血清IL-1与G-CSF在胎膜早破亚临床羊膜腔感染诊断中的临床意义*

李雪莲，罗永红，汪 洋，田正华，李 霞，初晓丽（广州医科大学附属深圳沙井医院妇产科，广东深圳518104）

·论 著·

血清IL-1与G-CSF在胎膜早破亚临床羊膜腔感染诊断中的临床意义*

李雪莲，罗永红，汪 洋，田正华，李 霞，初晓丽
（广州医科大学附属深圳沙井医院妇产科，广东深圳518104）

目的 探讨血清白介素-1（IL-1）与粒细胞集落刺激因子（G-CSF）在胎膜早破（PROM）及组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）早期诊断中的临床意义。方法 选择2011年7～12月在该院产科住院分娩的无症状足月PROM孕妇36例（研究组）与正常妊娠分娩孕妇50例（对照组）作为研究对象；采用免疫组化法检测产后胎膜破口边缘处胎膜组织，确定有无HCA。将胎膜组织病理检测有HCA的孕妇作为HCA组，无HCA的为非HCA组，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定不同组别研究对象中血清IL-1及G-CSF的表达水平，并进行对比分析。结果 （1）研究组孕妇中HCA的发生率［63.89%（23/36）］高于对照组［4.00%（2/50）］，差异有统计学意义（P＜0.05）；（2）研究组孕妇血清IL-1及G-CSF水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；（3）HCA组孕妇血清IL-1及G-CSF水平明显高于非HCA组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论血清IL-1及G-CSF水平升高在PROM合并HCA方面具有一定的临床意义，联合检测有利于早期预测及诊断。

白细胞介素1； 粒细胞集落刺激因子； 胎膜早破； 绒毛膜羊膜炎

胎膜早破（premature ruptuer of membrenes，PROM）是指发生在临产前的胎膜破裂，是产科临床上常见的产前并发症之一，可引起早产、脐带脱垂、胎儿宫内窘迫等。而绒毛膜羊膜炎是指羊水、胎盘胎膜及子宫等的感染，是PROM的重要并发症，是自发性早产的重要危险因素之一，会增加新生儿疾病发生率和病死率，也可引起宫内感染、产褥感染、败血症及围生儿死亡等严重并发症。但PROM在亚临床感染时无明显临床症状与体征，由于对亚临床羊膜腔感染孕妇临床上也无相对应的检查指标，因此不易被发现，难以在早期诊断。本研究通过检测PROM孕妇血液中血清白介素-1（IL-1）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的表达，探讨其在PROM合并亚临床羊膜腔感染早期诊断的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年7～12月在本院产科住院分娩的无症状足月PROM孕妇36例作为研究组，平均年龄（24.76±4.12）岁，平均孕周（37.45±2.05）周；同期选择足月正常妊娠孕妇50例作为对照组，平均年龄（25.86± 3.34）岁，平均孕周（38.93±2.78）周。两组孕妇均为单胎头位。两组孕妇的年龄、孕周及孕产次等比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。两组孕妇取静脉血前均未使用抗生素及激素类药物，产前无创伤性交史及阴道炎症病史，无产科并发症，且均为阴道分娩。

1.2 方法

1.2.1 诊断标准 PROM诊断标准参考文献［1］，并经以下检查确诊：（1）阴道宫颈消毒后，在窥器直视下手触宫底见有羊水流出；（2）pH值呈碱性；（3）阴道后穹隆液涂片检查见胎脂、胎毛或胎儿上皮细胞。

1.2.2 组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）的病理诊断 镜下绒毛膜板及羊膜被中性粒细胞浸润，胎盘绒毛膜板晦暗［2］。

1.2.3 标本采集 两组孕妇均于产前抽取肘静脉血5mL，置于非抗凝试管中，于30min内离心（3000r/min，15min），分离血清置于-70℃冰箱保存。两组均于产后取近破口处约4 cm×4 cm大小胎膜组织，给予生理盐水洗去表面羊水与血迹，迅速以10%甲醛溶液固定24 h，送病理检查，作为羊膜腔感染的依据。

1.2.4 检测方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）-双抗体夹心法检测IL-1及G-CSF水平，IL-1定量试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，G-CSF定量试剂盒购自天象人生物科技有限公司。试剂均为进口分装，严格按照说明书操作。将10%甲醛溶液固定的胎膜组织，常规石蜡包埋，切片，经脱蜡、苏木精-伊红染色、脱水、透明、封固后在高倍显微镜下检测，组织学观察有无HCA。由专人采用双盲法阅片。采用免疫组织化学法检测产后胎膜破口边缘处胎膜，确定有无HCA，将胎膜组织病理检测有HCA的孕妇作为HCA组，无HCA的作为非HCA组。

