昭通葡萄中黄酮提取工艺及含量测定

李启彭，李成杨，祁 岑，沈燕琼

（1.昭通学院化学与生命科学学院，云南昭通 657000；2.昭通市农产品质量安全中心，云南昭通 657000）

昭通葡萄中黄酮提取工艺及含量测定

李启彭1，李成杨1，祁 岑1，沈燕琼2*

（1.昭通学院化学与生命科学学院，云南昭通 657000；2.昭通市农产品质量安全中心，云南昭通 657000）

分别设计单因素实验和正交实验，优化昭通葡萄中黄酮的提取工艺，并采用紫外分光光度法测定其含量。研究结果表明，最佳提取工艺为乙醇体积分数为60%，料液比为1：10，提取90 min，提取温度80℃。以芦丁为标准溶液，在510 nm处测定昭通葡萄的黄酮含量，该方法的回收率为98.6%～110.4%，相对标准偏差小于1%，可作为葡萄中黄酮的提取工艺及含量测定的新方法。

昭通葡萄；黄酮；提取工艺；含量测定

葡萄（Vitisυinifera L）又称提子，是落叶木质藤本植物，果实不仅美味可口，而且富含维生素、黄酮和各种氨基酸等营养成分，具有很高的营养价值［1-2］。其中，黄酮类化合物对“三高”有一定疗效，也具有扩张冠状动脉和脑血管等功效［3-6］。黄酮的提取方法主要有回流法，超声波提取法和超临界萃取法，测定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法和比色法等［7-10］。目前，关于葡萄中黄酮的提取工艺及测定方法的报道还比较少，需要建立简单、易重复和精度高的提取新工艺和测试方法［11-13］。

云南省昭通的地理和气候等因素，有利于葡萄的生长，果实品质优越，深受人们喜爱。由于黄酮具有良好的药用价值，探索昭通葡萄中黄酮的高效提取工艺和快速准确的测定方法，为昭通葡萄的开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试葡萄有红玫瑰葡萄和巨峰葡萄，均为昭通特产，购买自昭通市农贸市场。新鲜葡萄用清水洗净，然后剥皮，将果皮和果肉分别烘干，粉碎，过40目筛（孔径0.42 mm）备用。

1.2 标准溶液的配制及测定

称取芦丁标准品25 mg置于烧杯中，用70%的乙醇溶解，然后转移到100 m L容量瓶中，定容到刻度，即得到0.25 mg·mL-1标准液［14］。量取0.25 mg·m L-1标准溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和10.0 mL分别置于25 mL容量瓶中，分别加入5%NaNO2溶液1 m L摇匀，静置5 m in，加入1%Al（NO3）3溶液1 m L摇匀，静置5 min，加入4%NaOH溶液10 mL，用70%乙醇定容，放置10 min［14］。用紫外分光光度计在460～550 nm间测定溶液的吸光度，得到芦丁的最大吸收波长曲线和标准溶液的工作曲线。

1.3 单因素实验

1.3.1 提取溶剂

分别称取1 g红玫瑰葡萄皮在3个圆底烧瓶中，分别加入10 m L甲醇、乙醇和水，80℃回流提取2 h，冷却后过滤，滤液转移到50 m L容量瓶中，定容到刻度。分别量取2.0 mL提取液于25 m L容量瓶中，然后加入5%NaNO2溶液1 m L，1%Al（NO3）3溶液1 m L，4%NaOH溶液10 m L，定容到刻度，摇匀，然后在510 nm波长测定其吸光度［14］。

1.3.2 脱脂

分别称取1 g红玫瑰葡萄皮置于2个圆底烧瓶中，一个瓶内加入5 mL石油醚，另外一个为空白对照，进行脱脂处理，研究脱脂和不脱脂对黄酮提取效果的影响［14］。

1.4 正交实验

设计乙醇体积分数（A）、提取时间（B）、提取温度（C）和料液比（D）为4个主要考察因素，每个因素设计3个水平，选用L9（34）表设计实验［15］，以葡萄中黄酮的得率为考察指标，获得最佳的提取工艺（表1）。3个水平1、2、3，分别对应A乙醇体积分数50%、60%、70%，B提取时间60、90、120 min，C提取温度60、70、80℃，D料液比1：10、1：20、1：30 g·m L-1。

