中空纤维离心超滤-高效液相色谱法测定双氯芬酸钠凝胶含量

豆妮娜，冉丛聪，赵可新，蒋 晔*

(1.中国石油天然气集团公司中心医院药学部，河北廊坊 065000；2.河北医科大学药学院，河北石家庄 050017)

凝胶类制剂作为近年来兴起的一种药物新剂型，具有易吸收、无刺激、不污染衣物等突出的优势，其制备和应用范围越来越广泛[1 - 3]。凝胶剂的基质通常采用一些新型的高分子药用辅料如卡波姆、羧甲基纤维素钠等[4]。这些大分子物质的存在对于其制剂质量、制剂性能提高的同时，在色谱分析时易附着在色谱柱中，从而会降低分析准确度。因此在分析测定前，样品的前处理是至关重要的过程。传统的去除大分子物质的方法有大孔树脂法、离心沉淀法等[5,6]，但以卡波姆为基质的凝胶剂在水溶液和有机溶剂中均有较好的溶解度，使得待测样品溶液中含有大量大分子物质，传统的样品前处理很难将小分子药物从基质分离出来。

本文采用中空纤维离心超滤技术处理凝胶类制剂样品，去除了高分子凝胶辅料，有效分离出小分子药物，并结合高效液相色谱(HPLC)法直接进行含量分析。将所建立的方法用于双氯芬酸钠凝胶的含量分析，简便、快速、可靠地反映了药物制剂质量。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪，包括L-6200A ternary泵(日本，日立公司)，785A紫外检测器(美国)，HW-2000色谱工作站；聚偏氟乙烯、聚砜中空纤维(壁厚150 μm，内径1 000 μm，截留分子量10 kDa，天津北奥膜工程技术有限公司)；LXJ-64-01离心机(北京医用离心机厂)。

双氯芬酸钠对照品(中国食品药品检定研究院提供)；双氯芬酸钠凝胶(海南全星制药有限公司，产品批号20140104，规格15 g:0.15 g)；甲醇(色谱纯，DIKMA科技有限公司)；冰乙酸为分析纯；水为重蒸水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Phenomenexc C18柱(250×4.6 mm)；流动相：甲醇-0.1%乙酸溶液(体积比85∶15)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：室温；检测波长：276 nm；进样量：20 μL。

1.3 溶液的配制

1.3.1对照品溶液精密称取双氯芬酸钠对照品10.2 mg于1 mL安培瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得10.2 mg·mL-1对照品贮备液。精密移取对照品贮备液0.5 mL置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得510 μg·mL-1的对照品溶液。精密移取510 μg·mL-1对照品溶液适量置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得浓度为5.10、10.2、15.3、20.4、25.5、30.6 μg·mL-1的系列对照品工作溶液。

1.3.2供试品溶液精密称取供试品1.041 g(含双氯芬酸钠约10 mg)于10 mL容量瓶中，然后加入0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。将中空纤维切成约15 cm的小段，在水中超声清洗15 min后，晾干，备用。将两个注射用针头穿过橡胶塞，固定已处理的中空纤维并置于10 mL离心管中，取适量供试品溶液于离心管，5 000 r·min-1离心10 min，取出中空纤维，收集腔内溶液，用流动相稀释，得约20.0 μg·mL-1的供试品溶液。

1.3.3空白溶液精密称取空白辅料1.032 g于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。中空纤维离心超滤法同上制备空白溶液。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

参照文献报道[7 - 9]测定双氯芬酸钠的色谱条件，对流动相体系调整后，确定为甲醇-0.1%乙酸溶液(体积比85∶15)。在此色谱条件下，双氯芬酸钠保留时间为7.8 min。

2.2 样品前处理方法的选择

凝胶类制剂中的大分子主要来源于辅料中的卡波姆等，卡波姆在样品稀释液中以胶体形式存在，文献报道[9 - 11]通常采用直接稀释样品、离心沉淀或过滤法将小分子物质与高分子辅料或基质分离，但是很难达到理想的分离效果。本研究采用中空纤维离心超滤法对凝胶剂进行样品前处理，利用中空纤维膜对大分子截留的原理，有效去除大分子的干扰，并避免了对色谱仪的损害。

2.3 溶剂的选择

实验考察了水、流动相、0.1 mol·L-1NaOH溶液不同稀释溶剂对测定的影响，结果表明采用NaOH溶液作为溶剂，在碱性环境中可保证双氯芬酸钠以离子的形式完全溶解。因此，最终选择0.1 mol·L-1NaOH溶液为溶剂，样品含量测定结果准确可靠。

2.4 中空纤维膜的选择

考察了在中空纤维离心超滤分离过程中不同膜材对待测物的非特异性吸附(NSB)，进而选择合适的中空纤维膜。本文以20.4 μg·mL-1的对照品溶液研究了其在聚偏氟乙烯和聚砜两种不同中空纤维膜材中的回收率，结果表明以聚偏氟乙烯中空纤维膜进行超滤分离时，回收率可达100%，而聚砜中空纤维膜对待测成分存在明显的NSB现象，回收率仅为57%。因此，本实验选择聚偏氟乙烯膜材对样品进行中空纤维离心超滤处理。

2.5 系统适应性试验

分别取空白溶液、双氯芬酸钠对照品溶液(20.4 μg·mL-1)、供试品溶液，在1.2节色谱条件下进样，记录色谱图(如图1A～C)。双氯芬酸钠的出峰时间为7.8 min，分离度良好，空白辅料不干扰测定，理论塔板数以双氯芬酸钠计算不低于3 000N/m。结果表明，色谱系统的适应性良好。

2.6 校正曲线

取1.3节下系列对照品工作液，在1.2节色谱条件下进样测定，记录色谱图，以峰面积(A)对样品的浓度(c)进行线性回归，所得方程为：A=5.90×104c+1.73×104(r=0.9998)。结果表明，双氯芬酸钠在5.10～30.6 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.7 精密度与重复性试验

取1.3节下对照品溶液，连续进样6次，色谱峰面积，相对标准偏差(RSD)为1.2%，表明方法精密度良好。取同批双氯芬酸钠凝胶样品，按1.3节下方法配制6份供试品溶液，进样测定，其色谱峰面积的RSD为1.4%。

2.8 回收率试验

精密称取空白辅料约1 g，置10 mL容量瓶中，精密量取10.2 mg·mL-1对照品贮备液0.8、1.0、1.2 mL，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解，并稀释至刻度，制备高、中、低三个浓度的溶液，每个浓度三份，按1.3节下方法配制供试品溶液。在1.2节色谱条件下进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 双氯芬酸钠的回收率测定结果

2.9 样品含量测定

取双氯芬酸钠凝胶样品，按“1.3”节下方法配制成供试品溶液，在“1.2”节色谱条件下进样测定，以外标法计算样品中双氯芬酸钠含量分别为样品标示量的99.1%、98.9%和99.4%。

3 结论

实验结果表明，本文所建立的中空纤维离心超滤样品前处理法应用于以卡波姆为基质的凝胶类制剂，可简单快速地分离出小分子药物，空白辅料不干扰测定，提高了方法的分析准确性，为凝胶类制剂中高分子辅料的去除提供了简便可靠的前处理手段。