鼻咽癌组织中miR-200a的表达及意义

李晓雪，石书婧，易翔(广西医科大学第一附属医院，南宁5300;河北省眼科医院)

鼻咽癌组织中miR-200a的表达及意义

李晓雪1，石书婧2，易翔1
(1广西医科大学第一附属医院，南宁530021;2河北省眼科医院)

摘要:目的观察鼻咽癌和鼻咽黏膜炎性组织中microRNA-200a(miR-200a)的表达变化，分析其与鼻咽癌发生发展的关系。方法取鼻咽癌组织39例(观察组)、鼻咽黏膜炎性组织12例(对照组)。采用实时荧光定量PCR方法检测两组miR-200a表达，比较不同临床病理参数(包括年龄、性别、T分期、N分期、临床分期)的鼻咽癌患者miR-200a表达差异。结果观察组和对照组miR-200a的相对表达量分别为0.539±0.281、0.744±0.358，观察组较对照组明显下降(P＜0.05)。鼻咽癌组织中miR-200a表达: T3、T4期低于T1、T2期，N2、N3期低于N0、N1期，临床分期Ⅲ、Ⅳ期低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05或＜0.01)。结论miR-200a在鼻咽癌组织中的表达明显下调，其参与了鼻咽癌的发生发展过程。

关键词:鼻咽肿瘤;miR-200a;实时荧光定量聚合酶链反应

Expression and clinical significance ofmiR-200a in nasopharyngeal carcinoma

LI Xiao-xue1，SHI Shu-jing，YI Xiang
(1 The First Affiliated Hospital of Guangximedical University，Nanning 530021，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes in levels ofmiR-200a in the tissues of nasopharyngeal carcinoma(NPC)and nasopharyngitis and to analyze its relationship with the occurrence anddevelopment of NPC.Methods We took 39 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues as the observation group and 12 cases of nasopharyngitis tissues as the control group.The real-time fluorescent quantification PCR was used todetect the expression levels ofmiR-200a in the two groups.Thedifferential expression levels ofmiR-200a in NPC patients with clinicopathological parameter(including age，gender，T stage，N stage and clinical grade)were compared.Results The relative expression ofmiR-200a in the observation group and the control group was 0.539±0.281 and 0.744±0.358，respectively.The expression ofmiR-200a in the observation group was significantlydecreased as compared with that of the control group(P＜0.05).The expression ofmiR-200a in the observation groupdecreased with T stage，N stage and the increasing clinical stages(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion The expression ofmiR-200a in the NPC tissues isdown-regulated whichmay participate in the pathogenesis anddevelopment of NPC.

Key words:nasopharyngeal carcinoma;miR-200a; real-time fluorescent quantification polymerase chain reaction

鼻咽癌(NPC)是我国南方地区常见的恶性肿瘤之一，其发病率在头颈部恶性肿瘤中居首位［1］。研究发现，microRNA-200a(miR-200a)在多种肿瘤中表达下调，在肿瘤发生、发展过程中具有抑癌基因的功能［2］。有关miR-200a在鼻咽癌中表达的情况少见报道。本研究采用Real-time PCR方法检测鼻咽癌组织中miR-200a表达，探讨其在鼻咽癌发生发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2014年4～6月在广西医科大学第一附属医院行活组织病理检查的39例鼻咽癌患者(观察组)和12例鼻咽黏膜炎性患者(对照组)，均经病理检查确诊。观察组男24例、女15例，年龄25～74岁、中位年龄45岁。患者均为初发，未接受化疗、放疗及其他针对肿瘤的相关治疗。对照组男6例、女6例，年龄20～58岁、中位年龄41.5岁。取新鲜活检组织置－80℃保存备用。