1.3 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用独立样本t检验；计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 研究组与对照组孕妇病理结果比较 研究组孕妇中出现HCA23例（阳性率为63.89%），对照组2例（阳性率为4.00%），两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 研究组与对照组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较 研究组孕妇血清IL-1与G-CSF水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 研究组与对照组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较（±s，pg/mL）

表1 研究组与对照组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较（±s，pg/mL）

注：-表示无此项。

?

2.3 HCA组与非HCA组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较 HCA组孕妇血清IL-1与G-CSF水平明显高于非HCA组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 HCA组与非HCA组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较（±s，pg/mL）

表2 HCA组与非HCA组孕妇血清IL-1与G-CSF水平比较（±s，pg/mL）

注：-表示无此项。

组别HCA组非HCA组n IL-1 G-CSF 123.34±35.78 87.56±34.32 4.65 ＜0.05 25 61 tP--168.23±25.86 86.32±35.10 15.25 ＜0.05

3 讨 论

孕周大于20周而小于37周的孕妇为未足月PROM，其发生率为2.0%～3.5%，孕周满37周后为无症状足月PROM，其发生率为10.0%［3］。PROM多由于孕晚期感染、胎膜本身病变、宫内压力增高等原因造成。PROM可使孕妇及胎儿的感染率与围生儿的病死率显著升高［4-5］。当PROM合并亚临床羊膜腔感染时，多数孕妇无明显临床症状与体征，而仅在病理上表现为HCA。因此，如何对无症状PROM孕妇进行检测，目前还没有相应的指标。从20世纪50年代起，对PROM病因的研究从未停止。但是PROM的发病机制至今仍未完全明确。从最初单纯的机械学研究，到对胎膜本身结构、细胞因子、感染等因素的研究［6-9］，有研究认为PROM是由多种因素引起并相互作用的结果［10］，大量研究认为，感染是PROM的一个重要因素，且感染与PROM互为因果［11-12］。目前，感染性细胞因子IL-1和G-CSF与PROM及亚临床羊膜腔感染中的作用日益受到重视。

IL-1是单核细胞产生的多肽，相对分子质量为17×103，具有激素样的多功能调节因子，包括IL-1α和IL-1β 2个亚单位，主要是由活化的单核和（或）巨噬细胞合成与分泌，刺激中性粒细胞释放炎症蛋白和炎症介质，直接参与炎症发生过程，对炎性反应的时间较其他相关IL早，且特异性高。IL-1还可增强自然杀伤细胞的杀伤活性，促进胸腺细胞、T细胞的活化、增殖和分化，促进多种免疫分子的基因表达：如G-CSF、GM-CSF及c-fos、c-myc等原癌基因的表达。刺激单核细胞与巨噬细胞产生IL-6和TNF，并通过单核细胞和巨噬细胞产生IL-8介导对中性粒细胞的趋化作用。细胞因子如巨噬细胞激活因子、CSF等都对IL-1的产生具有增强作用，可以直接影响单核-巨噬细胞IL-1的分泌。国外学者Pucher等［13］与Bitner等［14］的研究表明，孕晚期羊水中IL-1β水平升高，有发生PROM及早产的风险；羊水中IL-1β水平每增加1个单位，早产及PROM的发生率增加7.2倍。机体感染后产生的代谢物产生应答，刺激巨噬细胞与单核细胞分泌IL-1，而IL-1可以经过胎盘与胎膜进入母体血液中，使得母体IL-1增加。张阁［15］的研究发现，PROM组孕妇的血清IL-1水平明显比胎膜未破组高。吕发辉等［16］研究显示，PROM合并HCA孕妇血清IL-1水平较单纯PROM孕妇高，差异有统计学意义（P＜0.05）。本研究结果显示，与对照组比较，孕妇血清中IL-1水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；病理学检查发现，HCA组孕妇的血清IL-1水平明显高于非HCA组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组孕妇中HCA的发生率［63.89% （23/36）］高于对照组［4.00%（2/50）］，差异有统计学意义（P＜0.05），表明亚临床羊膜腔感染与PROM密切相关。

