免疫胶体金层析技术在兽医临床诊断中的应用

伍宏彪　福建省松溪县动物疫病预防控制中心　353500

免疫胶体金层析技术在兽医临床诊断中的应用

伍宏彪福建省松溪县动物疫病预防控制中心353500

随着动物医学不断发展创新，免疫胶体金层析诊断技术在不断发展，有效提高了临床应用上检出率与诊断的准确性。本文通过介绍免疫胶体金层析技术的原理、构造、分类应用及诊断来说明该技术在兽医临床诊断中的应用价值。

免疫胶体金层析诊断动物疫病临床

免疫胶体金层析技术在20世纪80年代逐渐发展起来［1］，是继酶标记、荧光标记和放射性标记之后又一个新的快速的抗原抗体免疫学技术。目前，该技术在医学领域的应用主要为检测病原［2］及针对病原在体内产生的抗体［3］，或者妊娠诊断［4］等。动物疫病的诊断与人类医学诊断相比，往往要对较大的群体或需要到现场进行诊断，因此，更需要简便快捷的诊断方法。目前免疫胶体金层析技术已成为兽医疾病检测中应用最广泛的免疫学检测技术之一。

1　胶体金免疫层析技术的原理及构造

免疫层析技术是以抗原抗体反应与色谱层析技术相结合的一种快速免疫分析方法。胶体金免疫层析技术通过将标记了胶体金的抗原或抗体固定在条状纤维素膜（membrane）上，以形成固相载体，然后将待测样品以液体形式加入到一端的样本垫（sample pad）之后，通过液体在硝酸纤维素膜上形成的毛细作用（capillary flow）而向前移动，同时使待测样品中的受测物与硝酸纤维素膜上的抗体或抗原发生特异性结合而形成免疫复合物。免疫复合物被富集在特定区域（test line），通过胶体金的颜色反应而得到直观的结果，而游离的标记物则越过检测带（control line）进入到末端的吸水垫（wicking pad），不呈现显色反应。胶体金免疫层析试纸条的构造模式见图1。

2　胶体金免疫层析技术的分类及结果判断

胶体金免疫层析按照反应模式可以分为三类，即：间接法、夹心法和竞争抑制法［5］。其中夹心法又可分为双抗体夹心法和双抗原夹心法。对未知抗原的检测常采用双抗体夹心法和竞争抑制法，而对未知抗体的检测常采用双抗原夹心法和间接法。

3　免疫胶体金技术在动物疾病中的应用

3.1传染病的诊断

3.1.1病毒病的诊断廖圆圆等［6］建立了间接胶体金免疫层析方法用于检测犬血清中RV IgG抗体，该方法不仅敏感性高（可检出最低中和抗体效价水平0.5 IU/mL），且与商品ELISA检测试剂盒的总符合率达到99.4%。陈一鸣等［7］用研制的PRRS抗体试纸条与ELISA检测方法分别对36份血清样品进行检测，结果显示PRRS抗体试纸条的敏感度为81.5%，特异度为100%，符合率为86.1%，重复性良好。王中力等［8］构建了检测犬细小病毒（CPV）的间接胶体金免疫层析法，（GICA）敏感性为100%；特异性为97.3%；与HA检测结果符合率为98.3%，对犬重要传染性疾病（犬细小病毒病）的诊断提供了快速的检测方法。因此，胶体金免疫层析诊断方法适合于临床的快速诊断。

3.1.2细菌病的诊断刘凯等［9］构建了牛出血性败血症胶体金免疫层析快速诊断方法，该方法采用双抗体夹心法检测牛源巴氏杆菌，经优化后该方法与细菌检查结果一致性为100%，无交叉反应，稳定性可以维持半年。布日额等［10］建立了检测牛乳中致病性金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析方法，试纸条与致病性金黄色葡萄球菌分离鉴定法符合率为90.0%、与PCR试剂盒符合率为83.3%。李伟等［11］建立的炭疽杆菌芽孢胶体金层析检测技术，胡孔新等［12］建立的快速检测鼠疫杆菌抗原用的胶体金标记免疫层析方法，谌志强等［13］建立的大肠杆菌0157∶H7胶体金免疫渗滤法等都能够快速有效地对细菌性疾病进行检测和诊断。

3.1.3寄生虫病的诊断王艳华等［14］将构建的胶体金试纸条检测人工感染弓形虫GJS株速殖子的7只兔，对兔血清进行检测，同时用弓形虫分泌的抗原进行IHA参照。结果显示，试纸条在第3 d即可检测出抗体，而IHA法则在第5 d才可检测出抗体，且该方法对猪瘟及猪衣原体病阳性血清均为阴性，无交叉反应性。曾小军等［15］建立了检测血吸虫的免疫胶体金技术，与IHA抗体检测技术比较，检出率分别为95.24%和100.00%；慢性血吸虫病患者的检出率分别为92.86%和94.64%。两种方法对于血吸虫的检出效能一致，而胶体金技术对于血吸虫的检出效率略低于IHA方法，可能与包被所使用的蛋白及抗体出现的时机相关。