1.2miR-200a表达检测取组织标本，加入TRIzol试剂抽提总RNA，逆转录合成cDNA。miR-200a上

游引物: CGCTAACACTGTCTGGTAACGATGT。PCR反应体系为SYBR Premin Ex TaqⅡ(2×)10 μL，miR-200a上游引物(10 μmol/L)0.4 μL，Uni-miR qPCR引物(下游引物)(10 μmol/L)0.4 μL，ROX Referencedye(50×)0.4 μL，cDNA 1 μL，用无酶水补至20 μL。反应条件: 95℃30 s，95℃5 s，60℃31 s。扩增后进行扩增曲线分析，采用2－ΔΔCt计算目的基因的相对表达量。

1.3统计学方法采用SPSS16.0统计软件。计量资料用珋x±s表示，数据比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1鼻咽癌组织中miR-200a的表达miR-200a在鼻咽癌组织中的相对表达量为0.539±0.281，在鼻咽黏膜炎性组织中为0.744±0.358;二者比较，P＜0.05。

2.2miR-200a表达与鼻咽癌临床病理参数的关系见表1。

表1　不同临床病理参数的鼻咽癌患者miR-200a表达比较()

表1　不同临床病理参数的鼻咽癌患者miR-200a表达比较()

临床病理参数　n　miR-200a P年龄(岁)≤50　30　0.512±0.269　0.455 ＞50　9　0.582±0.304性别男24　0.521±0.275　0.469 女15　0.600±0.309 T分期T1、T2期　10　0.782±0.278　0.001 T3、T4期　29　0.455±0.233 N分期N0、N1期　11　0.719±0.259　0.010 N2、N3期　28　0.468±0.261临床分期Ⅰ、Ⅱ期　5　0.839±0.266　0.011Ⅲ、Ⅳ期34　0.496±0.260

3　讨论

miRNA是一类长20～25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过与靶基因mRNA的特定位点结合，抑制该蛋白的合成或诱导该mRNA的降解，从而在转录后水平参与基因的表达调控［3］。近年研究表明，miRNA可参与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭转移及信号转导通路等多个环节，具有抑癌基因或癌基因的不同功能，在肿瘤的发生、发展和转归中发挥重要作用［4～6］。miR-200是一组miRNA，其家族成员主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429。根据不同的基因组定位，miR-200家族又可分为2个簇:miR-200a、miR-200b、miR-429基因簇定位于1号染色体p36.33，miR-200c、miR-141基因簇定位于12号染色体p13.31［7］。近年研究发现，miR-200a在肝癌、肺癌、胃癌、外阴鳞癌等多种肿瘤中的表达明显低于正常组织［8，9］。miR-200家族与E盒结合锌指蛋白(ZEB)家族成员ZEB1和ZEB2可相互负反馈抑制，miR-200家族可通过抑制ZEB1/ZEB2的表达，从而上调E-cadherin表达;而E-cadherin表达可阻止上皮—间质转化的发生，进而抑制肿瘤细胞的侵袭转移［10］。提示miR-200家族具有抑癌基因的作用。

Chen等［11］通过miRNA微阵列芯片证实，miR-200a在鼻咽癌中表达明显下调。Xia等［6］在鼻咽癌细胞株中检测发现，miR-200a的表达随鼻咽癌细胞分化程度的增加而增加，且miR-200a可通过下调ZEB2抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭，通过下调CTNNB1抑制鼻咽癌细胞的增殖。本研究结果显示，与鼻咽黏膜炎性组织相比，miR-200a在鼻咽癌组织中的表达明显下调;miR-200a的表达随着T分期、N分期及临床分期增加而下调，提示miR-200a可能通过发挥类似抑癌基因的作用参与鼻咽癌的发生、发展。

参考文献:

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收稿日期:( 2015-06-12)

通信作者简介:易翔(1970-)，男，副教授，硕士研究生导师。研究方向为鼻咽癌淋巴结转移的机制及抗鼻咽癌药物的筛选。E-mail: yixiang 16300@163.com

作者简介:第一李晓雪(1987-)，女，医师，硕士在读。研究方向为鼻咽癌淋巴结转移的机制。E-mail: 1360808767@ qq.com

基金项目:广西医学科学实验中心开放基金(KFJJ2010-12)。

文章编号:1002-266X(2015)34-0014-02

文献标志码:A

中图分类号:R739.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.005