3种缺血修饰清蛋白试剂盒分析性能的验证试验

何　谦，杨锐华，王　琪

(西安交通大学第二附属医院检验科,陕西西安 710004)



·论著·

3种缺血修饰清蛋白试剂盒分析性能的验证试验

何谦，杨锐华，王琪

(西安交通大学第二附属医院检验科,陕西西安 710004)

摘要:目的验证3种缺血修饰清蛋白(IMA)检测试剂盒的主要分析性能。方法在Olympus AU5800全自动生化分析仪上对上海艾康生物技术有限公司、浙江夸克生物科技有限公司和北京九强生物技术有限公司的比色法IMA试剂(试剂A、B、C)进行性能验证，参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A、EP15-A、EP7-A文件和《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》要求对3种试剂的精密度、线性范围、正确度、抗干扰能力进行评估。结果试剂A、B、C的批内变异系数(CV)分别为0.59%～0.82%，0.27%～0.54%,0.62%～0.69%，批间CV分别为0.98%～1.74%，0.99%～1.01%,0.71%～0.78%,均小于试剂盒声明的不精密度；线性范围分别为11～142 U/mL(相关系数r2=0.993)、10～120 U/mL(r2=0.996)、14～123 U/mL(r2=0.992)，试剂A、B、C的线性范围均良好。当干扰物维生素C小于或等于10 mg/dL，血红蛋白小于或等于200 mg/dL，总胆红素小于或等于40 mg/dL,三酰甘油小于或等于500 mg/dL时，3种IMA试剂检测结果偏差均不超过±10%，对3种试剂无明显干扰。结论3种IMA检测试剂盒均具有较高的精密度，可满足临床要求，但抗干扰能力存在一定的差异。

关键词:缺血修饰清蛋白；比色法；自动分析

缺血修饰清蛋白(IMA)是美国食品药品管理局(FDA)认可的第一个检测心肌缺血的生化标志物[1-2]，它在心肌缺血早期患者的血液中就有变化，且在一次缺血后24 h内血中的浓度恢复至基础水平，因此能够检测复发性缺血。随着IMA临床应用的逐步推广，已有较多实验室开展了血清IMA的检测。本室在Olympus AU5800全自动生化分析仪上对3种清蛋白-钴结合比色法IMA试剂盒的精密度、线性范围、正确度、抗干扰能力等性能进行了分析评价，现报道如下。

1材料与方法

1.1标本来源(1)干扰试验血清：收集患者混合血清用于干扰试验。(2)精密度验证混合血清：将已知IMA浓度的患者血清混合，制备高、低浓度两份混合血清，各分装20份于-20 ℃ 冻存，用于精密度试验。

1.2仪器与试剂(1)仪器：Olympus AU5800全自动生化分析仪。(2)试剂A：上海艾康生物技术有限公司出品的IMA试剂(批号20150204)及其配套校准品；试剂B：浙江夸克生物科技有限公司出品的IMA试剂(批号150317 )及其配套校准品；试剂C：北京九强生物技术有限公司出品的IMA试剂(批号14-0814)及其配套校准品。干扰物维生素C(VitC)由美国Sigma公司提供(批号080M0097V)，血红蛋白(Hb)由美国Merck公司提供(批号D00121602)，总胆红素(TBIL)由美国Frontier Scientific公司提供(批号JH12-6936)，三酰甘油(TG)由华瑞制药提供(批号80GK041)。

1.3方法

1.3.1批内不精密度用3种试剂分别检测低值、高值两份新鲜血清样品，重复20次，计算各试剂两水平的批内变异，并确认其不精密度范围是否与厂商标注的不精密度符合。

1.3.2批间不精密度依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP15-A文件[3]提供的方案，用3种试剂分别测定高、低两个水平的混合血清，连续检测5 d，每天测4次，计算批间变异，并确认其不精密度范围是否与厂商标注的不精密度符合。

1.3.3线性范围评价根据NCCSL EP6-A文件[4]选择接近线性范围上限值的血清标本2～3份，接近下限值的血清标本2～3份，分别混匀，得到本实验所需的低值样品(L)和高值样品(H)。按照0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H的方法配制混合样品，每份样品连续测定3次，并求平均值。判定结果：计算均值与理论值的差异，并将均值曲线与理论曲线进行相关性分析，若相关系数r2>0.95，斜率(b)在0.97～1.03范围内，则可直接判断测定方法在实验所涉及的浓度范围内成线性。

1.3.4干扰试验参考NCCSL EP7-A文件[5]提供的方案并进行部分调整后，将干扰物进行配制，在患者混合血清中加入一定体积的干扰物，干扰物浓度梯度1、1/2、0,按照比例在患者血清中加入VitC、Hb、TBIL、TG；用试剂A、B、C分别测定每个浓度混合血清，计算添加干扰物后测量的偏差(Bias)。超过±10%则判为存在干扰。

1.3.5正确度验证根据《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》[6]这一行业标准，检测厂家提供的定值IMA质控品，计算偏差。超过±10%则判为存在偏差。

1.4统计学处理采用Excel2003及SPSS16．0统计软件进行数据处理与统计学分析，相关性分析采用Pearson相关分析，线性回归采用简单线性回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1批内不精密度3种试剂的实测精密度均小于各自试剂盒标注的5%～10%，变异较小，可满足临床应用。低值与高值血清检测结果及批内变异系数(CV)，见表1。

