胃癌组织COMP蛋白表达的临床病理意义

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(1.南华大学附属第一医院放疗科,湖南 衡阳 421001；2.南华大学附属第一医院病理科；3.南华大学附属南华医院疼痛科)

·基础医学·

胃癌组织COMP蛋白表达的临床病理意义

田畅1，赵强2，周华茂3，艾小红1*

(1.南华大学附属第一医院放疗科,湖南 衡阳 421001；2.南华大学附属第一医院病理科；3.南华大学附属南华医院疼痛科)

目的观察软骨寡聚基质蛋白(COMP)在胃癌组织中的表达意义。方法采用免疫组化观察COMP蛋白组织芯片(包括正常胃黏膜、癌旁及胃癌组织)中的表达，并分析其表达的意义。结果免疫组化结果显示COMP蛋白在胃癌组织中阳性表达率高于正常胃黏膜和癌旁组织(P<0.05)；癌旁组织高于正常胃黏膜组织(P<0.05)；有淋巴结转移组织高于无淋巴结转移者(P<0.05)；Ⅲ～Ⅳ期患者组织高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。结论

胃癌； COMP蛋白； 临床病理意义

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率与死亡率均居消化道肿瘤第一位[1-2]。胃癌的发生发展是一个多因素参与、多步骤演进和多基因相互共同作用的复杂过程。胃癌的发生、发展过程中与宿主癌基因及抑癌基因等的改变有关[2-5]。早期诊断仍是防治胃癌非常重要的举措。课题前期通过定量蛋白质组学技术[6]筛选获得胃癌相关蛋白质软骨寡聚基质蛋白(Cartilage oligomeric matrix protein，COMP)。观察其在胃癌组织中的表达，将为胃癌的诊断、分子病理分型等提供有价值的实验资料。

1 材料与方法

1.1病例资料组织芯片(包括正常胃黏膜、癌旁及胃癌组织)由湘潭市第一人民医院病理科吴勇军主任医师赠送。该组织芯片包括81例胃癌手术切除标本，其中男性56例，女性25例，患者年龄27～81岁，平均年龄为55.35岁；49例胃癌肿块>3.0 cm，32例≤3.0 cm；胃高分化腺癌5例、中分化腺癌17例、低分化腺癌59例；无淋巴结转移患者26例、有淋巴结转移患者55例；Ⅰ～Ⅱ期患者32例，Ⅲ～Ⅳ期49例。组织芯片包括5×10个点阵，所有组织均经临床病理确诊，患者术前均未进行化、放疗。

1.2主要试剂抗COMP蛋白抗体(TA349820)、二抗均购自美国Santa Cruz公司；DAB显色试剂盒和S-P免疫组化试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司。

1.3免疫组化观察蛋白质的表达采用免疫组化(S-P法)观察COMP蛋白在正常胃黏膜、癌旁和胃癌组织中的表达，设立阳性对照组与阴性对照组，操作步骤如下：将组织芯片置于58 ℃烤箱中过夜，充分脱蜡；经过不同浓度的酒精水化；置于枸椽酸盐缓冲液(pH 6.0)中 92～98 ℃ 5 min 进行抗原修复；滴加3%过氧化物酶处理 37 ℃ 15 min；滴加血清封闭37 ℃ 10 min，阻断非特异性结合位点；滴加稀释一抗液，置于湿盒中4 ℃过夜；滴加稀释的二抗，37 ℃ 15 min；滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，37 ℃ 15 min；滴加DAB显色，复液、分化、返蓝、脱水、透明、封片，观察蛋白质在不同组织中的表达情况。

1.4蛋白质表达结果的判定将免疫组化染色组织芯片置于显微镜下观察，了解不同组织中蛋白质表达部位与染色情况，其中阳性表达显示为黄色、棕色或棕褐色。在芯片中每个组织块随机选取5个不同高倍镜视野，记数细胞总数与蛋白质阳性表达细胞数，重复计数3次，取平均值作为细胞数，计算蛋白质的阳性表达率[2-5]。蛋白质表达的判定根据显色的强度与阳性表达率综合计分，显色强度计分为：无显色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分；阳性表达率计分为：≤10%为1分；11%～50%为2分；≥50%为3分，将显色强度分值×阳性表达率分值所得数值为蛋白质的表达结果，其中1分为阴性“-”；2～4分为阳性“+”，≥6分为强阳性“+++”，另外阳性表达率>10%者也为蛋白质表达阳性。

2 结 果

2.1免疫组化染色观察COMP蛋白的表达采用免疫组化染色观察组织芯片中COMP蛋白的表达情况，并分析及临床意义。结果显示，COMP蛋白表达主要位于细胞浆(图1)。

图1 免疫组化染色观察COMP蛋白质的表达(S-P法，400×)

2.2 COMP蛋白的表达意义分析将免疫组化染色结果进行统计分析，结果显示COMP蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于正常胃黏膜和癌旁组织；另外，癌旁组织中的阳性表达率高于正常胃黏膜组织(表1，P<0.05)。COMP蛋白在胃癌不同分化组织间表达不同，其中高分化腺癌组织阳性表达率低于中、低分化腺癌组织，中分化腺癌组织阳性表达率低于低分化腺癌组织(表1，P<0.05)。有淋巴结转移者的阳性表达率高于无淋巴结转移者(表1，P<0.05)。Ⅲ-Ⅳ期患者组织中的阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期(表1，P<0.05)。

