HPLC法测定疏表灵颗粒中芍药苷和白花前胡甲素含量

张 囡，陈双璐，林 宏

(天津市儿童医院，天津 300074)

HPLC法测定疏表灵颗粒中芍药苷和白花前胡甲素含量

张 囡，陈双璐，林 宏*

(天津市儿童医院，天津 300074)

目的：建立HPLC法测定疏表灵颗粒中芍药苷和白花前胡甲素含量。方法：色谱柱为Shim-pack VP-ODS(150 mm ×4.6 mm)，流动相为乙腈-0.4 %磷酸水溶液梯度洗脱，流速1.0 ml/min，检测波长320 nm，进样量10 μl。结果：芍药苷和白花前胡甲素分别在16.8～336.0 μg/ml和2.0～40.0 μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系，芍药苷的平均加样回收率为100.09%，RSD为1.00%(n=9)，白花前胡甲素的平均加样回收率为100.08%，RSD为1.22%(n=9)。结论：本法简便、结果准确、重复性好，可用于疏表灵颗粒的质量控制。

疏表灵颗粒，芍药苷，白花前胡甲素，HPLC

疏表灵颗粒为本院常用医院制剂(批准文号：津药制字Z20070313)，由前胡、赤芍、板蓝根、玄参、天花粉、淡豆豉等18味中药制成，具有散风解表、解肌透疹、清热解毒的功效，主要用于小儿呼吸道感染、流感、麻疹、风疹、幼儿急疹。原质量标准[1]无含量测定项，为提高其标准，有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定本品中芍药苷和白花前胡甲素含量，以此作为该制剂的质量控制指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)，LC solution色谱工作站；电子天平(梅特勒-托利多AL-104)。

1.2 试药 芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110736-201438)，白花前胡甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110766-200619)；疏表灵颗粒(天津市儿童医院，批号20150401、20150501、20150601)；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)；水为娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm)；流动相：0.4%磷酸-乙腈梯度洗脱，如表1；检测波长320 nm[1]；柱温20 ℃；流速1 ml/min；进样量10 μl。理论板数按芍药苷和白花前胡甲素峰计算均不低于2 000。

表1 疏表灵颗粒梯度洗脱时间表

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取芍药苷、白花前胡甲素对照品适量，加甲醇溶解制成浓度为1.52 mg/ml的芍药苷及浓度为0.40 mg/ml的白花前胡甲素对照品贮备液。精密量取两种贮备液各1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液[2-4]。

2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异下的疏表灵颗粒，研细，精密称定约2.0 g，置25 ml量瓶中，加入甲醇适量，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得[5-8]。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方配比，制备不含赤芍、前胡的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图1。

2.3 线性关系考查 分别精密量取0.76 mg/ml 的芍药苷对照品溶液和浓度为0.40 mg/ml白花前胡甲素对照品溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积A为纵坐标，进样浓度C(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程：芍药苷为A=12 145.93C-32 892.27 (r=0.999 9，n=6)；白花前胡甲素为A=12 576.87C+11 448.78 (r=0.999 8，n=6)。结果表明：芍药苷在16.8～336.0 μg/ml范围内、白花前胡甲素在2.0～40.0 μg/ml范围内线性关系良好。

1.芍药苷 2.白花前胡甲素

2.4 重现性试验 取同一批号(20150401)颗粒适量，精密称取2.0 g，共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定，分别计算出芍药苷含量为982.5 μg/g，白花前胡甲素含量为240.0 μg/g，计算RSD分别为0.45%和0.99%。

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，计算芍药苷和白花前胡甲素峰面积的RSD分别为0.84%及0.66%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一批号(20150401)颗粒适量，精密称取2.0 g，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件分析，分别在0、2、4、6、8、12和24 h进样，测得芍药苷和白花前胡甲素峰面积值的RSD分别为0.50%及0.86%，符合要求。

2.7 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20150501)样品适量，精密称取2.0 g，9份，按样品含量的80%、100%和120%加入适量芍药苷和白花前胡甲素对照品，按 “2.2.2” 项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率及RSD。测得样品中芍药苷平均回收率为100.09%，RSD为1.00%；白花前胡甲素平均回收率为100.08%，RSD为1.22%。结果见表2和表3。

