两种方法在单增李斯特菌考核检测中的应用

郭 微 沈毕忠

（盘锦检验检测中心

（市疾病预防控制中心），辽宁 盘锦 124010）

两种方法在单增李斯特菌考核检测中的应用

郭 微 沈毕忠

（盘锦检验检测中心

（市疾病预防控制中心），辽宁 盘锦 124010）

目的 研究探讨不同检测方法在单增李斯特菌考核检测中应用价值。方法 回顾分析2014年CNAS单增李斯特菌能力验证考核中，应用传统检测方式与现代检测方法分别进行检测，分析两种检测方式特点。结果 两种检测方式均能有效检测出单增李斯特菌，不过现代方法较传统方法在培养时间和生化鉴别方面占有明显优势。结论 现代API法应用于单增李斯特菌考核检测中具有极高的检出率与灵敏度，该方式操作简便，鉴定耗时短，适用于初学者

单增李斯特菌；检验方法；应用

单增李斯特菌也称之为腐生菌，在自然界中广泛分布，主要生存于土壤和腐生植物中。引起李斯特菌病爆发的食品主要有乳及乳制品、肉类制品、水产品以及蔬菜水果，其中水果蔬菜、乳及乳制品最为常见。目前对于单增李斯特菌的培养检测多采用传统国标法，不过该方式在前期分离培养工作需大量时间，导致检测周期性较长［1］；而API Listeria方式则是近几年新型的平板培养法，具有自动化、系统化发展趋势，同时其检测耗时短，极为符合单增李斯特菌考核检测中的应用。

1　材料与方法

1.1实验材料：样品编号：PTC-T081单增LMO-080；样品状态：密封西林瓶装固体粉末；样品数量：100份。

1.2实验试剂：本次实验所用的培养基、细菌生化鉴定套装均由北京陆桥有限公司提供；显色培养基由科玛嘉公司提供。APILAB软件一套，API Listeria 10300试剂盒由法国生物梅里埃公司提供。

1.3实验仪器：细菌鉴定设备是法国梅里埃公司生产的ATB半自动细菌鉴定仪；细菌镜检设备是Olympus CX-31电子显微镜；细菌培养设备是上海智诚分析仪器制造有限公司生产的ZBDP2080恒温培养箱；灭菌设备是山东新华医疗器械股份有限生产的LMQC5070高压灭菌器。普通干粉培养基、即用型血琼脂平板、生化鉴定管购自北京陆桥技术有限责任公司；显色干粉培养基购自法国CHROMagar微生物显色培养基公司；API生化鉴定条购自法国梅里埃公司。

1.4检测过程：稀释液合计25 mL，此溶液即是待测样品原液，全过程20 min内完成。将上述制备的25 mL待测原液按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特菌检验》GB 4789.30-2010标准方法进行后续操作。

1.5评价方法：根据国标法作为参照，评估现代API法的灵敏度与特异性及阳性试验的预测值与阴性试验预测值。阳性则为检测出单增李斯特菌，若为阴性则表示未检出单增李斯特菌。

2　结 果

两种检测方式均能有效检测出单增李斯特菌，不过现代方法较传统方法在培养时间和生化鉴别方面占有明显优势。见表1。

3　讨 论

单增李斯特菌适应能力超强，能在2～42 ℃下生存，值得注意的是，它在4 ℃冰箱保存的食品中也能生长繁殖，使其危害性更进一步增大。人们在未经高温彻底加热处理的情况下食用，就会出现感染症状，因而李斯特菌病又称为“冰箱病”。在感染后3～70 d出现症状，健康成人可出现轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、孕妇出现流产，而孕妇本人症状多较轻。

传统国标法在检测中由于需要采取单项逐步试验，操作过程耗时费力、步骤繁琐，加之在观察分离菌落的色泽区别难度较大等问题均会对检测技术者带来不小的难度与挑战；现代API法则是通过多种培养基或干燥底物配合规范特定的生化判断编码，利用荧光底物对细菌进行快速检测。该方式仅需要24 h即可判断结果，无需另行配置相关试剂，大大降低工作者操作步骤，提升了检测效率，并且在菌落判断中由于荧光呈色底物的存在，有效提升了菌落辨别，提高鉴定结果。张烜榕等［2］研究表明，在对于大量单增李斯特菌污染样品的检查鉴定中，采用API Listeria方式尤为适合，其操作简便，只需一次接样，无需借助溶血实验的结果即可进行结果判定；同时可避免国标法中使用乙醇胺等危险物质，降低检查人员事故风险率。

表1　传统检测方法与现代检测方法比对

随着造成人类致病的微生物感染种类逐步增多，过去常规单一性检测微生物的方式逐渐出现不足，而现代API法中规范的生化鉴定编码则会随着今后对其的完善而逐步扩充，加之配合专家学者的分析研究，有效弥补了传统检测中存在的不足从而极大促进了微生物检测准确率，尤为适用于初学者。

［1］ 程洁，张晓峰.单增李斯特菌选择性增菌培养和分离方法的比较研究［J］.检验检疫科学，2003，13（6）:36-38.

［2］ 张烜榕，颜军，李文龙，等.单核细胞增生李斯特菌三种检测方法的比较［J］.大理学院学报（医学版），2013，22（6）:38-42.

R446.5

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1671-8194（2016）25-0033-02