QuEChERS-液质联用检测四种水果中的多菌灵

张运依，付春艳，陈姣姣



QuEChERS-液质联用检测四种水果中的多菌灵

张运依1，付春艳1，陈姣姣2

（1. 贵州省流通环节食品安全检验中心,贵州 贵阳 550002； 2. 贵州大学精细化工研究开发中心，绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地和教育部重点实验室，贵州 贵阳 550025）

建立了QuEChERS结合高效液相质谱联用仪快速检测四种水果中多菌灵的方法，并对四种水果的基质效应进行分析。在0.2~0.01 mg/L浓度范围内具有良好的线性相关性，线性相关系数大于0.99。最小检出限为0.10μg/kg，定量限为0.37μg/kg，多菌灵在四种水果中的平均回收率为93.2%~109.3%，RSD为5.0%~9.6%。该方法操作简单可靠，精密度，准确度及其灵敏度均满足农药残留分析的要求。

高效液相质谱联用仪；多菌灵；QuEChERS；农药残留

多菌灵［carbendazim, N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯]为苯并咪唑类，是一种良好的光谱杀菌剂，广泛应用于蔬菜、水果中真菌的防治，其化学性质稳定[1]。虽然多菌灵能有效抑制病原菌的繁殖、生长，但在自然环境中降解较慢，其化学性质稳定，能够持久地残留在蔬菜、水果中，易在植物体内富集，且有一定的毒性。

已有研究表明，多菌灵能够干扰哺乳动物的内分泌，并对精母细胞的减数分裂产生影响，影响人体健康[2]。因此研究多菌灵的检测方法对监控和加强我国水果的安全状况具有重要意义，所以必须建立准确性强且快速测定的方法。农业部发布的行业标准NY/T 1453-2007，NY/T 1680-2009，国家标准GB/T 20769-2008是检测蔬菜、水果中多菌灵残留量的重要依据，采用的检测方法有紫外分光光度法和液相色谱法，以及高效液相质谱法[3-5]。前处理采用的样品处理方法常为有机溶剂提取结合阳离子交换柱净化，但存在操作繁琐、消耗时间长等不足。

本文采用高效液相质谱联用，QuEChERS样品前处理技术。QuEChERS技术具有快速、高效等优点，被广泛运用于农药残留分析的前处理过程中，能够缩短时间，提高准确率，快速测定样品中多菌灵的残留量[6]。

1 实验部分

1.1 仪器与设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪（Agilent 1200-6410），色谱柱Agilent Zorbax -C18柱（3.0×100 mm，2.7μm）；高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；电子天平（精确到0.01 g）；涡旋振荡器；0.22μm有机系针孔滤膜过滤器；以及实验室常规实验设备。

1.2 试剂与材料

多菌灵标准储备液1 000μg/mL(农业部环境质量监督检验测试中心，天津)；超纯水；乙腈（德国Merk公司，色谱纯）；甲醇（色谱纯）；样品前处理试剂盒和净化包（C18、PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）GCB）（美国Agilent公司）。

1.3 实验步骤

1.3.1 标准溶液配制

将多菌灵标准储备液（1 000 μg/mL）用甲醇以及4种水果的空白溶剂分别稀释至0.2、0.1、0.05、0.02、0.01μg/mL工作溶液，现配现用。

1.3.2 试样制备

样品用组织捣碎机捣成匀浆，与4 ℃冷藏保存。

1.3.3 样品提取与净化

准确称取样品15 g（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入15 mL 0.1%的乙酸乙腈，涡旋振荡30 s，取出上清液加入萃取试剂盒（6 g MgSO4,1.5 g乙酸钠）经振荡离心后取2 mL上清液加入带有50 mg PSA,150 mg MgSO4的离心管中。涡旋离心后过0.22μm有机系针孔滤膜后，上机。

1.4 仪器条件

1.4.1 液相色谱条件

流动相:乙腈（A相），0.1%甲酸水溶液（B相）；淋洗梯度见表1所示，运行时间：11 min，进样量10 μL，柱温：40 ℃。

表1 梯度洗脱程序

1.4.2 质谱条件

离子检测方式为多反应离子检测（MRM）和子离子扫描，极性为正离子（positive），离子化方式为电喷雾离子化（ESI），毛细管电压为：4 000 V，干燥气温度为：330 ℃，干燥气流速为：8.0 L/min，雾化气压力为：40 psi，采用的离子对为m/z:192.2~160.2和192.2~132.2，碰撞能量分别为：15和20，用于定量的离子对为：192.2~132.2。