3.2检验检疫检验检疫对于国家进出口货物，尤其是生物源物品的安全流通具有重要的作用，是关系到国家生物安全的一个重要环节。然而对于进出口关卡的样品进行检测，需要快速准确的检测方法，方能提高效率而不耽误货物中转及旅客流通。动物活体检疫、动物源性食品及流通过程中的监测，对消费者的消费安全和身体健康具有直接或者间接的影响，同时制约了动物防疫工作切实有效地开展。胶体金免疫层析技术可快速、有效地对现场进行诊断，并可给出诊断结果，对于检验检疫具有较大的现实意义。

4　不同方法试验对比

4.1试验材料禽流感H5抗体快速检测卡，深圳康百得生物科技有限公司生产；H5血凝抑制试验抗原与阳性血清由哈尔滨兽医研究所生产；禽血清30份，随机在散养户中采集。

4.2试验数据从试验数据（见表1）可知，禽流感抗体快速检测卡与禽流感HI和HA试验所得出的结果基本一致，区别在于，禽流感HI和HA试验可以得出准确的数值，而H5抗体快速检测卡只能定性作出阴性或阳性结果判断。

5　总结

免疫胶体金层析技术因操作简便、无须使用仪器设备、快速出结果等优点而被广泛应用于各个领域。动物疾病诊断不但可帮助畜牧养殖业的健康发展，更重要的可为消费者提供安全放心的动物源性食品。就动物疾病的免疫胶体金层析技术研发而言，选择何种反应方式、包被抗体或抗原的选择、检测抗原或者不同抗原刺激的抗体出现顺序等都需要考虑在内。对于细菌引起的疾病，因菌种之间可能存在一定的抗原交叉性，故需要注意诊断方法的特异性。与此同时，还需要尽可能提高试纸条的敏感性，而且对于一项新的检测技术，往往需要经过长时间的实践检验才能进入临床应用和推广。如果能很好地解决免疫胶体金层析试纸条检测方法的特异性、敏感性和稳定性，而研发出一种比较成熟的检测技术，无疑具有广阔的实际应用前景，同时也应成为广大科技工作者努力的方向。

［1］Faulk W P，Taylor G M.Communication to the editors：an immunocolloid method for the electron microscope［J］.Immuno chemistry，1971，8（11）：1081-1083.

［2］宾羽琳，陈艳，邱灿林.胶体金免疫层析法应用于感染性肠道疾病病原的快速检测［J］.中国卫生检验杂志，2008，18（5）：839-854.

［3］李云，焦春梅.胶体金免疫层析法检测梅毒螺旋体特异性抗体的方法学评价［J］.实用医技杂志，2002，9（6）：411.

［4］Beggs M，Novootney M，Sampetro S，et al.A self performing chromatographic immunoassay for the qualitative determination of human chorionic gonadorophin（HCG）in rurine and serum［J］.Clin Chem，1990，36：1084-1085.

［5］任娟.胶体金免疫层析技术研究现状及进展［J］.新疆畜牧业，2011（12）：22-24.

［6］廖园园，钱金宏，唐利军，等.检测犬抗狂犬病毒抗体的胶体金免疫层析法的建立及应用［J］.中国预防兽医学报，2009，31（9）：705-708.

［7］陈一鸣.猪繁殖与呼吸综合征抗体免疫胶体金快速诊断试纸的研制［D］.成都：四川农业大学，2011.

［8］王中力，宋晓晖，陈西召，等.犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究［J］.中国预防兽医学报，2004，26（1）：62-66.

［9］刘凯，刘忠清，李德文.牛出血性败血症胶体金免疫层析快速诊断方法［J］.动物医学进展，2012，33（11）：134-136.

表1　不同方法检测试验结果

［10］布日额，任晓峰，吴金花，等.牛乳中致病性金黄色葡萄球菌快速检测胶体金免疫层析方法研究［J］.中国预防兽医学报，2013，35（11）：907-911.

［11］李伟，王静，胡孔新，等.应用胶体金免疫层析技术建立炭疽杆菌芽孢的快速检测方法［J］.中国国境卫生检疫杂志，2004，27（6）：329-331.

［12］胡孔新，李伟，姚李四，等.建立快速检测鼠疫耶尔森菌的胶体金免疫层析法［J］.中国国境卫生检疫杂志，2004，27（6）：332-335.

［13］谌志强，侯楠楠，王新为，等.大肠埃希菌O157：H7的金增强胶体金免疫渗滤检测法［J］.环境与健康杂志，2011，28（2）：105-108.

［14］王艳华，李克生，才学鹏，等.弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制［J］.中国兽医科学，2007，37（1）：29-32.

［15］曾小军，陈红根，袁建华，等.快速胶体金免疫层析法的建立及其对血吸虫病的诊断效果［J］.中国血吸虫病防治杂志，2005，17（1）：24-27.

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1003-4331（2016）05-0026-03