1.5 昭通葡萄中黄酮含量的测定及加标回收率

在最佳提取工艺条件下，分别称取1 g（红玫瑰和巨峰）的果皮和果肉进行提取实验，在波长为510 nm下测定其吸光度。按照上述方法重复3次，并计算相对标准偏差［15］。此外，分别在果皮样品中加入20 mg，葡萄果肉样品中加入5 mg的芦丁标准样品，在相同条件下进行回收率实验。

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长的选择及标准曲线的建立

随着扫描波长增加，吸光度逐渐增加，在510 nm波长处出现最大吸收峰；再增加扫描波长，吸光度开始下降，故确定510 nm为芦丁的最大吸收波长［15］。此外，取510 nm处的吸光度，根据浓度和吸光度可得回归方程为：A=10.113 3 C+ 0.033 13，R2=0.999 84，表明浓度为0.017～0.103 mg·m L-1时，芦丁浓度和吸光度之间呈线性关系。

2.2 单因素实验结果

2.2.1 提取溶剂

采用乙醇、甲醇、水做提取溶剂，样品在510 nm处的吸光度分别为0.425、0.208、0.367，故采用乙醇提取效果最好，水次之，甲醇效果最差。可能因为乙醇沸点较低且容易挥发，因此最佳提取溶剂是乙醇［14］。

2.2.2 样品脱脂

用石油醚进行脱脂后，样品的吸光度为0.481，比不脱脂处理的吸光度（0.243）大，可能因为提取溶剂能溶解脂类物质，降低对黄酮类物质的溶解。若对样品进行脱脂处理，可以提高黄酮的得率［14］。

2.3 正交实验结果

4个因素对黄酮提取率的影响为D＞B＞C＞A。以得率作为昭通葡萄中黄酮提取的考察指标，可以得最优提取工艺组合为A2B2C3D1，即乙醇体积分数为60%，提取时间为90 m in，提取温度为80℃和料液比为1：10，此时得率为3.55%（表1）。

表1 正交实验结果及分析

2.4 葡萄中黄酮含量的测定及加标回收率

采用上述最佳提取工艺，提取昭通特色葡萄中的黄酮，并在最佳吸收波长510 nm处，测定提取样品溶液的吸光度，由回归方程求出2种葡萄中黄酮的含量。红玫瑰果皮含量最高为3.52%，巨峰果皮为3.49%，红玫瑰果肉为0.59%，巨峰果肉为0.49%（表2），表明2种葡萄中果皮黄酮含量比果肉的高，本研究所得数值比文献［11-13］稍微偏低。

表2 葡萄样品中黄酮的含量及加标回收率（n=3）

3 小结

设计单因素实验和正交实验优化提取昭通葡萄中的黄酮，并用紫外分光光度法测定其含量。该方法操作简便，结果准确，易重复且适用于基层实验室，可作为昭通葡萄中黄酮的提取工艺及含量测定的新方法，为昭通葡萄的开发利用提供理论依据。

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（责任编辑：侯春晓）

S663.1；TQ463

B

0528-9017（2017）01-0126-02

文献著录格式：李启彭，李成杨，祁岑，等.昭通葡萄中黄酮提取工艺及含量测定［J］.浙江农业科学，2017，58（1）：126-128.

10.16178/j.issn.0528-9017.20170140

2016-08-18

昭通学院校级课题（2016xj35）

李启彭（1987-），男，云南会泽人，讲师，博士，研究方向为无机及分析化学，E-mail：83064313@qq.com。

沈燕琼，E-mail：184696105@qq.com。