INF-γ、ADA和ESAT-6在结核性脑膜炎诊断中的应用价值



INF-γ、ADA和ESAT-6在结核性脑膜炎诊断中的应用价值

刘霞1，覃玫2，唐丽坤2

(1.桂林市人民医院 检验科；2.神经内科,广西 桂林541002)

结核性脑膜炎(结脑)是由结核杆菌引起的脑膜非化脓性炎症，其临床症状不典型，但病情进展迅速，死亡率高，及时诊断和治疗是减轻后遗症和降低死亡率的关键所在。INF-γ、ADA和ESAT-6在结脑患者脑脊液中的异常表达对其诊断有辅助诊断价值，现报道如下。

1资料与方法

1.1研究对象所选研究对象均为桂林市人民医院2010年1月-2013年12月间住院的患者，结脑组65例，男34例，女31例；年龄14-76岁，平均(36+18.5)岁，其诊断符合文献[1]的标准。对照组30例为本院同期住院的患者，排除中枢神经系统感染和肿瘤，男16例，女14例，年龄14-70岁，平均(33.5+14.5)岁。

1.2研究方法

1.2.1标本采集和处理患者于入院后24 h内无菌条件下腰椎穿刺留取脑脊液2 ml，3 000 r/min离心10分钟，取上清液贮存于-20℃冰箱保存，结脑组恢复期再次取样备检。

1.2.2检测方法INF-γ和ESAT-6检测用ELISA方法，ADA检测用酶动力学终点法。

2结果

2.1结脑组急性期、恢复期和对照组INF-γ、ADA和ESAT-6检测结果分析结脑组急性期INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平显著高于其恢复期表达水平，也显著高于对照组表达水平(P<0.05)，见表1。

表1　结脑组急性期、恢复期和对照组INF-γ、ADA和ESAT-6检测结果

注:结脑组急性期与恢复期和对照组比较,*P<0.05

2.2结脑患者重症组、轻症组和对照组INF-γ、ADA和ESAT-6检测结果分析结脑组中重症组INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平显著高于轻症组，轻症组INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平显著高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2　结脑组中轻症组、重症组与对照组INF-γ、ADA

注:重症组与轻症组比较,*P<0.05；轻症组与对照组比较,ΔP<0.05

2.3INF-γ、ADA和ESAT-6三个指标单个检测、二联检测和三联检测的灵敏性分析单个指标检测灵敏性较低，二联检测和三联检测能提高其灵敏性，见表3。

表3　三项指标单独和联合检测结果

3讨论

结脑的诊断主要依据典型的临床表现，脑脊液涂片找结核杆菌和结核菌培养，头颅CT辅助检查等，但许多病例症状不典型，涂片找结核杆菌阳性率低，培养时间长等缺点导致漏诊和误诊。近年来，免疫学的发展发现一些细胞因子和蛋白在结脑疾病发生和发展中发挥重要作用。

干扰素-γ(INF-γ)是由T淋巴细胞和大颗粒淋巴细胞在结核抗原刺激后产生的一种细胞因子，是免疫调节蛋白，其参与机体对结核杆菌细胞免疫，活化巨噬细胞及其溶酶体活性，促进结核杆菌抗原递呈[2]。INF-γ的免疫功能具有双重效应，高浓度的INF-γ加强免疫反应，导致中枢神经系统损伤；另一方面，免疫效应有利于机体对抗原的清除,起保护机体的作用[3]。赵日光等[4]研究表明，结脑组脑脊液中INF-γ浓度显著高于病毒性脑膜炎组，敏感性为86.5%,特异性为94.2%。

腺苷脱氨酶(ADA)是人体嘌呤类核苷代谢中的重要酶，可催化腺苷产生不可逆的脱氨基反应，其功能与淋巴细胞的激活和分化有关。Chotmongkol[5]通过研究177例患者脑脊液中ADA的活性，认为CSF中ADA水平是早期诊断结脑的重要指标。朱敏等[6]研究表明，结脑组脑脊液中ADA的活性明显高于对照组，同时应用ROC曲线对ADA在诊断结脑时的临床准确性进行了评价，当取COV 7.75U/L，其诊断的敏感性为87%，特异性为94.1%。

