miR-200b与癌胚抗原在大肠癌中的表达及其相关性*

杜叶平，王海莲，尹莉莉，武春梅，苗晋华

(中国人民解放军第二六四医院检验科，太原 030001)



·论 著·

miR-200b与癌胚抗原在大肠癌中的表达及其相关性*

杜叶平，王海莲，尹莉莉，武春梅，苗晋华△

(中国人民解放军第二六四医院检验科，太原 030001)

目的 探讨miR-200b与癌胚抗原(CEA)在大肠癌发生、 发展中的表达情况及其表达的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR方法分析60例大肠癌组织及正常组织中miR-200b mRNA和CEA mRNA表达结果，分析其与患者临床资料、病理参数之间的关系，研究大肠癌组织中miR-200b mRNA和CEA mRNA表达的相关性。结果 大肠癌组织中miR-200b mRNA的表达显著低于正常组织，CEA mRNA显著高于正常组织，差异均有统计学意义(P<0.01)；患者性别、年龄及肿瘤部位的miR-200b mRNA和CEA mRNA表达结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)；不同组织学分级及TNM分期中，CEA呈现过表达状态，而miR-200b呈现表达降低或缺失状态；大肠癌组织中miR-200b和CEA 的表达具有相关性，且呈负相关关系(r=-0.790，P<0.001)。结论 miR-200b在大肠癌组织中呈低表达或表达缺失，与CEA的表达呈一定的负相关关系，提示miR-200b可为肿瘤的诊断和治疗提供新的依据。

大肠癌； miR-200b； 癌胚抗原； 实时定量PCR

微小RNA(miR)是一类长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA小分子，1993年发现首个miR，其功能特征和作用模式广受关注[1]。目前，miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429、miR-141，分别位于第1、12号染色体上。国内外研究表明，miR-200b被认为是一种抑癌基因。癌胚抗原(CEA)最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，然后有学者发现在大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等多种癌症中均有明显表达[2]。CEA作为一个广谱肿瘤标志物，对大肠癌、乳腺癌和肺癌等的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个良好的指标，但其特异性不强，敏感性不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。现对大肠癌组织中的miR-200b和CEA mRNA的表达情况及其与临床病理资料的相关性进行研究，为临床提供高特异性和敏感性的实验室数据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取60例大肠癌患者，男37例，女23例；年龄41～85岁，平均年龄60岁。标本取自大肠癌组织，同时采集距癌旁5 cm外的癌旁正常组织作为对照。所有标本选自2010年6月至2015年7月该院进行手术及胃镜治疗的患者，标本切除后直接用生理盐水漂洗干净，保存于-70 ℃冰箱备用。60例大肠癌患者均经病理确诊，手术前均未接受任何放疗、化疗，以及其他针对肿瘤的相关治疗等。

1.2 仪器与试剂 美国ABI公司Step OneTMReal-Time PCR 仪。美国Invitrogen公司的Trizol试剂； GAPDH引物(Hs002)、miR-200b与CEA引物序列均由日本TaKaRa公司合成；Fast SYBR Green Master Mix购自美国ABI公司。

1.3 方法 (1)组织总RNA提取：使用DEPC处理实验的器械和溶液，采用Qiagan公司生产的RNAlater，该试剂可稳定保护RNA避免受RNase的降解，保证RNA样品质量。组织总RNA的提取过程按照说明书严格进行，提取的总RNA保存于-70 ℃冰箱备用。(2)荧光定量PCR：将组织总RNA以通用引物oligo(dT)进行逆转录合成cDNA，使用SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒，以GAPDH为内参，以癌旁正常组织作为对照标本，每个标本设立3个平行管，反应结束后，采用ABI公司Step OneTM软件比较CT(ΔΔCT)定量方法进行分析。

2 结 果

2.1 2种组织标本的miR-200b和 CEA mRNA 表达水平 大肠癌组织中miR-200b与CEA mRNA的表达与正常组织比较，均显著升高，差异均有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 2种组织标本的miR-200b与CEA表达水平

注：与正常组织比较,*P<0.01。

2.2 不同临床资料的miR-200b和CEA mRNA表达水平 大肠癌患者miR-200b 和CEA mRNA表达呈阳性(+)，两者在正常组织的表达呈阴性(-)。大肠癌患者的miR-200b阳性表达率为25.00%，CEA阳性表达率为80.81%。见表2。

表2 不同临床资料的miR-200b和CEA mRNA表达水平

2.2 miR-200b与CEA 表达的相关性以及与病理参数的关系 大肠癌腺癌的高分化、中分化、低分化之间的miR-200b和CEA的表达率，差异有统计学意义(P<0.05)；且分化越低，miR-200b表达率也低，CEA表达率增高；在TNM Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期患者中，miR-200b mRNA表达率逐渐减低，CEA mRNA逐渐增高。淋巴转移组织的miR-200b 表达率低于无转移者，CEA mRNA表达率则高于无转移者。大肠癌组织的miR-200b和CEA的mRNA表达具有相关性(r=-0.790,P<0.001)，且呈负相关关系(-1