2 结果与分析

2.1 QuEChERS的讨论

QuEChERS方法近年来在国际上已经广泛应用于农药多残留分析，此法是一种快速、简单、有效的样品前处理方法。步骤简便使得对农药的损失减小，试剂的消耗降低。一般水果采用PSA+MgSO4，含色素的水果采用GCB+PSA+MgSO4，GCB能去除水果中色素从而减少色素对样品结果的影响[7]。在QuEChERS样品前处理阶段中，采用0.1%的乙酸乙腈溶液提取，因为多菌灵在0.1%的乙酸乙腈溶液中有良好的溶解性和稳定性，这是因为水果中的糖、脂质、蛋白质物质在乙腈难以溶解而多菌灵在碱性条件下容易分解，从而保证前处理的提取率[8]。

2.2 线性范围和检出限、定量限

取多菌灵溶液0.2、0.1、0.05、0.02、0.01 mg/L的纯溶剂及不同样品的基质空白溶剂上机检测，以待测物浓度为横坐标，待测物的峰面积为纵坐标，绘制线性方程如表2所见。结果显示相关系数均大于0.996 9，检出限为0.10~0.15μg·kg-1，定量限为0.37~0.49μg·kg-1，均低于残留限量。

表2 不同基质中多菌灵的线性方程、相关系数（R）、检出限 （LOD）和定量限（LOQ）

2.3 方法回收率和精密度

在四种水果中按40、100μg/kg两种水平添加标准溶液，每个水平重复5次，加标回收实验见表3，平均加标回收率在（ 93.2%~109.3% ），提取效果好，稳定性高，方法的回收率及精密度均符合检测要求。

2.4 基质效应

基质效应就是样品中的干扰物影响目标化合物的离子化，使得目标化合物在仪器上的响应发生增强或抑制的现象，为提高目标化合物测定的准确性，需要对基质效应作出评价，并选择合适方法消除或减少基质效应对测定结果的影响。本实验分别用甲醇溶液、4种不同水果空白基质溶液配成一系列的标准溶液，用高效液相质谱仪检测。结果表明四种不同水果的基质标样峰面积均小于甲醇标样的峰面积，说明这四种水果中基质对多菌灵有抑制作用，本实验为了消除基质效应的抑制作用，采用不同水果对应不同的基质配制的标准曲线计算结果[9-10]。

表3 不同基质中多菌灵的线性方程、相关系数（R）、检出限 （LOD）和定量限（LOQ）

3 结论

本实验采用QuEChERS快速检测水果中多菌灵的残留量，用0.1%的乙酸乙腈溶液提取，PSA+MgSO4净化后直接采用高效液相质谱联用仪检测，省去了复杂的净化浓缩的过程，有效提高实验效率，并且检测结果准确。本方法适用于多种水果中多菌灵的残留检测，具有较好的实际应用价值，可应用于日常的检测工作中。

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［3］NY/T 1453-2007,蔬菜水果中多菌灵等16中农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联用法[S].北京：中国标准出版社.2007.

［4］NY/T 1680-2009,蔬菜水果中多菌灵等4种苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法[S].北京：中国标准出版社.2009.

［5］GB/T 20769-2008,水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法[S].北京：中国标准出版社.2007.

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［8］杨楠，张琦，权伍英，谷晶. QuEChERS前处理方法结合液相色谱-串联质谱技术检测蔬菜中的多菌灵[J].中国卫生检验杂志, 2010, 21 (5): 1096-1097.

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［10］刘运明, 刘华良, 吉文亮, 等. QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法同时测定豆芽中7种植物生长调节剂的残留量[J]. 中国卫生检验杂志, 2015, 25 (12): 1882-1883.

Determination of Carbendazim in Four Kinds of Fruit by QuEChERS-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

1,1,2

（1. Guizhou Inspection Center for Food Safety in Circulation, Guizhou Guiyang 550002, China；2. Research and Development Center for Fine Chemicals, State Key Laboratory Breeding Base of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering, Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering, Ministry of Education, University , Guizhou Guiyang 550025, China）

A QuEChERS-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for determination of carbendazim in four kinds of fruit was developed. Meanwhile the matrix effects for the determination of carbendazim in concertrated fruit were investigated in this study. The calibration curve of carbendazim showed good linearity at the range of 0.2~0.01mg/L, the correlation coefficient was more than 0.99.The limits of quantification and determination were 0.37 and 0.10μg/kg,respectively.The recoveries of carbendazim in four kinds of fruit at 2 spiked levels of 40 and 100µg/kg were in the range of 93.2%~109.3%,the relative standard deviation(RSD) was 5.0%~9.6%.The method is simple, reliable, precision, accuracy and sensitivity, so itcan meet the requirements of pesticide residue analysis.

high performance liquid chromatography tandem mass spectrometric; carbendazim; QuEChERS

2017-09-25

张运依（1990-），女，土家族，贵州省德江县人，2013年毕业于南京农业大学食品质量与安全专业，研究方向：从事食品检验。

陈姣姣（1991-），女，硕士，研究方向农药学。

O 657

A

1004-0935（2017）11-1144-03