hTERC、ASPP2mRNA在子宫内膜癌变过程中的表达变化及意义

段清，尹利荣，田晶(天津医科大学第二医院，天津300211)

hTERC、ASPP2mRNA在子宫内膜癌变过程中的表达变化及意义

段清，尹利荣，田晶
(天津医科大学第二医院，天津300211)

摘要:目的探讨hTERC、ASPP2mRNA在子宫内膜癌变过程中的表达变化，并探讨其临床意义。方法收集正常子宫内膜、子宫内膜增生(单纯增生、复合增生、不典型增生)、子宫内膜癌组织，分别采用荧光原位杂交法、半定量RT-PCR法检测hTERC、ASPP2mRNA，分析二者相关性及其与子宫内膜癌临床病理特征的关系。结果在正常子宫内膜、子宫内膜单纯增生、复合增生、不典型增生及子宫内膜癌中hTERCmRNA表达依次升高、ASPP2mRNA表达依次降低，除hTERC在正常子宫内膜与单纯增生之间、ASPP2mRNA在不典型增生与子宫内膜癌之间的表达差异无统计学意义(P均＞0.05)外，其余两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.05);不同子宫内膜组织中hTERC、ASPP2mRNA的表达呈负相关(r =－0.625，P＜0.05); hTERC、ASPP2mRNA表达与子宫内膜癌组织学分级、癌浸润深度、淋巴结转移有关(P均＜0.05)，hTERCmRNA表达与临床分期无关(P＞0.05)，ASPP2mRNA表达与临床分期有关(P＜0.05)。结论在子宫内膜癌变过程中，hTERCmRNA表达上调、ASPP2mRNA表达下调或缺失，二者有助于子宫内膜癌的早期诊断和预后判断。

关键词:子宫内膜癌;端粒酶;子宫内膜增生; hTERC基因; ASPP2基因

子宫内膜癌的发病过程复杂，多种因素参与其中。端粒酶激活可促进肿瘤的发生，hTERC基因在端粒酶活性的上调中起重要作用［1］。ASPP2是一种抑瘤基因［2］，ASPP2缺陷可导致肿瘤的发生。本研究通过观察hTERC、ASPP2mRNA在子宫内膜癌变过程中的表达变化，探讨二者对子宫内膜癌早期诊断和预后判断的价值。

1　资料与方法

1.1临床资料收集天津医科大学第二医院病理科2003～2013年手术切除经病理确诊的子宫内膜癌45例，术前均无放、化疗治疗史;另取正常子宫内膜20例及子宫内膜单纯增生28例、复合增生29例、不典型增生26例，均来自因子宫肌瘤或功能失调性子宫出血而行子宫切除者，术前均无激素治疗史。

1.2hTERCmRNA检测采用荧光原位杂交(FISH)技术。以TERC/CSP3dNA双色探针，分别标记TERC基因(3q26.3)及3号染色体着丝粒(3p11.1-q11.1)，荧光信号分别为红色和绿色。将石蜡标本切成4 μm厚切片，65℃烘烤2 h，变形杂交，洗涤玻片，自然风干后对FISH荧光信号进行判读。以单个间期细胞核中红色及绿色信号各为2个为正常细胞，单个间期细胞核中红色信号＞2个且绿色信号≥2个为hTERC基因扩增异常细胞。计数100个细胞，计算异常细胞所占比例，以此表示hTERCmRNA相对表达量。

1.3 ASPP2mRNA检测采用RT-PCR法。按照Genebank报道的人类ASPP2及β-actinmRNA的基因序列设计PCR引物，以合成的cDNA为模板进行PCR扩增反应。扩增条件: 93℃40 s，64℃40 s，72 ℃50 s，循环30次;最后72℃8min。取6 μL PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳，用Imagestore-5000系统对所获得的条带做半定量分析，以ASPP2与βactin条带吸光度比值作为ASPP2mRNA相对表达量。

1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，各组总体均数比较用方差分析，组间两两比较用q检验;相关性分析采用Spearman's Rho法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同子宫内膜组织中hTERC、ASPP2mRNA相对表达量比较见表1。

2.2不同子宫内膜组织中hTERC、ASPP2mRNA表达的关系子宫内膜组织中，hTERC、ASPP2mRNA

表达呈负相关(r =－0.625，P＜0.05)。

表1　不同子宫内膜组织中hTERC、ASPP2mRNA相对表达量比较()

