浅谈如何做好禽流感的检测工作

张 雁

（酒泉市肃州区银达镇畜牧站，甘肃酒泉 735000）

浅谈如何做好禽流感的检测工作

张 雁

（酒泉市肃州区银达镇畜牧站，甘肃酒泉 735000）

已知的流感病毒分 A、B、C3 个血清型。A 型的为人畜（禽）共患，B、C 型仅对人致病。禽流感则是由 A 型禽流感病毒引起的传染病，又称真性鸡瘟（欧洲鸡瘟）。按流感病毒的致病性不同分为 3 类：高致病性毒株如 H5N1、中弱毒株如 H9N2和无毒株。虽然禽流感病毒血清型很多，分离毒株上千株，但有致病性的毒株占极少数，大多数为无毒株，只有高致病性禽流感病毒才对养禽业造成毁灭性的损失。

禽流感；抗体检测；免疫

禽流感早期又称真性鸡瘟、欧洲鸡瘟。近几年，许多国家和地区相继暴发本病。在病毒学上，禽流感病毒属于正粘病毒科A型流行性感冒病毒属。禽流感病毒根据血凝素（HA）分为16个亚型（分别为H1-H16）；根据神经氨酸酶（NA）可分为10个亚型（分别为N1-N10）。临床上常见的血清型毒株有H9N2、H5N1、H7N3等。这些禽流感病毒在不同禽类品种上表现的临床症状和病理变化不尽相同。

禽流感监测最为常用的是微量红细胞凝集抑制试验（HI检测），其优点是所用仪器设备简单，操作简便、快速等，在基层兽医实验室及养禽场普遍应用。但常因不能正确熟练地掌握这一技术或试验条件不具备，而影响监测结果，从而错失免疫良机，造成疫情发生，遭受严重损失。现将禽流感监测工作应注意的几个问题，浅析如下：

1 正确采样

1.1 采样时间

应根据抗体产生的规律，在免疫后21～30 d左右进行采样监测，依此结果来判定免疫质量和鸡群免疫后抗体水平，指导免疫工作的进行。如果只简单地随机采样，就会出现：（1）刚刚免疫后就采样 这时抗体水平还未上升，其测的结果，不能说明免疫工作做得好坏。（2）免疫后期采样 在免疫后期或是超过免疫期的时间采样监测时，其抗体水平必然会下降，这是正常的。此时测得的结果不能认为是免疫失败，而是采样监测时间较晚。应及时采取免疫措施。

1.2 采样登记

在采样时，应注意将鸡舍栋号、品种、代次、日龄、规模、采样数量、免疫情况（免疫程序、时间、疫苗种类、疫苗生产厂家、免疫质量等）进行详细登记。以便监测后进行结果的分析和判断，为免疫工作提供科学依据。

1.3 采样数量

采样数量少，测得的结果不能代表全群抗体水平。因此，采血时，应根据鸡群数量多少，按照一定的比例采样。一般鸡群500羽要采10～15羽；1 000羽鸡群要采15～20羽；2 000～4 000羽鸡群要采20～25羽；5 000羽以上的鸡群采30羽，并要求随机采样。

1.4 采样操作

现多采用塑料管引流采血，其优点是简便、快速，对鸡只损伤小，封存后便于携带、存放和分离血清。采样前，把塑料管剪成6～8 cm长各段，采样时，要一鸡一针一管，血量不得少于管长的三分之二，否则血量过少，分离到的血清不足，监测的结果不准确。同时塑料管的一端一定要烧融封闭好，以免分离时漏掉血清。如果用注射器采血，可用干净消过毒的小离心管盛血，血液要放成斜面，不能直立，否则不易分离出血清。还要防止振动过猛或变质造成溶血，如有血样溶血不能用。另外，还应在塑料管或离心管上标明编号，以便区分。

2 采集血样析出血清

除了离心分离血清外，如果想让血清自然析出，不要急于将血样放入冰箱内。一般说气温在23℃以上时，采集完的血样放置2～3 h，就可以析出清亮的血清。但气温为10℃以下的时候，采集完的血样血清很难自然析出，最好立即将血样管放入37℃培养箱中孵育2～3 h，可见血清析出。待血清析出后再次放入4℃冰箱内，这样不但有利于血清的析出，又可避免溶血现象的发生。被检血清，应无溶血，无杂菌污染，保存于4℃15d内检查。如果血清待检超过15d，需低温冰冻保存。

3 配成1%红细胞悬液

标准采样应将多只鸡血混合，制成红细胞液，减少有的鸡红细胞有自凝现象的干扰。采血时要采非免疫成年健康公鸡的血。针管内加3.8 %的枸椽酸钠抗凝，从翅静脉（或心脏）采血。若采免疫鸡的血，要充分洗去血清及其它物质，一般洗7～8次。配成1%红细胞悬液，4℃冰箱中可保存3 d，时间再长会发生溶血，最好现配现用，得出的结果快且明显。切记，在使用前必须把红血球混匀，并不时地摇动。

4 浓度要准确的配制抗原

当抗原浓度高时，HI滴度就下降；当抗原浓度低时，HI滴度就会上升。用血凝试验测出标准抗原的效价，倒退2孔，为此病毒的4个血凝单位抗原。为保证抗原的配制准确无误，需作抗原回归试验。一般来说，抗原开启后，放在4℃冷藏，在一个月内，抗原效价变化不大，每次检测时根据样品量多少来配制工作抗原，保证HI检测结果的准确，不会因为工作抗原配制不准确而反复进行抗原回归试验造成浪费时间。4个血凝单位抗原需现配现用。

5 掌握稀释液pH值

稀释液pH值为5.8以下时，红细胞会发生自凝现象，从而影响监测结果。pH值为7.8以上时，吸附在红细胞上的病毒易脱落，即凝聚图形易消失，会造成观察误差。pH值为7.0时，红细胞沉降最充分，图形最清晰，HI滴度最大。试验证明，使用pH值为7.0～7.2的磷酸缓冲（PBS）比使用pH值为7.0～7.2的生理盐水作稀释液的效果好。

6 小结

商品代肉鸡、肉鸭，在免疫后 21d 进行 HI 抗体检测，抗体滴度≥4log2 为免疫合格。其他家禽加强免疫后 1 个月进行 HI 抗体水平检测，抗体滴度≥5log2 为免疫合格。存栏禽群免疫合格率必须≥70%。根据 HI 滴度判定禽群禽流感免疫状况还应注意使用疫苗种类、免疫方法、免后时间等，若检测后抗体滴度达不到上述指标，必须查明原因并立即重新进行免疫；若检测的禽群没有进行过禽流感免疫，而 HI 抗体滴度很高，应注意是否有野毒入侵。

禽流感已经给我国养禽业造成巨大损失，我国的各级政府、社会各界对禽流感的防制高度重视，目前我国的禽流感防制研究工作在全面有效开展，且接近国际先进水平。但AIV一直严重威胁着养禽业发展及人类的健康，尤其是我国现有的养殖条件所限，更应加大对禽流感的防制力度。在研究敏感快速的检测方法的同时，禽流感的血清学抗体检测方法仍是目前条件下最重要的监测方法，及早的发现禽流感、对实际生产的指导作用不容忽视。科学运用禽流感抗体检测方法对禽流感防控体系的建立提供切实的技术保障。

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