蛋鸡禽流感免疫程序的制定及推广应用

杨　峰，方　英，徐春志，陈　红，袁翠霞，彭　屹，白　璧（贵州省贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳550081）



蛋鸡禽流感免疫程序的制定及推广应用

杨峰，方英，徐春志，陈红，袁翠霞，彭屹，白璧
（贵州省贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳550081）

禽流感（Avian influenza，AI）是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒的禽流感病毒（AIV）所引起禽类烈性、传染性疫病，鸡感染AIV后机体高热，采食和产蛋下降等，1878年意大利首次报道暴发禽流感至今已有120多年的历史。该病的流行给世界养禽业造成极大危害和经济损失，高致病性毒株感染时，易感禽发病率、死亡率均可达100%，并能直接感染人类，因此，本病目前已成为危害严重的人畜共患病。

为科学有效防控蛋鸡群禽流感的发生，提高蛋鸡生产性能，本试验通过采用血清学方法对规模蛋鸡养殖场进行了鸡群母源抗体与免疫抗体消长规律的测定，从而制定了科学合理的免疫程序，并在蛋鸡群中进行了推广应用比较。

1　材料与方法

1.1样本选择贵州省4个规模蛋鸡养殖场，按研究需要分别采集不同日龄蛋鸡血清样本共计555份（用于母源抗体消长动态测定140份、免疫抗体消长动态测定175份和免疫程序推广应用前后比较240份），并随机采集临床健康蛋鸡泄殖腔棉拭子120份。

1.2试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原、阳性血清、阴性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司；1%红细胞悬液，本试验自行制备；禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒，购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

1.3母源抗体消长动态测定采用正向间接血凝抑制试验（HI）对不同日龄（1、6、11、16、21、26、31日龄）雏鸡血清样本140份进行抗体检测，从而测定蛋鸡母源抗体消长动态。抗体效价≥5 log2判为阳性。

1.4免疫抗体消长动态测定采用HI对二次免疫后不同饲养阶段（二次免疫后第27、58、86、123、141、170天）的175份蛋鸡群血清样本进行抗体检测，从而测定免疫抗体消长动态。抗体效价≥5 log2判为阳性，根据农业部规定，群体免疫抗体阳性率达70%判为免疫合格。

1.5免疫程序制定根据母源抗体及免疫抗体消长动态测定结果，制定蛋鸡禽流感科学免疫程序。

1.6免疫程序推广应用效果比较将制定出的禽流感免疫程序于A、B、C、D 4个规模蛋鸡养殖场推广应用，采集推广前后鸡群血清样本每场各30份，计240份，进行免疫抗体水平监测，从而比较免疫程序推广前后疫苗免疫保护效果。并以RT-PCR方法对推广前后鸡群中病原核酸进行检测，比较推广前后鸡群隐性感染状况。

2　结果

2.1母源抗体消长动态测定结果以HI测定不同日龄雏鸡血清样本140份母源抗体效价，结果见表1。

表1　禽流感母源抗体消长动态测定

由表1可知，雏鸡群禽流感母源抗体水平在1日龄至6日龄呈现轻微上扬趋势；从6日龄以后，抗体水平随着雏鸡日龄增加而呈现下降趋势；至16日龄时禽流感母源抗体几何平均效价仅为3.4 log2，抗体阳性率降至20%，低于农业部抗体保护水平≥70%要求，至21日龄时相应降为2.1 log2和0 log2。因此，应于雏鸡16～20日龄时进行禽流感疫苗首免。

2.2免疫抗体消长动态测定结果以HI测定蛋鸡群多次免疫后不同日龄鸡175份血清样本抗体效价，结果见表2。

表2　蛋鸡群多次免疫后抗体消长动态

由表2可知，二次免疫后，蛋鸡群禽流感免疫抗体呈现逐步下降趋势。从免疫后第27天至123天，群体免疫合格率达农业部要求；至第141天，免疫抗体逐步失去保护力，降至66.9%。因此，应于二次免疫后第123～141天加强免疫1次。

2.3免疫程序制定根据蛋鸡母源抗体与免疫抗体消长动态测定结果，确定出蛋鸡禽流感疫苗首免及多次免疫时间，从而制定出较为科学合理的蛋鸡禽流感免疫程序，见表3。

表3　蛋鸡禽流感免疫程序

2.4免疫程序推广应用效果比较

2.4.1免疫保护率比较选取贵州省4个规模蛋鸡养殖场（A、B、C、D场），将所制定蛋鸡禽流感免疫程序于上述场中推广应用，采集推广前后鸡群血清样本每场各30份进行免疫抗体监测，从而比较免疫程序推广前后疫苗免疫保护效果，结果见表4。