表1　不同子宫内膜组织中hTERC、ASPP2mRNA相对表达量比较()

注:与单纯增生比较，*P＜0.05;与复合增生比较，#P＜0.05;与不典型增生比较，△P＜0.05;与子宫内膜癌比较，○P＜0.05。

子宫内膜组织　n　hTERCmRNA(%)ASPP2mRNA正常子宫内膜20　4.34±1.84　1.61±0.19单纯增生组织　28　5.79±1.96　1.32±0.16*复合增生组织　29　10.34±1.62* #　0.96±0.09* #不典型增生组织　26　15.57±2.19* #△　0.70±0.08* #△子宫内膜癌　45　21.42±4.05* #△○　0.69±0.07* #△

2.3 hTERC、ASPP2mRNA表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系见表2。

表2　hTERC、ASPP2mRNA表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系()

表2　hTERC、ASPP2mRNA表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系()

临床病理参数　n hTERCmRNA(%)P　ASPP2mRNA P临床分期Ⅰ期　23　21.24±3.85　0.91±0.09Ⅱ期　17　24.62±4.32＞0.05 0.77±0.09＜0.05Ⅲ、Ⅳ期　5　26.58±4.91　0.61±0.07分化程度高分化　18　21.52±3.75　0.88±0.08中分化　12　25.01±4.62＜0.05 0.75±0.08＜0.05低分化　15　30.39±5.01　0.64±0.09浸润深度内膜层　20　20.42±4.24　0.89±0.10 ≤1/2肌层　19　26.15±4.36＜0.05 0.71±0.07＜0.05 ＞1/2肌层　6　31.24±5.27　0.70±0.08淋巴结转移无37　21.46±4.26　＜0.050.82±0.09＜0.05 有8　30.24±5.05　0.64±0.07

3　讨论

hTERC是合成端粒重复序列的模板，是端粒酶活性必需的核心组分之一，能够延长端粒和保持其稳定，且单一外源性TERC就能增强细胞的增殖潜能及端粒酶的活性，因此hTERC基因在端粒酶活性的上调中起重要作用［3～5］。研究已证实，hTERC基因在宫颈癌组织中异常扩增，但其在子宫内膜癌中的表达情况研究较少。Paul-Salojedny等［6］发现，子宫内膜癌组织中hTERC阳性率(85.7%)高于正常子宫内膜组织(37.5%)。提示hTERC在子宫内膜癌的发生中起重要作用。Yokoyama等［7］发现，用于清除hTERC模板区的36-核酶能抑制子宫内膜癌细胞系的端粒酶活性，导致癌细胞凋亡。提示将hTERC模板区作为核酶的靶分子，降低端粒酶活性，有望成为子宫内膜癌靶向治疗的新靶点。本研究显示，在子宫内膜癌变过程中，hTERC基因表达逐渐增高，提示其在子宫内膜癌发生发展中具有重要作用。

ASPP2是p53结合蛋白家族促凋亡成员，通过增强p53的促凋亡基因启动子与DNA结合而促进细胞凋亡［8，9］。动物实验显示，ASPP2等位基因具有明显的肿瘤抑制作用，可抑制肿瘤的发生［10，11］。最近研究表明，ASPP2可通过其N端结构，以非p53依赖途径发挥其生物学功能。ASPP2通过N端与RAS结合，由RAS/RAF途径促进细胞衰老，从而抑制肿瘤［12，13］。亦可通过其他机制来完成细胞的损伤修复和诱导凋亡［14，15］，如与p53高度同源的p73和p63分子结合。本研究显示，在正常子宫内膜及子宫内膜单纯增生组织、复合增生组织、不典型增生组织、内膜癌的连续病变中，ASPP2基因表达逐渐减少或缺失。支持ASPP2基因突变失活导致ASPP2蛋白低水平表达，从而失去了对细胞生长、增殖的负调控作用，促进肿瘤发生发展的观点，证实ASPP2低表达是子宫内膜癌的早期分子事件。

本研究显示，在子宫内膜组织中，hTERC、ASPP2mRNA表达呈负相关，且二者基因表达与子宫内膜癌的临床分期、组织学分级有关。表明二者在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用，有助于子宫内膜癌的早期诊断和预后判断。

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收稿日期:( 2015-02-28)

通信作者:田晶

文章编号:1002-266X(2015)34-0038-03

文献标志码:B

中图分类号:R737.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.016