瘦肉精胶体金快速检测

黄益鸣

（四川省营山县渌井镇畜牧兽医管理站，四川 营山 637700）

瘦肉精胶体金快速检测

黄益鸣

（四川省营山县渌井镇畜牧兽医管理站，四川 营山 637700）

瘦肉精是指在饲料和畜牧生产中，国家禁止使用的β-肾上腺素受体激动剂类化合物，其包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等十几种物质。

瘦肉精属于非蛋白质激素，使用后会在猪体中形成残留，尤其是在猪的肝脏等内脏器官形成高残留，并进而危害人体健康。

瘦肉精主要导致人出现肌肉震颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，其对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大患者危害更大，严重时可致人死亡。

1 瘦肉精检测样本

1.1 采集人员 样品由不少于2人的检测单位人员采集。采集样品后，采集人员应填写采样单。

1.2 采集比例 饲喂不同品牌、批次饲料的猪（牛、羊）2～3头；运输的猪（牛、羊）每批次（同一车、船运输的）50头以上的不少于3%的抽样，50头以下的抽样1～2头；屠宰场同一批猪（牛、羊）50头以下的，至少抽检1头，50头以上的，不少于3%的抽样。猪（牛、羊）来自多个养殖场（户）的，抽样样品应涵盖每个场（户），每个场（户）抽检数量不少于1头。

1.3 样品液制备

1.3.1 尿样 用干燥、洁净的离心管或适当容器采集50mL左右被检畜尿液作样品。如不立即进行检测，尿样在2～8℃条件下可保存24h，保存样品时要避免其失效和受污染。

1.3.2 组织样本 组织样本（包括被检畜的瘦肉、肝脏、肺脏和肾脏）应立即检测或收集在塑料袋中及时送检。若不能及时检测，样本在2～8℃条件下可保存24 h，-20℃冷冻条件下可保存一周，冷冻时忌反复冻融。

检测前，组织样本应剪碎，并称取1g装入离心管中，加1mL提取液后盖紧管盖，放入沸水中加热10～15min，然后取出离心管静置至室温，再移出上清液作样品液备用。

1.3.3 饲料样本 研碎饲料，称取1g放入5mL离心管，然后加入2mL去离子水充分混匀，5min后，用滤纸过滤液体（如上清液仍然浑浊，则用5000～10000r/min离心5min），再移出上清液作样品液备用。

1.4 样品分装保存 现场检测为阴性的，样品不需留样。需要进行确证的检测样品或风险检测样品，应分装、封存后送检和保存，分装样品分作三份，按检测用样、检测单位留样、被抽检单位留样进行标记，并粘贴加盖检测单位印鉴的封条，所有样品的编号应当与被检畜的耳标号对应。样品运输、保存应在低温条件下进行，长期保存的应在-20℃以下冻存。

2 检测项目

检测被检畜尿样、组织和饲料中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇残留。

3 检测卡质量要求

瘦肉精胶体金检测卡的灵敏度、稳定性、交叉反应等参数应符合相关要求；假阳性率应不高于5%，假阴性率为零；盐酸克伦特罗和莱克多巴胺检测限应不高于3μg/L，沙丁胺醇检测限应不高于5μg/L。

4 检测原理

瘦肉精胶体金检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，检测时样本中的瘦肉精在流动的过程中与胶体金（或胶体硒）标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精-蛋白偶联物的结合。如果样本渗出液中瘦肉精含量大于3ng/mL，检测线不显色，则结果为阳性，若检测线显红色，则结果为阴性。

5 操作步骤

5.1 待检样品液恢复至室温。

5.2 将检测卡平放，用滴管吸取待检样品液2～3滴垂直加于加样孔后，开始计时。

5.3 3～5min后根据示意图判定检测结果，30min之后结果判定无效。

6 结果判定

6.1 阴性（-） 两条紫红色带出现表示样品中盐酸克伦特罗低于3 ng/mL、莱克多巴胺低于3ng/mL、沙丁胺醇低于5ng/mL，或不含有。

6.2 阳性 （+） 检测T线无显色表示样品中盐酸克伦特罗高于3 ng/mL、莱克多巴胺高于3ng/mL、沙丁胺醇高于5ng/mL。

6.3 无效 未出现质控线C线，表明操作不正确或检测卡已失效。

7 检测注意事项

检测卡应在打开1h内使用；检测时避免阳光直射和空调直吹；如果尿样和组织提取样本出现沉淀或浑浊物，应离心后再检测；不洁尿样（如含有漂白剂、明矾等）可能导致产生错误结果，其应离心后再检测。

自来水、蒸馏水或去离子水不能作阴性对照；金标卡储存于阴凉的干燥处，切勿冷冻，其有效期为18个月。

8 处理

8.1 检测阴性 检测结果为阴性的，所检测的猪（牛、羊）、猪（牛、羊）产品、饲料中不含瘦肉精，可按要求饲养、运输、屠宰或销售。

8.2 检测阳性 检测结果为阳性或疑似阳性的，应立即进行二次快速检测，如二次快速检测结果为阳性，应立即禁止同批猪（牛、羊）、同批猪（牛、羊）产品、饲料移动或对其进行封存，同时应向当地畜牧兽医主管部门报告，并及时采样进行确证检测。

如二次快速检测结果为阴性的，需进行第三次快速检测，若检测结果为阴性，应按阴性结果处理，检测结果为阳性的，按阳性结果处理。

8.3 确证阴性 确证检测结果为阴性的，检测机构应出具确证检测报告，并及时告知送样单位。

8.4 确证阳性 确证检测结果为阳性的，送样单位在收到确证检测结果24h内，应书面向当地畜牧兽医主管部门报告，同时告知被抽样单位。当地畜牧兽医主管部门应根据报告及时查处违法单位，并通报公安机关。

9 快速检测方法比较

瘦肉精胶体金检测卡用于定性被检畜尿液（如猪尿、牛尿、羊尿等）中的盐酸克伦特罗残留，整个检测只需要5～10 min左右，其灵敏度为3 ng/mL。采用该检测卡进行检测快速方便，适用于屠宰场、农贸市场、超市等现场快速检测。

采用瘦肉精ELISA试剂盒可检测被检畜尿、肌肉、肝脏及饲料中的盐酸克伦特罗。该试剂盒可同时用于处理96个样品，操作时间少于45min，灵敏度为 0.025～0.1 ng/mL，其相对于胶体金检测卡检测结果更准确，适用于实验室快速检测。

S816.17

C

1001-8964（2017）09-0037-02

2017-07-25