表4　推广前后鸡群禽流感免疫保护率监测

由表4可知，将所制定免疫程序推广应用后，4个场中蛋鸡群禽流感免疫保护率均有不同程度提高，总体免疫保护率提高了11个百分点，表明所制定蛋鸡禽流感免疫程序可行，且效果较好。2.4.2隐性感染带毒检测随机采集推广前后4个规模蛋鸡养殖场临床健康鸡群泄殖腔棉拭子120份，以H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒进行禽流感病毒核酸检测。结果见表5。

表5　推广前后鸡群禽流感病毒隐性感染检测

由表5可知，将所制定免疫程序推广应用后，4个场中蛋鸡群禽流感病毒隐性感染情况均有不同程度下降，总体病毒感染率下降了8个百分点，表明所制定蛋鸡禽流感免疫程序可有效保护鸡群感染禽流感病毒。

3　讨论

免疫预防是控制禽流感发生的有效手段，首次免疫最佳时间的确定则是做好免疫工作的一个关键。虽然母源抗体能在短时间内对雏禽抵御病毒感染产生一定的保护力，但同时又会对疫苗接种的免疫应答进行干扰而降低免疫效果[1]。本试验通过采用血清学方法对140份不同日龄雏鸡血清样本进行抗体检测，探寻禽流感母源抗体在蛋鸡群中消长动态，发现雏鸡母源抗体至21日龄时降为最低保护值，确定了蛋鸡禽流感疫苗最佳首免日龄为16～20日龄，这与其他研究报道一致[2]。同时，通过对175份二免后不同生长阶段的蛋鸡血清样本进行抗体检测，发现在二免后第123天群体免疫保护率开始下降，至第141天失去保护力，确定了补免日期，也为制定科学的蛋鸡禽流感免疫程序提供了依据[3]。

本试验制定了蛋鸡禽流感免疫程序，并在4个规模蛋鸡养殖场推广应用。发现在推广前后，4个场的蛋鸡群禽流感免疫合格率均有不同程度提升，总体免疫合格率提高了11个百分点，表明所制定的免疫程序较符合蛋鸡生产，且效果较好。另外，为检验免疫程序推广对鸡群带毒影响情况，本研究随机采集了推广前后鸡群泄殖腔棉拭子，以H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒对禽流感病毒核酸进行了检测。结果鸡群总体禽流感隐性感染率降低了8个百分点，表明所制定的免疫程序能够有效防控禽流感病毒隐性感染鸡群。

尽管本研究所制定蛋鸡禽流感免疫程序推广应用效果较好，但仅针对于高致病性禽流感疫苗免疫进行了相关试验。研究表明[4-5]，免疫方式、免疫时间、疫苗干扰等因素通常会影响鸡群抗体水平。因此，更为高效、科学地防控蛋鸡禽流感感染，在后续试验中应从不同疫病接种时间、方式对禽流感疫苗的影响着手，逐步建立广谱性强的蛋鸡群疫病免疫程序。

参考文献：

[1]付丽伟.关于禽流感母源抗体消长规律的初步研究[J].家禽科学，2013（2）：44-45.

[2]韩庆安，井水兰，王金凤，等.高致病性禽流感灭活疫苗免疫抗体消长规律研究[J].中国动物保健，2014（1）：29-31.

[3]刘海侠，邢军，许孝宙，等.江苏部分蛋鸡群新城疫与H5亚型禽流感免疫抗体HI效价的测定[J].畜牧与兽医，2013，45 （8）：115.

[4]祁君，艾尼阿木提，艾力江，等.不同禽流感疫苗和不同接种方式免疫家禽效果对比试验[J].畜牧与兽医，2012，44（12）：104-105.

[5]池建峰.影响禽流感免疫效果的因素分析[J].湖北畜牧兽医，2012（5）：35-36.

通讯作者：方英，E-mail：fy6565@126.com

作者简介：杨峰（1980-），男，兽医师，硕士，从事动物防疫工作，E-mail：506031129@qq.com

收稿日期：2014-05-23

中图分类号：S831

文献标志码：B

文章编号：0529- 6005（2016）01- 0064- 02