野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究

2017-03-31 22:14赵立杨彬君庞文生胡娟
中国民族民间医药·下半月 2017年3期
关键词:抗氧化活性

赵立 杨彬君 庞文生 胡娟

【摘要】目的:研究野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性。方法:采用紫外分光光度法,检测野生金线莲和林下种植金线莲水提液及醇提液对DPPH自由基的清除能力。结果:野生金线莲和林下种植金线莲对DPPH自由基具有一定的清除作用,其活性均为水提液优于醇提液;野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。结论:林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径。

【关键词】金线莲;林下种植;抗氧化活性

【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2017)06-0015-03

金线莲(Anoectochilus roxburghii)为兰科开唇兰属(Anoectochilus)地生型多年生草本植物,是民间常用的珍稀草药,享有“药王”、“金草”等美称。金线莲以全草入药,性平、味甘,具有清热、凉血、解毒、祛风除湿的功效[1]。现代研究发现金线莲具有降低低密度脂蛋白的氧化易感性、清除活性氧自由基等抗氧化活性[2-3]。

金线莲的种子发芽率低,生长繁殖也较为缓慢,近年来掠夺式的开采使金线莲生长的植被遭到破坏,栖息地减少,导致金线莲野生资源锐减,处于濒危状态[4]。《国家重点保护野生植物名录》(第二批)将其列为二级保护植物[5]。金线莲的野生资源亟待保护,为了拯救濒危植物,解决金线莲资源紧张问题。设施栽培、林下种植和盆栽等人工栽培模式被应用于金线莲的种植。林下种植金线莲是以林地资源为依托,利用林木枝叶适当的遮荫效果,形成有利于金线莲生长的环境进行栽培种植[6]。其具有充分利用林地资源空间,不占用粮食用田,单位生产成本较低等特点,林下种植金线莲正日益增多。本研究采用DPPH自由基清除法,以水和乙醇为提取溶剂,对野生和林下种植金线莲进行比较分析,评价抗氧化活性的差异。

1仪器与材料

11仪器UV-3200型紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司);AE240S电子分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司);L-530低速离心机(湖南湘仪实验室仪开发有限公司);KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)。

12材料野生金线莲1号购于泉州叶之典生物科技有限公司;野生金线莲2号购于福建虎伯寮生物集团有限公司;林下种植金线莲1号产自仙游金线莲林下种植示范基地,林下种植6个月,购于仙游中青生物科技有限公司;林下种植金线莲2号产自武平梁野山林下种植金线莲基地,林下种植6个月,购于福建金草生物集团股份有限公司;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)购于美国Sigma公司;L-抗坏血酸(VC)、乙醇均为分析纯,购于国药集团化学试剂有限公司。

2方法

21金线莲水提液的制备称取金线莲5g,加水350mL浸泡10min,煎煮5min,过滤取上清液;药渣加水200mL,继续煎煮5min,过滤;第三次加少许水煎煮5min,最后合并滤液至500mL;即得浓度为001g/mL的金线莲水提液。

22金线莲醇提液的制备称取金线莲1g,加入30mL乙醇浸泡30min,使药材与溶剂充分接触,超声提取2h后,离心(4000r/min,10min),取上清液,药渣重复提取2次,合并上清液,乙醇定容至100mL;即得浓度为001g/mL的金线莲醇提液。对醇提液进行浓缩,分别取上述制备的金线莲醇提液50mL,放入蒸发皿中,65℃水浴挥发浓缩,转移至10mL容量瓶中乙醇定容,得到濃度为005g/mL的金线莲醇提液。

23清除自由基活性测定分别取金线莲水提取液00、300、600、900μL于具塞试管中,加水至1mL,分别加入DPPH溶液2mL,摇匀,得到金线莲水提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液,室温下避光静置30min;分别取金线莲醇提液00、300、600、900μL于具塞试管中,加无水乙醇至1mL,分别加入DPPH 2mL,摇匀,同样得到金线莲醇提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液,室温下避光静置30min。用2mL无水乙醇代替2mL DPPH溶液作空白对照,采在517nm波长处测定吸光度,以下式计算清除率。

DPPH清除率计算公式:DPPH清除率=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

公式中 Ao为空白对照吸光度;A1为样品溶液吸光度;A2为样品对照吸光度。

3结果

31野生和林下种植金线莲水提液对DPPH自由基清除活性的影响通过实验对4个金线莲样品水提液的DPPH自由基清除活性进行测定,结果见表1。在实验研究的质量浓度范围内,4种样品对DPPH自由基的清除能力随质量浓度的增大而上升。林下种植金线莲与野生金线莲水提液对DPPH自由基的清除活性相比相差不大,其IC50值均在2~3mg/mL。

4讨论

41提取时间的选择实验对金线莲不同提取时间得水提液的DPPH自由基清除率进行比较,提取时间依次为1、3、5、10、15、20、30、40min。结果发现1~15min内其对DPPH自由基清除率逐渐增加。提取时间为15min时其清除率最高,当金线莲浓度为2mg/mL时,其清除率为4202%。提取时间超过15min后DPPH自由基清除率逐渐降低。金线莲在长时间的煎煮时,可能使其抗氧化活性成分被破坏。因此,以金线莲作为茶饮时,其煎煮时间不宜过长,以15min为宜。

42实验浓度的选择实验过程中金线莲水提液浓度在3mg/mL时,其对DPPH自由基清除率已达到50%,而金线莲醇提液的清除率仅为15%左右,对其进行浓缩。当金线莲醇提液浓度在15mg/mL时,其对DPPH自由基清除率才高于50%。因此,金线莲醇提液的实验浓度为1~15mg/mL。由此也可以看出金线莲水提液清除DPPH自由基效果高于醇提液,这也符合金线莲在民间以水煎作为茶饮的食用习惯。并且其水煎液色澄明味清香,受到广大人民的青睐。实验结果为金线莲的资源开发提供一定理论依据。

随着金线莲健康产业的发展,其需求量不断上升。林下种植金线莲可以充分利用林地资源空间,不占用粮食用田,降低单位生产成本。有利于金线莲实现规模化,产业化的发展。该研究发现野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径和手段,同时也有利于其野生资源的保护。实验结果为金线莲林下种植产业的发展提供了一定的依据和基础。

参考文献

[1]王国强. 全国中草药汇编[M]. 3版.北京:人民卫生出版社, 2014: 594.

[2]张春妮,许国平,汪俊军,等. 金线莲体外抑制LDL氧化的实验研究[J]. 医学研究生学报, 2006(02): 117-120.

[3]林丽清,黄丽英,郑艳洁,等. 金线莲多糖的提取及清除氧自由基作用的研究[J]. 福建中医学院学报, 2006, 16(5): 37-39.

[4]邵清松,周爱存,黄瑜秋,等. 不同移栽条件对金线莲组培苗成活率及生长的影响[J]. 中国中药, 2014(6): 955-958.

[5]洪琳,邵清松,周爱存,等. 金线莲产业现状及可持续发展对策[J]. 中国中药, 2016(3): 553-558.

[6]邵清松,叶申怡,周爱存,等. 金线莲种苗繁育及栽培模式研究现状与展望[J]. 中国中药, 2016(2): 160-166.

(收稿日期:2017-01-13编辑:穆丽华)

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