KDR、MC2R和PCNA在产醛固酮腺瘤与肾上腺皮质增生病变中的表达和意义

赵晨晖，周文龙，黄　滔，张志伟，王名伟，张朝晖，楚晨龙，杨安卿，马斌斌



KDR、MC2R和PCNA在产醛固酮腺瘤与肾上腺皮质增生病变中的表达和意义

赵晨晖1，周文龙2，黄滔1，张志伟1，王名伟1，张朝晖1，楚晨龙1，杨安卿1，马斌斌1

［摘要］目的:探讨激酶插入区受体(KDR)、促肾上腺皮质激素受体2(MC2R)和增殖细胞核抗原(PCNA)在产醛固酮腺瘤(APA)与肾上腺皮质增生(IHA)中的表达和意义。方法:应用免疫组织化学技术检测KDR、MC2R和PCNA在APA和IHA病变组织中(各40例)的表达情况。结果:APA组织中KDR、MC2R和PCNA的阳性表达率分别为40．0%、32．5%和85．0%; IHA组织中KDR、MC2R和PCNA的阳性表达率分别为65．0%、62．5%和77．5%; 2种病变组织中，KDR、MC2R和PCNA的表达强度差异均有统计学意义(P＜0．05～P＜0．01)。结论:KDR、MC2R和PCNA在IHA病变的发生、发展中起重要作用，对于鉴别APA和IHA病变具有重要的参考意义。

［关键词］产醛固酮腺瘤;肾上腺皮质增生;激酶插入区受体;促肾上腺皮质激素受体2;增殖细胞核抗原

［作者单位］1．上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院泌尿外科，上海200020; 2．上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科，上海200025

原发性醛固酮增多症在高血压人群中发病率为5%～13%［1］，是继发性高血压常见病因之一。肾上腺皮质增生(IHA)和产醛固酮腺瘤(APA)是原发性醛固酮增多症最常见的2种亚型，其中IHA占60%，APA占35%［2］。基因芯片技术能够研究大量的基因表达变化［3］，通过该技术可筛查出大量的差异表达基因。本文通过对所得数据的研究和国内外文献的检索，选择激酶插入区受体(KDR)、促肾上腺皮质激素受体2 (MC2R)和增殖细胞核抗原(PCNA) 3种表达差异明显的基因，应用免疫组织化学技术，检测KDR、MC2R和PCNA在APA和IHA病变组织中表达情况。

1　资料与方法

1．1病例选择收集我院2010年12月至2012年6月原发性醛固酮增多症患者经手术治疗后APA 和IHA病变组织标本各40例。病理组织切片HE染色，由2位有经验的临床病理学专家阅片诊断，将中间组织块选为实验材料，组织石蜡包埋。

1．2一般资料APA组男18例，女22例;年龄25～69岁。IHA组男14例，女26例;年龄26～70岁。入组患者均有高血压、低血钾等典型临床表现，实验室检查符合原发性醛固酮增多症的诊断，并进一步行甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、血皮质醇、尿皮质醇等检查排除嗜铬细胞瘤及皮质醇增多症。其中IHA组中有15例为双侧病变。入组病例均行肾上腺静脉检查，明确优势分泌侧。

1．3方法

1．3．1 KDR、MC2R和PCNA的检测家兔抗人PCNA单克隆抗体和家兔抗人KDR多克隆抗体购自Abcam公司，家兔抗人MC2R多克隆抗体购自Thermo公司。选用间接免疫组织化学法(免疫组化)，具体操作步骤按说明书进行。

1．3．2对照设置用已知阳性片作阳性对照，以PBS液替代一抗作空白阴性对照，HE染色作组织学对照。

1．4结果判定

1．4．1阳性判定标准KDR和MC2R的阳性标准均为细胞质和/或细胞膜出现淡黄色或棕黄色染色; PCNA以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。

1．4．2阳性细胞计数方法高倍镜下每个视野计数100个细胞，随机观察10个视野(避开大血管和大面积间质)，按照阳性细胞所占百分比与着色强度采用双评分半定量法进行评分。(1)阳性细胞所占百分比评分标准:阳性细胞≤25%为0分，＞25%～50%为1分，＞50%～75%为2分，＞75%为3分; (2)着色强度评分标准:染色阴性0分，染色弱但强于阴性1分，染色清晰2分，染色强3分。将(1)、(2)项评分相加，0～1分为阴性(－)，2～3分为弱阳性(1 + )，4～5分为阳性(2 + )，6～7分为强阳性(3 + )。

