禽肿瘤病诊断

赵鹏建，朱文浩

（山东省沂南县畜牧兽医局，山东 沂南276300）

禽肿瘤病诊断

赵鹏建，朱文浩

（山东省沂南县畜牧兽医局，山东 沂南276300）

1 实验材料与方法

1.1 病料来源 9只病鸡均为某大型鸡场的19周龄肉种鸡。病鸡精神沉郁、衰弱，渐行性消瘦，鸡冠苍白，腿部有黄豆大小的血管瘤，大部分血管瘤顶部结痂，呈黑色。

剖检可见病鸡肝脏、脾脏、肾脏、睾丸或者卵巢肿大，有的肝脏或者脾脏的体积是正常的2到3倍，其肝实质易碎，被膜下和实质中有大小不等的灰白色结节。

根据病理变化，怀疑鸡患J亚型禽白血病（AL）或禽网状内皮组织增殖病（RE）。

1.2 病料处理 取病鸡肝脏、脾脏、卵巢（睾丸）等组织，用灭菌PBS清洗掉组织外部的血液等杂质，再加入适量的PBS研磨病料。将研磨的组织液反复冻融3次，以8 000 r/min离心后取上清液，用上清液提取病毒DNA。

1.3 PCR检测 根据ALV、ALV-J和REV序列分别设计1对特异性引物。

按照天根DNA提取试剂盒说明提取组织上清液中的DNA，用设计的特异性引物检测组织中是否含有ALV、ALV-J或REV的DNA。

将扩增呈ALV、ALV-J或者REV阳性的PCR产物与pMD-18 Vecter连接，转化大肠杆菌DH5a，挑取阳性菌落进行酶切和PCR鉴定，同时将阳性克隆送测。

1.4 血清学检测 从发病鸡场采病鸡血12份，按照常规方法分离血清，用ALV-J和REV抗体检测试剂盒检测血清中的相应抗体。

2 检测结果

2.1 PCR检测结果 以组织研磨液上清提取的DNA为模版，分别进行ALV、ALV-J和REV的PCR扩增，同时设阴阳性对照。检测结果显示，所检测的4份样品中，3份样品为REV弱阳性，1份样品为REV阳性。禽白血病通用引物检测，4份样品均为阳性，ALV-J亚型引物检测中3份样品呈阳性。

将PCR呈阳性的部分样品转化DH5a大肠杆菌后测序，经过序列对比分析，证实REV引物和ALV-J引物所扩增出的产物确实为网状内皮组织增殖病病毒和禽白血病病毒。

2.2 血清学检测结果 抗体检测结果表明所检测的12份样品中，REV抗体呈阴性，而同鸡场的病料抗原检测为阳性，其提示该鸡场出现的RE可能是REV垂直传播所致。

在所检测的12份样品中，2份样品呈ALV-J抗体阳性，10份样品呈ALV-J抗体阴性。抗原检测发现该场存在ALV-J病毒。根据抗原检测阳性而抗体阴性，初步推断可能存在ALV-J垂直传播情况，其父母代或祖代可能携带ALV-J。

3 结果分析

对REV和ALV-J亚型的混合感染仅从病理变化或肉眼上很难作出判定，对其需借助病原学检测和抗体水平监测加以确认。

减少和消除REV、ALV-J的危害，做好种群的净化工作非常必要。种鸡场的净化可以从以下几个方面着手：淘汰REV和ALV-J阳性鸡群，防止病毒扩散；严格控制活疫苗中REV和ALV-J的污染。如果活疫苗有外源病毒污染，不仅达不到预期免疫效果，外源病毒还会给鸡场带来更大的危害。洁净度高、无外源病毒污染的SPF鸡胚生产出来的活疫苗相对可靠，制备活疫苗时应做好SPF鸡胚的筛选。

S858.36

C

1001-8964（2017）09-0047-02

2017-07-25