表2 芍药苷加样回收率试验结果(n=9)

表3 白花前胡甲素加样回收率试验结果(n=9)

2.8 样品测定 取疏表灵颗粒样品3批(批号 20150401、20150501、20150601)，按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，测定样品中芍药苷和白花前胡甲素的含量。结果样品中芍药苷的含量分别为953.7、950.3和947.9 μg/g，白花前胡甲素的含量分别为253.8、249.8和248.3 μg/g。

3 讨论

3.1 指标成分的选择 疏表灵颗粒方中赤芍、前胡为主药，芍药苷是赤芍中主要的有效成分，药理实验表明芍药苷具有抗氧化、降低血液黏度、抑制血小板聚集、改善微循环及扩张血管等作用；且芍药苷能抑制肿瘤细胞膜上ATP活性及升高腺苷酸，环化酶活性的作用[9]。白花前胡甲素为前胡中提取出的一种角型吡喃香豆素，为前胡中主要活性成分，具有舒张气管平滑肌、抑制血小板聚集、促钾通道开放、阻滞钙内流、抗缺血再灌注损伤等作用[10]。因此选择对芍药苷和白花前胡甲素进行含量测定，可以有效控制赤芍、前胡的质量，进而控制疏表灵颗粒的质量。

3.2 检测波长的考查 分别对芍药苷与白花前胡甲素进行紫外吸收光谱扫描，可得知二者最大吸收波长分别为230 nm及322 nm。在研究过程中发现，如设定检测波长为230 nm，白花前胡甲素吸收值较低，且峰形较差。而检测波长设定为320 nm，芍药苷吸收度较好，故选用320 nm作为检测波长。

3.3 提取方法的考查 本研究在实验过程中分别采用不同比例的甲醇、乙醇、三氯甲烷进行超声提取，并对不同超声提取时间进行考查。最终确定用甲醇超声提取30 min，提取成分含量较高，且操作简便。

3.4 流动相梯度洗脱条件的考查 由于芍药苷与白花前胡甲素极性差别较大，因此本研究选用梯度洗脱的方法同时测定二者含量。经反复试验证实0～7 min，0.4%磷酸溶液-乙腈为83∶17适于芍药苷的洗脱，而8～22 min，0.4%磷酸溶液-乙腈为30∶70更适于白花前胡甲素的洗脱，故本研究选择此梯度作为最终的实验条件。

1 中国药典[S].二部.2010：70，187

2 陈华，姜云平，高朝霞，等．血府逐瘀口服液中芍药苷含量的测定[J]．西部医学，2009，21(12):2162-2163

3 符翠莉，郭炎荣．RP-HPLC法测定颈痛颗粒中葛根素和芍药苷的含量[J]．中国药师，2009，12(11):1555-1557

4 李娉婷，陈子娇，贾薇，等．中药胶囊剂中芍药苷含量测定方法优化[J]．时珍国医国药，2014，25(10):2355-2357

5 陈慧真，娄伟建．不同厂家乌鸡白凤丸中芍药苷含量的HPLC测定[J]．中国中药杂志，2008，33(19):2275-2276

6 李红燕，张蕊，冯小川．HPLC 测定除痰止嗽丸中的桔梗皂苷 D桔梗皂苷 E 白花前胡甲素和白花前胡乙素[J]．中国试验方剂学杂志，2014，20(2):86-90

7 黄瑞红，杨慧文．RP-HPLC法测定清肺抑火丸中白花前胡甲素的含量[J]．中国药房，2010，21(27):2556-2557

8 周卿，杨建文，郑天宇．RP-HPLC法同时测定宝咳宁颗粒中4种成分[J]．中成药，2014，36(8):1678-1681

9 郑世存，李晓宇，欧阳冰，等.芍药苷药理作用研究新进展[J].中国药物警戒，2012,9(2):100-103

10 薛俊超．白花前胡化学成分及相关药理作用的研究进展[J]．海峡药学，2012，24(2):34-38

2016-03-02

R927.2

A

1006-5687(2016)05-0028-03

*通迅作者：林宏，E-mail：roylinvip@126.com。