1．5图像分析使用IMS图象分析系统［基尔顿生物科技(上海)有限公司产品］。

1．6统计学方法采用秩和检验。

2　结果

2．1 APA和IHA组织中KDR表达的免疫组化结果比较APA组织中KDR表达阳性率40．0%; IHA组织中KDR表达阳性率65．0%。2种组织中KDR的表达强度差异有统计学意义(P＜0．01) (见表1和图1、2)。

2．2 APA和IHA组织中MC2R表达的免疫组化结果比较APA组织中MC2R表达阳性率32．5%; IHA组织中表达阳性率62．5%。2种组织中MC2R的表达强度差异有统计学意义(P＜0．01) (见表2和图3、4)。

表1　KDR在APA和IHA组织中表达情况比较(n)

表2　MC2R在APA和IHA组织中表达情况比较(n)

2．3 APA和IHA组织中PCNA表达的免疫组化结果比较APA组织中PCNA表达阳性率85．0%; IHA组织中PCNA表达阳性率77．5%。2种组织中PCNA的表达强度差异有统计学意义(P＜0．05)(见表3和图5、6)。

表3　PCNA在APA和IHA组织中表达情况比较(n)

3　讨论

目前认为，原发性醛固酮增多症是继发性高血压常见的病因之一，是引发动脉性高血压的第二大致病因素。原发性醛固酮增多症引发的高血压与原发性高血压比较，对器官的损伤更加严重，更易引发心血管疾病［4］。因此，早期治疗原发性醛固酮增多症能够有效地降低心脑血管疾病的发病率和死亡率。治疗原发性醛固酮增多症的关键是去除过多的盐皮质激素及阻断醛固酮激素对靶器官的损伤，而其中最关键的步骤就是明确原发性醛固酮增多症的亚型。原发性醛固酮增多症存在多种亚型，包括APA、产醛固酮的肾上腺皮质癌、原发性肾上腺增生、IHA、糖皮质激素可治愈的醛固酮增多症、异位产生醛固酮的肿瘤［2］。其中IHA和APA是最常见的2种亚型，所占比例为95%，因此越来越多的学者开始研究原发性醛固酮增多症的这2种亚型之间的差异。APA在影像学表现为低密度影，表明肿瘤内部血运不丰富，这可能和肿瘤内部血管的生长有关。

BIECHE等［5］发现，KDR分布于部分肿瘤细胞，对于肿瘤增殖与新血管形成有着重要作用。TAKEKOSHI等［6］发现KDR在嗜铬细胞瘤的发病中起重要作用。应用基因芯片技术已发现APA中KDR表达明显下调，而在IHA病变中表达正常。本研究结果发现，KDR在APA组织中大部分为阴性或低表达，而在IHA病变大部分为高表达。KDR在APA与IHA组织中表达的结果差异有统计学意义(P＜0．05)。KDR可能通过刺激新生血管生成而促进细胞的增殖，参与IHA病变的发生、发展。

MC2R能特异性与促肾上腺皮质激素(ATCH)结合，促进肾上腺皮质激素的分泌。GORRIGAN等［7］发现MC2R在肾上腺细胞生长和分化中起重要作用。应用基因芯片技术已发现IHA病变中ACTH受体基因表达上调，使肾上腺皮质受ACTH的作用增强，导致肾上腺皮质细胞异常增生。本研究发现MC2R在APA组织中大部分为阴性或低表达，而在IHA病变大部分为高表达。MC2R在APA 与IHA组织中表达的结果差异有统计学意义(P＜0．01)。显示MC2R的增多，使肾上腺皮质细胞受ACTH的作用增强，促进了肾上腺细胞的生长和分化，肾上腺皮质细胞出现异常增生，最终导致IHA病变的发生与发展。

IHA很重要的一个方面是球状带细胞的增殖活性发生变化，增殖活性是了解异常增生细胞生物学行为的一个有用的辅助手段，PCNA可作为细胞周期的内源性组织标志物，是反映细胞增殖活性的指标［8］。应用基因芯片技术已发现PCNA在IHA病变中表达上调。本研究发现，PCNA在APA及IHA组织中均有高表达，但PCNA在APA组织中表达强度更高。PCNA在APA与IHA组织中表达的结果差异有统计学意义(P＜0．05)。表明PCNA在APA组织细胞增殖活跃，说明PCNA在APA发挥了重要作用，但具体的作用机制有待于进一步研究。