表3 miR-200b和CEA 表达的相关性以及与病理参数的关系

3 讨 论

CEA 是反映肿瘤发生和发展的标志物，在癌症的诊疗中发挥重要作用，具有一定程度的指导意义，但因其缺乏足够的组织特异性和肿瘤特异性，因此在肿瘤的早期诊断、疗效评估和预后判定的应用较为局限[3]。

miR是细胞中的非编码RNA，在肿瘤的发生、发展中起重要作用，是基因表达的关键调节子，调节多种生物学进程，如细胞分化、细胞周期、细胞增殖与凋亡、血管生成等。最新研究报道，miR可通过多种方式促进或抑制肿瘤细胞的增殖或转移。国内外研究表明，miR-200b在胃癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中的表达均下调，可抑制癌细胞增殖和迁移[4-8]。

本研究采用一系列的实验技术分析miR-200b和CEA在大肠癌组织和相应的癌旁正常组织中的mRNA表达水平，同时研究miR-200b和CEA的表达情况与大肠癌临床病理参数之间的关系，结果显示，miR-200b在大肠癌组织呈表达降低或缺失的状态，是导致大肠癌发生、发展的重要因素之一，miR-200b和CEA的表达具有相关性，且呈负相关关系，说明miR-200b表达的改变可与CEA一样作为大肠癌发生和发展、治疗和预后的潜在指标，而miR-200b可能比传统的蛋白分子类肿瘤标志物更加有效，解决传统蛋白标志物抗体在准确定量上的局限性，更好地提供大肠癌患者的个体化诊疗思路，在早期诊断、肿瘤分子分型、药物筛选、预后评估中具有很大的潜力，并在一定程度上为大肠癌的早期诊断、治疗、预后寻求新的思路。

[1]LeeRC,FeinbaumRL,AmbrosV.TheC.elegansheterochronicgenelin-4encodessmallRNAswith antisense complementarity to lin-14[J].Cell,1993,75(5):843-854.

[2]Gold P,Freedman SO.Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system[J].J Exp Med,1965,122(3):467-468.

[3]Kurashige J,Mima K,Sawada G,et al.Epigenetic modulation and repression of miR-200b by cancer-associated fibroblasts contribute to cancer invasion and peritoneal dissemination in gastric cancer[J].Carcinogenesis,2015,36(1):133-141.

[4]Dhayat SA,Mardin WA,Khler G,et al.The microRNA-200 family-a potential diagnostic marker in hepatocellular carcinoma?[J].J Surg Oncol,2014,110(4):430-438.

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[7]Khler CU,Bryk O,Meier S,et al.Analyses in human urothelial cells identify methylation of miR-152,miR-200b and miR-10a genes as candidate bladder cancer biomarkers[J].Biochem Biophys Res Commun,2013,438(1):48-53.

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The expression of miR-200b and CEA and the correlation between the two factors in colon cancer*

DUYeping,WANGHailian,YINLili,WUChunmei,MIAOJinhua△

(DepartmentofClinicalLaboratory，the264thHospitalofPLA,Taiyuan,Shanxi030001,China)

Objective To study the expression of transcription factor miR-200b and CEA and the correlation between the two transcription factors in the process of occurrence and development of colorectal cancer.Methods Expression miR-200b and CEA mRNA by real-time PCR in 60 colon cancer tissues and corresponding normal tissues were detected and the results were compared with the clinical features and pathological characters.The relationship between the mRNA expression of miR-200b and CEA in 60 colon cancer tissues was determined.Results The expression rate of CEA mRNA was detectable to highly expressed rates in colon cancer tissues than that in matched normal tissues (P<0.01),whereas miR-200b mRNA in the colon cancer tissues was significantly lower than that in the matched normal tissues(P<0.01).There was no significant correlation between miR-200b,CEA mRNA expression and age,sex,tumor location(P>0.05).Loss expression or down regulation expression of miR-200b mRNA was detected,whereas CEA mRNA was detectable to highly expressed in the different histological grade and Dukes stages.The expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA were positively correlated with the histological grade in colon cancer.A significant correlation was found between the expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA (r=-0.790,P<0.001).Conclusion Loss or down regulation expression of miR-200b mRNA,whereas CEA is detectable to highly expressed in colon cancer.Negative correlation occurred in miR-200b mRNA and CEA mRNA indicates that miR-200b and CEA provide the new clues of genetic diagnosis and treatment.

colon cancer; miR-200b; CEA; real-time PCR

山西省自然科学基金资助项目(2013011043-4)。

杜叶平，女，主管技师，主要从事肿瘤分子生物学研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.002

A

1673-4130(2016)20-2808-03

2016-03-20

2016-06-26)