四种灵芝产品中多糖和三萜含量的比较*

叶丽云，鲁 欣，吴恩典，杨春秀，吴小平

（福建农林大学菌物研究中心，福建 福州 350002）

四种灵芝产品中多糖和三萜含量的比较*

叶丽云，鲁 欣，吴恩典，杨春秀，吴小平**

（福建农林大学菌物研究中心，福建 福州 350002）

以市场上的灵芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子实体和精粉共4种灵芝产品为研究对象，比较分析其活性成分三萜和多糖含量的差异。应用光学显微镜比较破壁孢子粉与未破壁孢子粉的差别、热水浸提法提取多糖、苯酚－硫酸法测定多糖含量、醇提法提取三萜、香草醛－冰醋酸法测定三萜含量、高效液相色谱法（HPLC）检测灵芝酸。结果显示精粉中多糖含量为52.40 mg·g－1，显著高于其他三者，破壁与未破壁孢子粉多糖含量为（21.32±1.11）mg·g－1，差异不显著，但高于子实体的9.83 mg·g－1。而子实体中三萜含量却是最高的，为4.97 mg·g－1，破壁孢子粉中三萜含量为2.23 mg·g－1，明显高于未破壁的1.10 mg·g－1。通过对比4种产品的三萜指纹图谱发现，子实体和精粉中的灵芝酸种类远远多于破壁及未破壁孢子粉中的，且不同产品中有相同的组分。

灵芝产品；多糖；三萜；高效液相图谱

灵芝（Ganoderma lucidum） 作为一种我国传统的药用真菌，享有“仙草”、“瑞草”等美称，早在2000多年前的《神农本草经》中就有关于灵芝的记载，被认为具有益心气、安精魂、补肝益气、坚筋骨的作用。明朝李时珍编著的《本草纲目》中记载灵芝具有“滋补强壮、延年益寿、利关节、治耳聋”等功效[1]。目前灵芝的临床应用研究表明，灵芝具有很好的药理活性，对于治疗高脂血、高血压、糖尿病等疾病具有很好的疗效，同时也具有防止更年期综合症、增强记忆力等作用[2]。

随着对灵芝价值的不断探索，灵芝的药用价值不断被开发，市面上灵芝产品也越来越多。不同的灵芝产品功效却不尽相同。汤坤鹏等[3]用灰色关联分析法指出不同菌种的灵芝有效成分差异极大。杨巍等[4]发现灵芝精粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫作用优于灵芝孢子粉。杨新林等[5]研究指出破壁处理有利于灵芝孢子粉中化学成分的提取，而破壁孢子粉的醇提取液的抗肿瘤活性比未破壁的孢子粉强。汤莹等[6]利用透射电镜观察破壁孢子粉A549的超显微结构，得出破壁孢子粉对人肺癌细胞具有显著抑制作用的结论。林玮等[7]发现破壁灵芝孢子粉及灵芝提取物的混合物能够改善小鼠的睡眠。黄晓兰等[8]研究指出破壁孢子粉多糖含量较未破壁孢子粉高出70%。

本研究是对灵芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子实体和精粉（灵芝子实体粉末的水提物烘干）这四种灵芝产品中的主要活性物质（三萜和多糖）进行比较分析，以期为选购灵芝产品提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

已弹射完孢子的子实体、破壁孢子粉、未破壁孢子粉及灵芝精粉，所有产品均购买于福建某公司。

无水乙醇、氯仿、正丁醇、葡糖糖、硫酸、苯酚、香草醛、冰醋酸、甲醇等，均为分析纯。

1.2 多糖的提取和测定

称取2 g灵芝样品（子实体需研磨成粉末状），经90℃热水浸提后收集提取液，加入3倍体积的无水乙醇过夜后，加入Sevag溶液，剧烈振荡以除去蛋白，取上清蒸馏水定容至25 mL。多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法[9-10]。

1.3 三萜的提取和测定

称取2 g灵芝样品（子实体需研磨成粉末状），加入30 mL的85%乙醇，常温浸提，2 h后在超声功率150 W下超声0.5 h，用旋转蒸发仪60℃抽滤，减压蒸馏除去乙醇，用甲醇来溶解，用容量瓶定容至25 mL。

