道地药材建青黛组织培养技术研究

2016-10-20 13:13蔡宣梅郭文杰张洁
现代农业科技 2016年9期
关键词:组织培养

蔡宣梅 郭文杰 张洁

摘要 以建青黛顶芽为外植体,MS为基本培养基,研究不同激素组合的培养基对顶芽诱导、增殖及生根的影响。试验结果表明:最佳顶芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,最佳生根培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L。

关键词 道地药材;建青黛;组织培养;顶芽

中图分类号 S567.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2016)09-0070-01

青黛味淡、性寒,具清热解毒、凉血止血、定惊之功效,临床常用于时病热毒,发癍吐血、胸痛咯血。近年来,研究发现青黛的主要成分之一的靛玉红对白血病有一定的疗效,从而引起了国内外的极大关注[1]。青黛作为一种传统中药材,主产于福建、河南、河北、江苏和四川等地,其中福建产的品质最佳,称之为建青黛,为公认的名优道地药材。建青黛含靛蓝最高可达3.5%,含靛玉红最高可达0.35%,高于药典的要求(含靛蓝不低于2.0%,含靛玉红不低于0.13%)。目前福建唯仙游县书峰乡有生产,传统的繁殖方法为扦插繁殖,而常年无性繁殖会导致种源退化。植物组织培养具有繁殖系数大、脱病毒复壮等优点[2-5],然而组织培养方法应用在青黛上却未见报道。本研究以青黛顶芽为外植体,建立青黛种苗工厂化生产的完整体系,为大量推广优质福建道地青黛种苗及建青黛种质资源保护奠定基础。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试材料为福建省道地青黛,摘取幼嫩的顶芽和侧芽为外植体。

1.2 培养条件

本试验采用的诱导、增殖培养基本培养基为MS培养基,生根培养基本培养基为1/2MS(大量元素减半)培养基,附加不同浓度的6-BA、NAA、IBA(单位:mg/L,下同)。基本培养基中,蔗糖为3%,琼脂为0.7%,pH值为5.8~6.0。培养条件为(25±2)℃,每天光照12 h,光照强度为2 000~2 500 lx。

1.3 试验方法

选择健康的无病斑的顶芽,用流水冲洗2 h,用洗衣粉浸泡10 min,用刷子轻刷,然后用自来水冲洗干净。在超净工作台上用75%的酒精浸泡30 s,再用0.1%的升汞消毒8 min,无菌水冲洗4次后,接种在诱导培养基上。当青黛组培苗长至高约2.5 cm时切下接入8种生根培养基中,每瓶5株,每个处理10瓶。

2 结果与分析

2.1 不同激素组合对建青黛顶芽初代诱导的影响

建青黛顶芽接种15 d后,基部切口处开始膨大,随后慢慢出现许多绿色的小芽点,30 d左右开始分化出不定芽。

从表1可以看出,当NAA浓度不变时,随着6-BA濃度的增加,诱导率呈增加趋势;但当6-BA浓度为1.50 mg/L时,诱导出的苗有轻微的玻璃化;当6-BA浓度为2.00 mg/L时,诱导出的苗会玻璃化。当6-BA浓度都为1.00 mg/L时,随着NAA浓度(0.05~0.50 mg/L)的升高,诱导率呈先上升后下降的趋势。在NAA浓度为0.10 mg/L时,外植体的诱导率达到最高即93.33%,且苗长势正常;而NAA浓度超过0.10 mg/L时,随着NAA浓度的增加,诱导率却降低。

2.2 不同激素组合对建青黛增殖的影响

从表2可以看出,在6-BA浓度为0.8 mg/L或1.0 mg/L时,培养基中生长的苗叶色正常,未见玻璃化现象,而当培养基中6-BA浓度为1.2 mg/L时,IBA 3个不同浓度的培养基中生长的苗都表现为叶色较淡、有轻微玻璃化现象。当6-BA浓度为0.8、1.0或1.2 mg/L时,IBA浓度都是为0.1 mg/L时增殖倍数最高。从苗的质量和增殖倍数2个方面考虑,认为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L培养基作为继代增殖培养基较好。

2.3 不同激素组合对建青黛生根的影响

当建青黛组培苗长至高2~3 cm时切下接入生根培养基中。培养15 d后,根尖开始冒出。培养25 d时,组培苗的生根情况见表3。从表3可以看出,8种培养基都能促进生根,最佳的建青黛生根培养基为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.05 mg/L,生根率可达100%。

2.4 炼苗与移栽

将已长根的组培苗小心地从培养瓶中取出,轻轻洗掉根部培养基,用多菌灵或甲基托布津浸泡30 min后,移栽到泥炭土∶珍珠岩体积比为3∶1的穴盘中,放入盖有薄膜和遮阳网的大棚中管理。棚内保持温度20~25 ℃,相对湿度 70%~80%,成活率可达95%以上。炼苗30 d左右,当幼苗长至7~10 cm即可移栽到大田中,一般选择春、秋季进行炼苗与移栽。

3 结论与讨论

试验通过建青黛顶芽诱导、增殖、生根等培养,建立了建青黛工厂化快速繁殖体系,解决了青黛种源退化的问题。张利英等[6]用草莓组培苗和自繁苗进行比较,结果表明:草莓组培苗在植物学性状、果实性状、丰产性及抗病性等方面均优于自繁苗,其中产量可比自繁苗增产30%以上。而建青黛为多年生草本植物,扦插繁殖每年收获产量不一样,一般3年扦插1次。组培苗种植后的生长势与扦插苗的比较、每年的产量、一次种植可维持高产量几年等问题还有待研究。

4 参考文献

[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:185.

[2] 谢利娟,韩蕾,钱永强.爆仗竹组培快繁6-BA与NAA组合浓度配比优化分析[J].核农学报,2005,19(3):181-185.

[3] 王小敏,梁呈元,李维林.留兰香组织培养及快速繁殖条件的优化[J].植物资源与环境学报,2007,16(4):38-40.

[4] 林江波,戴艺民,邹晖,等.福建铁皮石斛人工繁育技术研究[J].福建农业学报,2010,25(5):606-609.

[5] 肖哲丽,柳金风.植物组织培养的研究进展及新技术应用[J].宁夏农林科技,2011,52(1):13-14.

[6] 张利英,李贺年,张鑫,等.草莓组培苗和自繁苗田间性状比较试验研究[J].安徽农业科学,2009,37(25):11957-11958.

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