G-CSF是含有174个氨基酸的糖蛋白，在体内，许多细胞均能产生G-CSF，如单核细胞、内皮细胞等。G-CSF可以调节粒系祖细胞的增殖、分化及成熟，以维持血液循环中白细胞数量的相对平衡。内毒素、TNF-α和干扰素-γ可活化单核细胞及巨噬细胞产生 G-CSF。IL-1、TNF-α等被认为是诱导G-CSF生成的重要物质，而G-CSF又可调控TNF、IL-1等促炎性细胞因子的释放而发挥抗感染作用。G-CSF在抗感染的非特异性细胞免疫过程中起重要作用，其广泛存在于血液循环及组织中。正常状态下，机体内的G-CSF表达水平较低，当发生感染时，机体会做出迅速反应，产生大量G-CSF，增加周围血液循环中粒细胞数量并增强其功能，使孕妇G-CSF表达水平快速增高至正常水平的1 000倍以上；炎症、全身性疾病得到控制后，G-CSF水平逐步恢复正常［17］。据报道，在多种感染中均可以检测到G-CSF水平的增高［18］。Andrews等［19］发现，HCA孕妇仅在亚临床感染期间就可以检测到炎性细胞因子G-CSF的活性。有研究认为脐血中G-CSF可早期预测亚临床的新生儿感染［17］。Stallmach等［20］通过检测PROM组及正常妊娠孕妇分娩后脐血中G-CSF水平发现，合并HCA孕妇的脐血中G-CSF水平升高。国内白艳艳等［21］研究结果表明，正常妊娠分娩组孕妇血清G-CSF的水平显著低于PROM组，非HCA组孕妇的血清G-CSF水平均明显低于HCA组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。由此认为，G-CSF含量可作为宫内感染的一项早期预测指标。本研究结果显示，研究组孕妇血清G-CSF水平高于对照组，HCA组血清G-CSF水平较非HCA组升高，差异均有统计学意义（P＜0.05），与以往的研究结果相似［17-21］。

综上所述，当PROM孕妇合并HCA时，IL-1、G-CSF在一定程度上共同参与了PROM及绒毛膜羊膜炎的发生，相互作用，且在PROM及亚临床羊膜腔感染中发挥重要作用。IL-1、G-CSF在孕妇血清中的表达水平，可作为PROM发生后羊膜腔出现感染的早期诊断及预测指标，以便及时采取措施，降低母婴并发症的发生率。

［1］Falagas ME，Avgeri SG，Matthaiou DK，et al.Short-versus long-duration antimicrobial treatment for exacerbations of chronic bronchitis：a metaanalysis［J］.J Antimicrob Chemother，2008，62（3）：442-450.

［2］Mu SC，Lin CH，Chen YL，et al.Impact on neonatal outcome and anthropometric growth in very low birth weight infants with histological chorioamnionitis［J］.J Formos Med Assoc，2008，107（4）：304-310.

［3］谢幸，苟文丽.妇产科学［M］.8版.北京：人民卫生出版社，2013：133-135.

［4］Fujiwara A，Fukushima K，Inoue H，et al.Perinatal management of preterm premature ruptured membranes affects neonatal prognosis［J］.J Perinat Med，2014，42（4）：499-505.

［5］Gezer A，Parafit-Yalciner E，Guralp O，et al.Neonatal morbidity mortality outcomes in pre-term premature rupture of membranes［J］.J Obstet Gynaecol，2013，33（1）：38-42.

［6］Blanchon L，Accoceberry M，Belville C，et al.Rupture of membranes：Pathophysiology，diagnosis，Consequences and management［J］.J Gynecol Obstet Biol Reprod（Paris），2013，42（2）：105-116.

［7］Saglam A，Ozgur C，Derwig I，et al.The role of apoptosis in preterm prematureruptureofthehumanfetalmembranes［J］.ArchGynecolObstet，2013，288（3）：501-505.

［8］Magee B，Smith G.Histological chorioamnionitis associated with preterm prelabour rupture of membranes at Kingston General Hospital：a practice audit［J］.J Obstet Gynaecol Can，2013，35（12）：1083-1089.

［9］Aguin E，Van De Ven C，Cordoba M，et al.Cerclage retention versus removal following preterm premature rupture of membranes and association with amniotic fluid markers［J］.Int J Gynaecol Obstet，2014，125（1）：37-40.

［10］Al Riyami N，Al-Ruheili I，Al-Shezaw F，et al.Extreme preterm premature rupture of membranes：risk factors and feto maternal outcomes［J］.Oman Med J，2013，28（2）：108-111.

