免疫比浊法测定抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用

陈浩全，曾嫚妮

(1．广西壮族自治区玉林市中西医结合骨科医院检验科 537000；2.广西壮族自治区玉林市第一人民医院检验科 537000)



·论 著·

免疫比浊法测定抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用

陈浩全1，曾嫚妮2

(1．广西壮族自治区玉林市中西医结合骨科医院检验科 537000；2.广西壮族自治区玉林市第一人民医院检验科 537000)

目的 评价免疫比浊法检测抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)在类风湿关节炎(RA)诊断中的临床价值。方法 收集195例RA、105 例骨关节炎、52例骨质疏松、42例结缔组织、40例系统性红斑狼疮、305例其他疾病患者，以及90例健康对照者的血清标本，分别使用免疫比浊法(Latex)、化学发光微粒子免疫法(CMIA)、酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测CCP并比较结果。结果 Latex法检测RA阳性141例(72.30%)，关节炎阳性54例(51.42%)，骨质疏松阳性15例(28.84%)，结缔组织阳性15例(35.71%)，系统性红斑狼疮阳性18例(45.0%)，其他疾病阳性11例(3.60%)，90例健康对照者均为阴性。批内变异系数为1.9%～2.0%，总变异系数为2.0%～2.1%，Latex法试剂线性范围为0.8～100 U/mL。Latex法、CMIA法、ELISA法检测CCP的敏感性和特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Latex法检测CCP的敏感性和特异性好，线性范围宽，可用于临床。

免疫比浊法； 类风湿关节炎； 抗环瓜氨酸肽抗体

类风湿关节炎 (RA) 是一种自身免疫疾病，其基本病理改变为滑膜炎，由于关节滑膜炎性和增生，造成关节软骨、骨、滑膜破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。关节滑膜的破坏可在RA发病3个月内出现，若未及时治疗，部分患者可在2年内出现不可逆的骨质破坏。因此RA的早期诊断极其重要。RA的诊断依据主要是临床表现、X光线检查、类风湿因子(RF)检测[1-2]。但RA早期症状隐匿，符合上述标准时患者已出现骨关节损坏，且RF在其他自身免疫性疾病中也有一定的阳性率，不利于RA的早期诊断和干预治疗。近年来，抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPAs)系列的发现是RA诊断领域新的里程碑，ACPAs在RA的鉴别诊断和病情监测中发挥重要作用[3-4]。在不典型RA患者，尤其是早期和老年RA患者，ACPAs具有重要的诊断意义[5]。目前抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)检测多采用实验时间较长的酶联免疫吸附试验法(ELISA)法，现应用免疫比浊法(Latex)测定CCP抗体，通过与化学发光微粒子免疫法(CMIA)和ELISA法比较，评价其在RA中的诊断价值及优势。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取该院2014年2月至2016年2月的住院和门诊患者，所有病例均符合1987年美国风湿病学学会(ACR)的RA分类诊断标准。RA患者195例，骨关节炎患者105 例，骨质疏松患者52例，结缔组织患者42例，系统性红斑狼疮患者40例，其他疾病患者(无自身免疫性疾病及风湿病史)305 例。健康对照者90例，均为该院体检中心体检健康者，且无自身免疫性疾病及风湿病史。

1.2 仪器与试剂 采集所有研究对象的血清标本，2～8 ℃保存，1周内完成检测。Latex法采用德国西门子ADVIA 2400自动生化仪及宁波美康试剂盒；ELISA法使用北京普朗酶标仪及德国欧蒙生物酶联免疫试剂盒；CMIA法应用美国雅培i2000自动化学发光仪及雅培配套试剂盒。

1.3 检测方法

1.3.1 3种检测方法判断标准 Latex法检验结果大于或等于35 U/mL为阳性，小于35 U/mL为阴性。ELISA法OD<0.8×OD临界质控为阴性；0.8×OD临界质控:>OD<1.2×OD临界质控为可疑，OD>1.2×OD临界质控为阳性。CMIA法检验结果大于等于5 U/mL为阳性，小于5 U/mL为阴性。

1.3.2 精密度评价 依据CLSI EP15-A文件标准[6]，Latex法试剂分别测定高、低2个水平(浓度约11、85 U/mL)的混合血清，连续检测5 d，第5天测4次。计算各水平的批内及总变异系数(CV%)，并确认其不精密度范围是否与厂商标注的相符合。

1.3.3 线性范围 采用1例低浓度混合血清(L)和1例高浓度混合血清(H)及生理盐水(S)，按0.25L；0.75S、0.5L；0.5S、1.0L、0.1H；0.9L、0.2H；0.8L、0.3H；0.7L、0.4H；0.6L、0.5H；0.5L、0.6H；0.4L、0.7H；0.3L、0.8H；0.2L、0.9H；0.1L、1.0H,配成13个浓度梯度的混合血清。其预期浓度按公式:X=(CL×VL+CH×VH)/(VL+VH)计算。使用Latex法试剂对混合血清按浓度从低到高各测3次，记录结果。按照CLSI EP6-A文件标准初步检查数据[7]，检查离群值，判断重复性，进行多元线性回归，将结果分别拟合1、2、3次多项式，并绘制散点图进行评价。

1.4 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件进行数据分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3种方法检测的符合率结果比较 30例确定为阳性的标本(印迹法确认)，Latex法检测阳性28例(93.3%)，CMIA法检测阳性29例(96.6%)，ELISA法检测阳性27例(90.0%)。30例确认阴性的标本，Latex法检测阴性28例(93.3%)，CMIA法检测阴性29例(96.7%)，ELISA法检测阴性28例(93.3%)。3种方法的符合率为90.0%。