综上所述，KDR和MC2R在IHA病变的发生、发展中起重要作用，对于鉴别原发性醛固酮增多症的2种亚型APA及IHA病变具有重要的参考意义。

［参考文献］

［1］LOH KC，KOAY ES，KHAW MC，et al．Prevalence of primary aldosteronism among Asian hypertensive patients in Singapore［J］．J Clin Endocrinol Metab，2000，85(8) : 2854．

［2］MULATERO P，DLUHY RG，GIACCHETTI G，et al．Diagnosis of primary aldosteronism: from screening to subtype differentiation ［J］．Trends Endocrinol Metab，2005，16(3) : 114．

［3］SAHAR DE，YANG GP，LONGAKER MT，et al．Surgical applicationof cDNA microarray technique［J］．Surgery，2005，138(3) : 399．

［4］MILAN A，PUGLISI E，MAGNINO D，et al．Left atrial enlargement in essential hypertension: role in the assessment of subclinical hypertension heart disease［J］．Blood Press，2012，21(2) : 88．

［5］BIECHE I，VACHER S，VALLERAND D，et al．Vasculature analysis of patient derived tumor xenografts using species-specific PCR assays: evidence of tumor endothelial cells and atypical VEGFA-VEGFR1/2 signalings［J］．BMC Cancer，2014，14(1) : 173．

［6］TAKEKOSHI K，ISOBE K，YASHIRO T．et al．Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF ) and its cognate receptors in human pheochromocytomas［J］．Life Sci，2004，74 (7) : 863．

［7］GORRIGAN RJ，GUASTI L，KING P，et al．Localisation of the melanocortin-2-receptor and its accessory proteins in the developing and adult adrenal gland［J］．Mol Endocrinol，2011，46 (3) : 227．

［8］STRZALKA W．ZIEMIENOWICZ A．Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) : a key factor in DNA replication and cell cycle regulation ［J］．Ann Bot，107(7) : 1127．

(本文编辑姚仁斌)

·临床医学·

The expressions and significance of kinase domain receptor，melanocortin-2 receptor and proliferating cell nuclear antigen in aldosterone-producing adenoma and adrenal cortical hyperplasia

ZHAO Chen-hui1，ZHOU Wen-long2，HUANG Tao1，ZHANG Zhi-wei1，WANG Ming-wei1，ZHANG Zhao-hui1，CHU Chen-long1，YANG An-qing1，MA Bin-bin1
(1．Department of Urology，Ruijin Hospital Luwan Branch Affiliated to Shanghai Jiao Tong University of Medicine，Shanghai 200020; 2．Department of Urology，Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University of Medicine，Shanghai 200025，China)

［Abstract］Objective: To explore the expressions and significance of kinase domain receptor(KDR)，melanocortin-2 receptor(MC2R)

and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in aldosterone-producing adenoma(APA) and adrenal cortical hyperplasia(IHA)．

Methods: The expressions of KDR，MC2R and PCNA in 40 cases APA and 40 cases IHA lesions were detected by immunohistochemistry．Results: The positive expression rates of KDR，MC2R and PCNA in APA lesions were 40．0%，32．5% and 85．0%，respectively．The expression rates of KDR，MC2R and PCNA in IHA lesions were 65．0%，62．5% and 77．5%，respectively．The differences of KDR，MC2R and PCNA expressions between APA and IHA were statistically significant(P＜0．05 to P＜0．01)．

Conclusions: The KDR，MC2R and PCNA play an important role in the occurrence and development of IHA，which have important reference meaning in the differentiation of APA and IHA lesions．

［Key words］aldosterone-producing adenoma; adrenal cortical hyperplasia; kinase domain receptor; melanocortin-2 receptor; proliferating cell nuclear antigen

［作者简介］赵晨晖(1980－)，男，硕士研究生，主治医师．

［基金项目］上海市卢湾区卫生局科研课题项目(卢卫科1010)

［收稿日期］2014-07-23

［文章编号］1000-2200(2016) 01-0041-03

［中图法分类号］R 586．24

［文献标志码］A

DOI:10．13898/j．cnki．issn．1000-2200．2016．01．011