三萜含量的测定采用香草醛-冰醋酸法。吸取每个样品0.25 mL至具塞试管中，60℃恒温水浴锅中蒸发去除甲醇溶剂，向管中加入0.4 mL刚刚配制好的5%香草醛-冰醋酸溶液和1.0 mL的高氯酸，摇匀，在65℃恒温15 min后冷却至室温，并加入5.0 mL的冰乙酸，摇匀后置于室温下30 min后，采用分光光度法测定。

1.4 灵芝酸种类的比较

高效液相法（HPLC）检测。将提取液通过0.45 μm的有机微孔过滤膜备用，在黄生权[11]等的基础上以乙腈（A）-0.1%乙酸水（B）的梯度洗脱系统，检测波长为254 nm，柱温为40℃，流速为0.8 mL·min-1，进样量为10 μL。

2 结果与分析

2.1 破壁与未破壁孢子粉的显微形态

在光学显微镜下检测破壁孢子粉与未破壁孢子粉，其结果如图1所示。未破壁的孢子粉孢子完整，而破壁的孢子粉破壁效果较好。

图1 灵芝未破壁与破壁孢子的显微结构Fig.1 Microstructure of nonbroken spores and sporoderm-broken powder of Ganoderma lucidum

2.2 不同灵芝产品中的多糖含量

使用热水浸提不同产品中的多糖，其结果如图2所示。

图2 不同灵芝产品中的多糖含量Fig.2 Polysaccharides content of different Ganoderma lucidum materials

由图2可见，精粉中的多糖含量非常高，达到52.40 mg·g-1，极显著高于其他产品（P<0.01）。未破壁与破壁孢子粉中提取出的多糖含量均为（21.32± 1.11） mg·g-1，两者间没有显著差异，但是却都极显著高于子实体中提取多糖含量（9.83 mg·g-1）。

2.3 不同灵芝产品中的三萜含量

采用醇提法提取不同灵芝产品中的三萜，测定结果见图3。

由图3可见，子实体中三萜含量最高，达到4.97 mg·g-1，极显著高于其他产品（P<0.01)。破壁孢子粉中的三萜含量2.23 mg·g-1，极显著高于未破壁孢子粉中的含量1.10 mg·g-1。

图3 不同灵芝产品中的三萜含量Fig.3 Triterpenoids content of different Ganoderma lucidum materials

2.4 不同灵芝产品中灵芝酸种类的HPLC指纹图谱差异

以灵芝酸A为标准品，采用高效液相法检测不同产品中获得的三萜的指纹图谱差异，其结果见图4。S1为子实体、S2为精粉、S3为未破壁孢子粉、S4为破壁孢子粉、R是以S1为参照生成的对照峰。

图4 不同灵芝产品中的三萜HPLC图谱Fig.4 HPLC spectrum of triterpene compounds of different Ganoderma lucidum materials

从图4中可以发现，子实体和精粉中的灵芝酸的种类远远多于破壁及未破壁孢子粉。不同产品中有相同组分，但也有不同组分。例如在第39分钟的峰，只存在于孢子粉中。不同灵芝产品中三萜的HPLC图谱相似性见表1。

表1 不同灵芝产品中的三萜HPLC图谱相似性Tab.1 Similarity of triterpene HPLC spectra of different Ganoderma lucidum materials

从表1中可以看出，子实体和精粉、破壁孢子粉与未破壁孢子粉相似性较高，但仍存在差异。

3 讨论

经过对购买于市面的灵芝产品多糖与三萜含量进行分析，我们可以发现灵芝的水提物烘干后得到的精粉中多糖含量极显著高于其他产品，达到了55.87 mg·g-1，其三萜含量却低于子实体，推测可能是该公司在生产精粉时添加了糊精等物质，使其多糖含量大大提高。破壁孢子粉中多糖含量虽与未破壁孢子粉相比差异不显著，但是其三萜含量却是显著高于未破壁孢子粉的，从而也证实了杨新林等[5]指出的破壁处理有利于灵芝孢子粉中化学成分的提取的说法。对比4种产品中的HPLC图谱可以发现，子实体和精粉中所含有灵芝酸的种类明显多于孢子粉中，但是孢子粉中也存在一些在子实体和精粉中所不具有的组分。

[1]李时珍.本草纲目[M].北京：人民卫生出版社，1987：577.