3 讨 论

胃癌的发生、发展过程与宿主体内癌基因与抑癌基因的改变等密切相关。癌基因的异常激活，如癌基因K-ras、酪氨酸激酶细胞表面受体c-erbB2和酪氨酸激酶跨膜受体c-met 等可促进胃癌的发生、发展，增加胃癌的转移能力[7]。抑癌基因的失活如p53、RUNX3等基因突变也参与胃癌的发生[8]。因此深入了解相关基因及其蛋白在胃癌发生、发展过程中的表达及意义，对诠释胃癌发病的分子机制，提高胃癌的早期诊断率具有十分重要的作用。

表1COMP蛋白表达的统计分析

指 标nCOMP蛋白表达-+～+++阳性率(%)χ2患者性别男性56233358．93%女性25111456．00%1．73正常胃黏膜343225．88%癌旁组织2619726．92%a5．18胃癌组织高分化腺癌53240．00%a5．22中分化腺癌178952．94%ab12．18低分化腺癌59233661．01%abc27．13，8．39肿块大小﹥3．0cm49212857．14%≤3．0cm32131959．38%0．38淋巴结转移无26141246．15%有55163970．91%d4．64TNM分期Ⅰ～Ⅱ32171546．88%Ⅲ～Ⅳ49133673．47%e5．87

与正常胃黏膜组织比较，a：P<0.05；与癌旁组织比较，b：P<0.05；与高分化腺癌组织比较，c：P<0.05；与无淋巴结转移比较，d：P<0.05；与 TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期比较，e：P<0.05

近几年来，蛋白质组学技术飞速发展与革新，许多研究者采用蛋白质组学技术，获得了大量胃癌相关差异表达蛋白质，试图用于胃癌诊断、治疗及临床预后评估等。课题组前期采用定量蛋白质组学技术，筛选获得了一系列胃癌相关的蛋白，为了解所获差异表达蛋白质在胃癌中的表达情况及意义，本文选取其中差异倍数较大的蛋白质COMP，分析了该蛋白质在胃癌中的表达情况及意义，以期为胃癌诊断、治疗及临床预后评估等，提供有价值的实验资料。

软骨寡聚基质蛋白(Cartilage oligomeric matrix protein，COMP)为含有5个分子量为87 kD亚单位(755 个氨基酸组成)组成的同源五聚体糖蛋白，分子量为435 kD，属于血小板反应蛋白(thrombospondin，TSP)家族，也称血小板反应素5[9-11]。COMP是一种钙结合蛋白，主要通过天冬氨酸与Ca2+连接[12]。有研究显示，COMP蛋白可诱导凋亡抑制因子的表达，阻止细胞发生凋亡[13-15]。本研究结果显示，COMP蛋白在胃癌组织中表达高于正常胃黏膜和癌旁组织，同时胃低分化腺癌组织高于高、中分化胃癌组织，以及癌旁组织高于正常胃黏膜组织表达，提示该蛋白可能参与胃癌发生与发展，其作用机制可能与COMP蛋白诱导凋亡抑制因子的表达，抑制细胞的凋亡有关，尤其是胃低分化腺癌。结果提示，COMP蛋白的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关，随着胃癌组织分化程度的降低、淋巴结转移及TNM分期的增加，阳性表达率则升高。细胞的凋亡涉及众多细胞因子的参与，至于COMP蛋白如何在胃癌发生与发展中发挥作用，有待后续的进一步研究。深入揭示影响COMP蛋白在胃癌组织中表达的分子机制，可为深入了解胃癌发生与发展的分子机制提供理论依据。

总之，本研究证实了胃癌组织中COMP蛋白的表达高于正常胃黏膜与癌旁组织，且与胃癌组织的分化程度有关，并分析了其在胃癌组织中表达的意义。结果与课题组前期蛋白质组学研究结果基本一致。本研究结果初步分析了COMP蛋白在胃癌组织中的表达情况，为后续寻找胃癌诊断、治疗及临床预后评估的蛋白分子提供了有价值的实验资料与依据。

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TheClinicalPathologicalSignificanceofCOMPProteinExpressioninGastricCancerTissue

TIAN Chang，ZHAO Qiang，ZHOU Huamao，et al
(DepartmentofRadiotherapy，theFirstAffiliatedHospital，UniversityofSouthChina，Hengyang，Hunan421001，China)

ObjectiveThis study aimed to observe the expression significance of Cartilage oligomeric matrix protein (COMP) in gastric cancer tissue.MethodsThe expression of COMP protein was observed by immunohistochemistry staining in normal gastric mucosa，cancer side tissue and gastric cancer and the expression significance of COMP protein was analyzed in gastric cancer tissue.ResultsThe immunohistostaining results showed that the expressin positive rate of COMP protein was higher in gastric cancer tissue than that in normal gastric mucosa and cancer side tissue (P<0.05)，in cancer side tissue than that in normal gastric mucosa (P<0.05)，in lymphaden metastatic gastric cancer tissue than that in no lymphaden metastatic gastric cancer tissue (P<0.05) and in Ⅲ-Ⅳperiod patient gastric cancer tissue than that in Ⅰ-Ⅱperiod (P<0.05).ConclusionAs the differentaiation level decreased，lymphaden metastasis and TNM classification of gastric cancer increased，the expression rate of COMP protein was heightened.

gastric cancer; COMP protein; clinical pathological significance

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.05.003

2016-05-05；

2016-07-21

衡阳市科技局项目(2013KJ02).

*通讯作者，E-mail:1163504926@qq.com

COMP蛋白表达随着胃癌组织分化程度降低、淋巴结转移及TNM分期增加表达升高。

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蒋湘莲)