早期分泌性靶抗原-6(ESAT-6)是结核杆菌早期分泌性低分子蛋白，主要存在于致病性结核杆菌，而不存在于牛型分枝杆菌及大部分环境中的分枝杆菌中。Murakami S等[7]认为ESAT-6可以作为非结核病流行区结核杆菌感染的标志。何俊瑛等[8]用免疫组化法对结脑患者进行了脑脊液单核细胞内ESAT-6检测，发现其灵敏度为70%，特异度达到95%。杨笑等[9]研究42例结脑患者38例脑脊液单核细胞内ESAT-6检测呈阳性反应，阳性率为90.5%。张昆南等[10]采用脑脊液抗原负压浓缩技术检测ESAT-6，敏感性为91.4%，特异性为94.3%。

本研究中结脑患者急性期INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平明显升高，显著高于其恢复期表达水平，也显著高于对照组表达水平(P<0.05)，恢复期与对照组间表达无明显区别(P>0.05)。重症组INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平显著高于轻症组，轻症组INF-γ、ADA和ESAT-6表达水平显著高于对照组(P<0.05)。单独检测其中一项，敏感性、特异性和准确性最高为81.54%、90.00%和84.21%；二项联合检测，敏感性、特异性和准确性最高为87.69%、86.67%和85.26%；三项联合检测，敏感性、特异性和准确性高达92.31%、80.00%和88.42%。

总之，INF-γ、ADA和ESAT-6在结脑患者脑脊液中表达水平显著升高，其表达水平的动态变化对疾病的诊断和病情的评估具有重要的临床意义，联合检测能提高阳性检出率。

参考文献：

[1]中华医学会．临床诊疗指南(结核病分册)[M]．北京：人民卫生出版社．2005：1-55．

[2]朱飞,张家堂,邢小微,等.IL-8、MMP-9、INF-γ的检测对结核性脑膜炎及病毒性脑膜炎发病的意义[J].中华神经医学杂志,2012,11(8):838.

[3]李志惠,崔丹,赵杰,等.结核性胸膜炎胸液结核分枝杆菌特异性INF-γ与ADA的关系[J].河北医药,2013,35(21):3232.

[4]赵日光,姜彬.结核性脑膜炎脑脊液γ-干扰素检测的临床价值[J].华北煤炭医学院学报,2011,13(5):604.

[5]Chotmongkol V,Y Teerajetgul,C Yadwut,et al．Cerebrospinal fluid adenosine deaminase activity for the diagnosis of tuberculoua meningitis in adults[J]．Southeast Asian J Trop Med Public Health,2006,37(4):948.

[6]朱敏,范玉美,陈园园.6种标记物诊断结核性脑膜炎的临床价值[J].浙江中西医结合杂志,2009,19(1):18.

[7]Murakami S，Takeno M，0ka H，et al.Diagnosis of tuberculous meniningitis due to detection of ESAT-6 specific gamma interfero production in cerebrospinal fluid enzyme-linked immunospot assay[J]．Clin Vaccine Immunol，2008,15(5)：897．

[8]何俊瑛,刘士甫,朱艳霞,等．脑脊液单核细胞内ESAT-6检测对结核性脑膜炎的诊断意义[J]．脑与神经疾病杂志,2010,18(3):209.

[9]杨笑,郭旻,谢鹏.脑脊液单核细胞内ESAT-6对结核性脑膜炎的诊断价值[J].中国神经精神疾病杂志,2012,38(6):330.

[10]张昆南,许自强,吴晓牧,等.脑脊液中检测结核分枝杆菌特异性抗原对结核性脑膜炎的诊断意义[J].中华神经科杂志,2011,44(2):86.

文章编号：1007-4287(2016)01-0047-04

(收稿日期：2014-08-20)