平菇菌株对褐斑病抗性的初步评价

盛春鸽 王延锋 史 磊 潘春磊 王金贺 刘姿彤 张鹏 于海洋 董雪梅

（黑龙江省农业科学院牡丹江分院，黑龙江牡丹江157041）

平菇在我国广泛栽培，产量居于第一位，是我国出口创汇的主要食用菌之一[1，2]。细菌性褐斑病是平菇生产过程中重要病害之一，其发病快，传播广，一旦发病很难控制，造成平菇减产，商品性状下降，菇农经济效益蒙受严重损失。

细菌性褐斑病病原菌为托拉斯假单胞菌（Pseudomoms tolaasii），该病原菌只侵染食用菌子实体的表面组织，形成直径l～4 mm的浅褐色或是深色坏死斑，严重情况下病斑遍及整个子实体表面，其感染深度一般不会超过2～3 mm[3]。轻微发病时幼菇菇体生长缓慢，随着子实体的生长，病斑颜色不断变深并逐渐集结成片，成熟时个别子实体畸形。严重发病会导致子实体发黏萎缩，散发出腐臭气味。在潮湿条件下，子实体感染病原菌所形成的褐色病斑表面会有一薄层菌脓，当斑点干燥后，菌盖会发生开裂。细菌性褐斑病不仅发生在菇场内正在生长的子实体上，采摘后的食用菌子实体在加工、包装、运输和销售等过程中的褐变有时也与细菌性褐斑病有关[4，5]。

表1 供试平菇菌株及来源

研究以25个平菇菌株为供试材料，通过人工接种褐斑病病原菌，观察统计接种后感染情况，对25个菌株的发病情况进行观察，通过病情指数的大小评价菌株的抗病程度，为日后褐斑病的研究和平菇抗性材料的选育奠定一定的基础。

1 材料与方法

1.1 试验菌株供试菌株见表1。除平（新疆-阿勒泰）及美味侧耳2为野生菌株分离保存外，其它菌株皆为常规栽培菌株。

1.2 培养基及培养料配方LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化钠10 g，去离子水定容至1000 mL，121℃灭菌30 min，冷却后用于培养托拉斯假单胞菌；栽培种培养料：木屑78%，麸皮10%，稻糠10%，石膏1%，石灰1%（水适量）。

1.3 试验方法

1.3.1 病原菌菌悬液的制备和接种 将托拉斯假单胞菌划线接种于LB培养基上，25℃恒温培养48 h后，刮取纯培养物溶于无菌水制备悬浮液，将菌悬液稀释到OD450=0.7，病原菌的菌悬液要现配现用。待正常培养条件下的平菇子实体生长至半径1～2 cm时，取制备好的菌悬液1 mL均匀涂抹于子实体表面。每个处理设3次重复，每个重复接种5个子实体。

1.3.2 发病情况观察和病情指数统计 在预设环境中培养24 h后，观察褐斑病发病情况，依据子实体病变程度将病情赋值0～6，0代表无任何病变。用病情指数来表征病变程度：病情指数=Σ（各病级的子实体个数×病级值）/（调查总个数×最高级值）×100，根据公式计算病情指数，病情指数越大代表病变越严重。

2 结果与分析

2.1 病级值分级根据接种后病斑的颜色和形态，将发病情况分为如下6级，见图1。1级感病子实体菌盖上有轻微黄斑，颜色浅淡，难于辨识；2级感病子实体菌盖上病斑颜色浅黄，发病较轻，容易辨识；3级感病子实体菌盖上病斑颜色稍深，呈黄色，个别的侵入较深呈现凹陷的黄色斑点；4级感病子实体菌盖上病斑颜色更深，呈黄色至棕色，有的呈现黄色的凹陷；5级感病子实体菌盖上呈现棕色病斑，有的斑点联结在一起形成棕色暗区，有的则形成深黄色凹陷斑点；6级感病子实体菌盖上病斑呈暗褐色，周围有侵入的更深的不规则坏死斑，有的在感染处形成白色或微黄色绒毛。

图1 各病级值下的平菇子实体

2.2 发病情况统计对22℃时各平菇菌株的发病指数进行统计，结果见表2。总体上看，通常菌盖颜色深的发病相对较重，发病情况和菌肉质地无明显联系。

表2 25个平菇供试菌株的病情指数

有研究表明，病情指数和菌株的抗性水平有一定的联系[6]，病情指数越小的，菌株的抗病能力越强，本研究根据病情指数的大小评价平菇菌株的抗性，结果见表3。高抗菌株有包括灰美二号、俄2014平2、韩CB54等3个菌株，占调查总数的12%；中抗菌株有10株，包括韩CB69、韩CBS06、韩CB101等，占40%；中感菌株7株，包括美味侧耳2、豫平5号、黑平1号等，占28%；易感菌株5株，包括韩CB2、韩CB4、平（新疆-阿勒泰）等，占20%。

表3 依据病情指数划分的菌株类型及数量

3 小结

褐斑病作为平菇的主要病害之一，一直备受关注，然而由于褐斑病发病的不确定性，一直缺少一套行之有效的方法使平菇免受褐斑病的威胁，鉴于此抗病品种的培育可能会成为防治平菇褐斑病最有效率、最有前景的措施之一。要选育出好的抗病品种，首先要做的就是对广泛的平菇资源进行抗性评价与鉴定。研究通过人工接种病原菌的方式观察统计病情指数，从而对平菇菌株的抗病性进行客观评价。为褐斑病的抗性育种提供一定的理论基础。