱 [M]．中国科学技术出版社． 2009: 363-365.

[4]彭燕章,叶智彰,邹如金,等．树鼩生物学 [M]．云南科技出版社,1991,154-155.

[5]田保平,彭燕章,侯意谛.中国树鼩的寄生虫调查研究 [J].动物学研究,1989,10:90-91.

[6]吕龙宝,马玉华,邹丰才,等. 驯养中缅树鼩的消化道寄生虫监测及寄生蠕虫驱虫效果[J].中国实验动物学报,2011,19()6): 522-524.

[7]Malsawmtluangi C, Tandon V. Helminth parasite spectrum in rodent hosts from bamboo growing areas of Mizoram, North-east India [J]. J Parasit Dis. 2009，33(1&2): 28-35.

〔修回日期〕2014-10-24