表1　　3种试剂的批内不精密度

2.2批间不精密度实测批间精密度均小于各自试剂盒标注的5%～10%，可满足临床应用。低值与高值血清检测结果及批间CV，见表2。

表2　　3种试剂的批间不精密度

2.3线性范围试剂A、B、C评价的样品浓度范围分别为11～142 U/mL、10～120 U/mL、14～123 U/mL，预期值与实测值拟合相关方程Y=bX+a中b分别为0.982、0.993、1.007，r2分别为0.993、0.996、0.992，试剂A、B、C的线性范围均良好。

2.4干扰试验VitC≤10 mg/dL，Hb≤200 mg/dL，TBIL≤40 mg/dL，TG≤500 mg/dL时，3种IMA试剂检测结果偏差均不超过±10%，但抗干扰能力存在一定差异。见表3。

表3　　不同浓度干扰物对IMA检测结果产生的Bias(%)

2.5正确度检测各试剂厂家提供的定值质控品，靶值偏差分别为-8.82%、9.30%、-4.49%，均在质控范围内。

3讨论

按照国际标准化组织(ISO)发布的ISO15189要求，临床实验室在使用新试剂之前需要对多项重要性能进行验证。性能验证实验需要简明、可操作性强的实验方案，使用尽可能少的标本数，并得到能够代表临床检测真实情况的实验结果。美国临床实验室改进修正法案(CLIA′88)明确提出临床实验室可只对正确度、精密度和可报告范围进行验证。为证实3种IMA定量试剂盒基本性能的可靠性，笔者依据NCCLS发布的EP15-A、EP6-A文件及《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》的要求，对3种试剂盒的上述主要分析性能进行了验证。结果显示：3种试剂精密度、线性范围及正确度等基本检测性能均可以满足临床检测需求。

本室还参考NCCLS EP7-A文件对3种IMA试剂的抗干扰能力进行了分析评价。本研究采用外源添加VitC、TBIL、Hb及TG 4种常见干扰物的方法对IMA试剂进行了干扰测试，结果显示：3种试剂的抗干扰能力不一，试剂A抗干扰能力最强，试剂B对VitC的抗干扰能力最弱。

根据《WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》要求，采用患者标本与其他检验方法的试剂盒进行比较，或者采用参考物质进行正确度验证试验。由于目前无法购得其他检验方法的试剂盒，且室间质评物质、第三方提供的赋值物质均无法得到，笔者使用了文件推荐的各厂家提供的验证正确性的质控物质进行正确度验证实验，结果均低于厂家声明的允许Bias范围(10%)。

综上所述，3种测定IMA的试剂盒均具有较高的精密度、正确度，线性范围良好，可满足临床要求，但抗干扰能力存在一定的差异。

干扰能力存在一定的差异。

参考文献

[1]吴定昌，黄晓华，卢新兆．急性冠脉综合征患者IMA与hs-CRP、cTnT诊断价值[J]．齐齐哈尔医学院学报，2013，34(9)：1259-1261．

[2]Bar-Or D，Winkler JV，Vanbenthuysen K，et al．Reduced albumin-cobalt binding with transient myocardial ischemia after elective percutaneous transluminal coronary angioplasty:a preliminary comparison to creatine kinase-MB,myoglobin and troponin Ⅰ[J]．Am Heart J，2001，141(6)：985-991．

[3]National Committee for Clinical Laboratory．EP15-A User demonstration of performance for precision and accuracy[J]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2001.

[4]National Committee for Clinical Laboratory．EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2003.

[5]National Committee for Clinical Laboratory．EP7-A Interference testing in clinical chemistry[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2002.

[6]中华人民共和国卫生部．WS/T 420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证[M]．北京：中国标准出版社，2013．

Performance verification of three ischemia-modified albumin reagents

HeQian，YangRuihua，WangQi

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Abstract:ObjectiveTo verify the performance of three kinds of ischemia-modified albumin(IMA) reagents.MethodsThe performance of three IMA reagents(labeled as reagent A,B,C) using colorimetric method from Shanghai Aikang Biotechnology Co.,Ltd.,Zhejiang Kuake Bioscience Technology Co.ltd.and Beijing Jiuqiang Biotechnology Co.,Ltd.were assessed by using Olympus AU5800 automatic biochemistry analyzer.According to the National Committee for Clinical Laboratory(NCCLS) EP6-A,EP15-A and EP7-A documents and WS/T 420-2013 verification of analytical performance of quantitative kits by clinical laboratory,the precision,linearity range,accuracy and anti-interference capability were assessed.ResultsThe within-run coefficient of variations(CVs) of reagent A,B and C were 0.59%-0.82%,0.27%-0.54% and 0.62%-0.69% respectively.The between-run CVs of reagent A,B and C were 0.98%-1.74%,0.99%-1.01% and 0.71%-0.78%,respectively,which were lower than declarations of these reagent kits.The linearity range of reagent A,B and C were 11-142 U/mL(r2=0.993),10-120 U/mL(r2=0.996),14-123 U/mL(r2=0.992) respectively,which showed good linearities.About interference tests,no remarkable interferences(all Bias were less than ±10%) of reagent A,B and C were detected when Vitamin C≤10 mg/dL,hemoglobin≤200 mg/dL,bilirubin≤40 mg/dL and triglyceride≤500 mg/dL.ConclusionThe three IMA reagents show high precision,which could meet clinical requirements,nevertheless,differences of anti-interference capabilities are observed in these three reagents.

Key words:ischemia-modified albumin；colorimetric method；autoanalysis

(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.011

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)05-0606-03

作者简介：何谦，女，主任技师，主要从事临床生物化学与检验研究。