2.2 3种方法检测CCP抗体的敏感性和特异性结果比较 3种方法检测抗CCP抗体的敏感性和特异性比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3种方法检测CCP抗体的敏感性和特异性结果比较[n(%)]

2.3 精密度试验 Latex法试剂的实测精密度小于试剂盒标注的精密度，变异较小，可满足临床应用。见表2。

表2 Latex法试剂的精密度试验

2.4 线性范围评价 Latex法检测标本浓度范围为0.8～100 U/mL,无明显离群值数据，最佳拟合为一次多项式。Pearson相关性分析显示，预期值与实测值拟合相关方程中b值为0.95～1.02，a与0无显著性差异，P=0.264，相关系数(R2)为0.994，均大于0.975，线性范围良好。见图1。

3 讨 论

Schellekens将1条由19个氨基酸残基组成的瓜氨酸肽链中的2个丝氨酸替换为半胱氨酸，形成与β-转角具有相似结构的二硫键，合成CCP。抗CCP抗体阳性率仅略高于RF，可能是由于环瓜氨酸多肽是在微丝蛋白及其他类似于波形蛋白结构的基础上人工合成的多肽抗体，比波形蛋白小20倍，抗原决定簇较少，减弱其抗原性，但其特异性可达95%以上[8]。抗CCP抗体阳性是侵蚀性关节损害的一个重要标志及危险因素，联合检测IgM RF和抗CCP抗体能够提高RA的诊断水平[9]。本研究应用Latex法检测CCP抗体，通过与CMIA法和ELISA法比较，其敏感性及特异性差异无统计学意义(P>0.05)，3种方法的符合率为90.0%，Latex法试剂精密度高，批内变异系数为1.9%～2.0%，总变异系数为2.0%～2.1%；线性范围宽(0.8～100 U/mL)，能在全自动生化仪上进行快速检测，值得临床推广应用。

[1]叶荻庆，唐静.67例临床标本ANA和RF测定结果分析[J].现代医药卫生，2003，19(12)：1517-1518.

[2]鲁然.风湿性关节炎的实验室研究与进展[J].中国误诊学杂志，2004，4(6)：846-847.

[3]CordonnierC,MeyerO,PalazzoE,etal.DiagnosticvalueofantiRA33antibodyantikeratinantibody,antiperinuclearfactorandantinuclearantibodyinearlyrheumatoid arthritis comparison with rheumatoid factor[J].Br JR heumato,1996,35(7):620-624.

[4] Youinou P,Serre G.The antiperinuclear factor and antikeratin antibody Systems[J].Int Arch Allergy Immunol,1995,107(4):508-518.

[5]Vangaalen FA.Testing for antibodies to cyclic citrullinated peptides and Rheumatoid factor-what is best for early RA[J].Nat Clin Pract Rheumatol,2007,3(9):488-489.

[6]CLSI.EP15-A User demonstration of performance for preaccuracy[S].Wayne,PA:CLSI,2001.

[7]CLSI.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].Wayne,PA:CLSI,2003.

[8] Coenen D,Verschueren P,Westhovens R,et al.Technical and diagnostic perform-Ance of 6 assays for the measurement of citrullinated protein/peptide antibodies in the diagnosis of rheumatoid arthritis[J].Clin Chem,2007,53(3):498-504.

[9]Barra L,Pope J,Bessette L,et al.Lack of seroconversion of rheumatoid factor and anticyclic citrullinated peptide in patients with early inflam matory arthritis:a systematic literature review[J].Rheum Atology(Oxford),2011,50(2):311-316.

The clinical application to detect the anti cyclic citrullinated peptide antibody by immune Turbidimetry

CHENHaoquan1,ZENGManni2

(1.DepartmentofLaboratory,OrthopaedicsHospitalofYulinCity,Yulin,Guangxi537000,China;2.DepartmentofLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofYulin,Yulin,Guangxi537000,China)

Objective To evaluate the clinical application value of anti cyclic citrullinated peptide antibody(CCP) by immune turbidity method for the the diagnosis of rheumatoid arthritis (RA).Methods The serum of 195 cases of RA patients,105 cases of osteoarthritis,52 cases of osteoporosis,42 cases of connective tissue,40 patients with systemic lupus erythematosus,305 cases of patients with other diseases and 90 cases of healthy controls were collected,the CCP were detected by latex CMIA and ELISA.Results The CCP positive were 141 cases in RA(72.30%),54 cases(51.42%) in arthritis,15 cases in osteoporosis (28.84%),15 cases in connective tissue(35.71%),18 cases (45.0%) in systemic lupus erythematosus (SLE),11 cases (3.60%) in other diseases.There were negative in 90 cases of healthy controls.The variation coefficient was 1.9%-2.0%,and the total coefficient of variation was 2.0%-2.1%.The linear range of Latex method was divided into 0.8-100 U/mL.There were no diffrence in the sensitivity and specificity of detection to CCP by CMIA,ELISA and Latex.Conclusion The sensitivity and specificity of detection to CCP by Latex was good,and there was wide linear range.

immunoturbidimetry; rheumatoid arthritis; anti cyclic citrullinated peptide antibody

陈浩全，男，副主任技师，主要从事临床生物化学研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.021

A

1673-4130(2016)20-2857-03

2016-03-12

2016-06-21)