［11］Al-Kadri HM，Bamuhair SS，Johani SM，et al.Maternal and neonatal risk factors for early-onset group B streptococcal disease：a case control study［J］.Int J Womens Health，2013，5：729-735.

［12］Hoang M，Potter JA，Gysler SM，et al.Human fetal membranes generate distinct cytokine profiles in response to bacterial toll-like receptor and nod-like receptor agonists［J］.Biol Reprod，2014，90（2）：39.

［13］Pucher K，Lavazzo C，Gourgiotis D，et al.Mid-trimester amniotic fluidinterleikins（IL-1β，IL-10 and IL-18）as possible predictors of preterm delivery［J］.In Vivo，2011，25（1）：141-148.

［14］Bitner A，Kalinka J.IL-1β，IL-6 promoter，TNF-α promoter and IL-1 RA gene polymorphisms，and the risk of preterm delivery due to preterm ruptuer of membrance in population of polish women［J］.Arch Med Sci，2010，6（4）：552-557.

［15］张阁.胎膜早破孕妇血清CRP和白介素-1与胎膜早破相关性分析［J］.临床医学工程，2015，22（6）：757-758.

［16］吕发辉，田春芳，等.血清β-hCG及IL-1的变化在诊断胎膜早破感染中的价值［J］.中南医学科学杂志，2013，41（2）：154-158.

［17］Goodwin JS，Tan AL，Jaramillo E，et al.Prostate-Specific antigen testing in men aged 40-64 years：impact of publication of clinical trials［J］.J Natl Cancer Inst，2013，105（10）：743-745.

［18］Goepfert AR，Goldenberg RL，Andrews WW，et al.The Preterm Prediction Study：association between cervical interleukin 6 concentration and spontaneous preterm birth.National Institute of Child Health and Human Development Maternal-Fetal Medicine Units Network［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184（3）：483-488.

［19］Andrews WW，Goldenberg RL，Mercer B，et al.The preterm prediction study：association of second-trimester genitourinary chlamydia infection with subsequent spontaneous preterm birth［J］.Am J Obstet Gynecol，2000，183（3）：662-668.

［20］Stallmach T，GunduIa H，Joller-Jemelka HI，et al.Cytokineproduction and visualized effects in the feto-maternal unit.Quantitative and topographic data on cytokines during intrauterinedisease［J］.Lab Inves，1995，73（3）：384-392.

［21］白艳艳，胡明英，张建军，等.血清IL-18、G-CSF的测定在胎膜早破中的临床意义［J］.辽宁医学院学报，2014，35（1）：54-56.

Clinical significance of serum levels of IL-1 and G-CSF in diagnosis of premature rupture of membranes with subclinical amniotic cavity infection*

Li Xuelian，Luo Yonghong，Wang Yang，Tian Zhenghua，Li Xia，Chu Xiaoli
（Department of Obstetrics and Gynecology，Affiliated Shajing Hospital of Guangzhou Medical University，Shenzhen，Guangdong 518104，China）

Objective To investigate the clinical significance of serum interleukin-1（IL-1）and granulocyte colony-stimulating factor（G-CSF）in premature rupture of membrane（PROM）and histological chorioamnionitis（HCA）.Methods A total of 36 full term pregnant women with PROM and without symptoms in our hospital from July to December 2011 were selected as the research group and 50 cases of pregnant women with normal delivery were selected as the control group；the immunohistochemical method was adopted to simultaneously examine the embryonic membrane at the edge of fetal membrane rupture for determining HCA.The pregnant women with HCA by fetal membrane histopathological examination were taken as the HCA group and non-HCA as the non-HCA group.The levels of IL-1 and G-CSF were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.Results （1）The HCA occurrence rate in the research group was 63.89%（23/36），which was higher than 4.00%（2/50）in the control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）；（2）the levels of serum IL-1 and G-CSF in the research group were higherthan those in the control group with statistical difference（P＜0.05）；（3）the levels of IL-1 and G-CSF in the HCA group were higher than those in the non-HCA group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The increase of IL-1 and G-CSF levels has certain clinical significance in the aspect of PROM complicating HCA，and their combined detection is conducive to early prediction and diagnosis.

Interleukin-1；Granulocytecolony-stimulatingfactor； Fetalmembranes，prematurerupture； Chorioamnionitis

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.16.002

A

1009-5519（2016）16-2456-03

深圳市宝安区科技局项目（20110490）。

李雪莲（1973-），硕士研究生，副主任医师，主要从事妇产科临床工作。

2016-05-11）