[2]林志彬.灵芝的临床应用研究进展（摘要）[J].食药用菌，2015，23（5）：280-281.

[3]汤坤鹏，刘盛荣，吴小平，等.灰色关联度法筛选适合液体深层发酵灵芝菌株[J].核农学报，2015，29（10）：1963-1969.

[4]杨巍，张英林，牛坤伟，等.灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响[J].中国生物制品学杂志，2012，25（9）：1171-1175.

[5]杨新林，朱鹤孙，赵东旭，等.灵芝破壁孢子与不破壁孢子的显微镜观察与生化测定比较研究[J].中草药，1997，28（12）：721-723.

[6]汤莹，韩森，沈亚峰，等.破壁灵芝孢子粉对人肺癌细胞超显微结构影响及抑制作用[J].解刨学杂志，2015，38（1）：18-21.

[7]林玮，韩枫，徐维盛，等.破壁灵芝孢子粉及灵芝提取物的混合物对改善小鼠睡眠功能的研究[J].食品科技，2015，40（11）：172-175.

[8]黄晓兰，吴惠勤，黄芳，等.破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的分析[J].中草药，2006，37（6）：813-816.

[9]徐志祥，李刚，李保健.苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的条件研究[J].食用菌，2000，22（3）：6-7.

[10]刘艳平，蔡红军.不同菌株培养的灵芝中多糖含量测定[J].广州中医药大学学报，1999，16（1）：54-55.

[11]黄生权，姚松君，刘翠玲，等.不同生长时期的灵芝三萜含量测定及变化规律研究[J].现代食品科技，2001，7（8）：1015-1019.

Comparison on the Contents of Polysaccharides and Triterpenes from Different Kinds of Ganoderma lucidum Material

YE Li-yun,LU Xin,WU En-dian,YANG Chun-xiu,WU Xiao-ping
(Mycological Research Center of FAFU,Fuzhou 350002,China)

In this study,based on the materials of Ganoderma lucidum sporoderm－broken,nonbroken spores powder,fruiting body and essence powder of G.lucidum products from market,the differences were analyzed comparatively in the content of active ingredient,triterpenes and polysaccharide.The difference between sporoderm－broken and nonbroken spores powder were compared by optical microscope.The polysaccharide was extracted by hot water and the content were determined by phenolsulfuric acid method.The triterpenoids was extracted by ethanol and the content were determined by vanillin－glacial acetic acid method.High Performance Liquid Chromatography (HPLC)was used in the detection of G.lucidum acid.The results showed that the content of polysaccharide of essence powder(52.40 mg·g－1)was significantly higher than that of the other three.The difference of polysaccharide content[(21.32±1.11)mg·g－1]between sporoderm－broken and nonbroken spores powder were not significant,but it was higher than that in fruiting body (9.83 mg·g－1).However,the content of triterpenes of fruiting body (4.97 mg·g－1)was the highest,and that of sporoderm－broken (2.23 mg·g－11)was significantly higher than that in nonbroken spores powder(1.10 mg·g－1).By comparing the four kinds of materials’HPLC spectrum of triterpenes,it found that the G.lucidum acid in fruiting body and essence powder were far more than sporoderm－broken and nonbroken spores powder,and different materials had the same composition.

Ganoderma lucidum;products;polysaccharide;triterpenes;HPLC spectrum

S646.9

A

1003-8310（2016）05-0034-03

10.13629/j.cnki.53－1054.2016.05.009

福建省种业创新与产业化工程专项项目（2014S1477－21）。

叶丽云（1991－），女，在读硕士研究生，主要研究方向为食用菌遗传育种。E－mail:906613508＠qq.com

**通信作者：吴小平（1965－），男，博士，教授，主要从事食用菌教学与科研工作。E－mail:fjwxp＠126.com

2016－07－10