盐源县养猪场猪圆环病毒感染情况调查与分析

周厚继，郑敏，吴良涛，万润，华敏，汪德生*

(1. 四川省盐源县职业技术中学校，四川盐源 615700；2. 贵州大学动物疫病研究所，贵阳 550025 )



盐源县养猪场猪圆环病毒感染情况调查与分析

周厚继1，郑敏2，吴良涛2，万润2，华敏2，汪德生2*

(1. 四川省盐源县职业技术中学校，四川盐源 615700；2. 贵州大学动物疫病研究所，贵阳 550025 )

为了解盐源县养猪场猪圆环病毒病感染情况，本实验采集养猪场猪血清样本1980头份和疑似病例组织样本135头份，分别采用ELISA和PCR方法进行猪圆环病毒2型抗体和核酸检测，结果显示：在种猪场、商品猪场和农户猪场中，猪圆环病毒2型抗体的阳性率分别为37.50%(15/40)、32.84%(582/1772)和29.76%(50/168)，平均为32.68% (647/1980)；在种公猪、经产母猪、育成猪和哺乳仔猪中，猪圆环病毒2型抗体的阳性率分别为37.50%(3/8)、57.03%(73/128)、29.48%(342/1160)和33.47%(229/684)；在种猪场、商品猪场和农户猪场疑似病例中，猪圆环病毒核酸检出率分别为86.36%(19/22)、77.45%(79/102)和72.73%(8/11)。结果表明，盐源县养猪场已普遍存在猪圆环病毒感染，应加强该病的预防与控制。

盐源县；猪圆环病毒病；ELISA；PCR；调查

猪圆环病毒病(porcine circovirus diseases, PCVDs)是指由猪圆环病毒2型(PCV-2)感染引起的一类综合症候群，主要以进行性消瘦和多系统病理损伤为特征，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合症(PDNS)、猪繁殖障碍(PRF)、猪呼吸道综合症(PRDC)、猪增生性坏死性肺炎(PNP)、猪坏死性淋巴结炎(PNL)、仔猪肉芽肿性肠炎(PGE)和新生仔猪先天性震颤(PCT)等，是危害养猪业健康发展的重要疫病之一[1-2]。

猪圆环病毒感染后能导致猪衰竭死亡，但更重要的是感染猪发生严重的免疫抑制，引发其他病毒(如猪蓝耳病病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒等)或病原细菌(如大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌等)的继发感染[3-5]。由于健康猪群感染猪圆环病毒后常不表现任何临床症状，易被养猪场所忽视。研究资料显示，我国大部分养猪场临床健康猪群均可检测到PCV-2血清抗体阳性，说明我国养猪场普遍存在猪圆环病毒感染[6-8]。但我县养猪场猪圆环病毒感染情况尚未清楚。因此，笔者等于2016年3月至11月采集养猪场猪血清样本和疑似病例组织样本，采用ELISA和PCR方法开展了规模养猪场猪圆环病毒感染情况调查，以期为盐源县养猪场猪圆环病毒病的防控提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 猪血清样本及组织病料 猪血清样本计1980份，采自盐源县29个养猪场的未免疫猪圆环病毒病疫苗猪群，-20 ℃冰箱保存备用；猪组织病料(包括淋巴结、脾脏、肺脏等)计135头份，采集盐源县18个养猪场疑似猪圆环病毒感染的发病猪，-20 ℃保存备用。

1.2 主要检测试剂及实验仪器 猪圆环病毒2型抗体ELISA 检测试剂盒，购自武汉科前生物工程有限公司；DNA/ RNA提取试剂盒，购自宝生物(大连)工程有限公司；猪圆环病毒PCR 检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；其他试剂均为分析纯。酶标仪，为美国Bio-Rad公司产品；PCR仪，为美国ABI公司产品。

1.3 猪圆环病毒血清抗体检测 猪圆环病毒2型血清抗体检测，根据武汉科前生物工程有限公司生产的猪圆环病毒2型抗体ELISA 检测试剂盒说明书进行。

1.4 猪圆环病毒特异基因检测 取保存的组织病料样本，经研磨后反复冻融3次，离心收集上清，采用DNA/RNA提取试剂盒提取病毒DNA，以猪圆环病毒PCR 检测试剂盒扩增猪圆环病毒2型特异性核酸片段，经10 g/L琼脂糖凝胶电泳后，于凝胶成像系统观察并记录结果。

1.5 检测数据统计分析 采用SPSS 19.0软件对所测数据进行统计分析。

2 结 果

2.1 不同类型养猪场猪圆环病毒2型抗体检测结果

采用ELISA检测试剂盒对采集自不同类型养猪场1980份猪血清样本进行猪圆环病毒2型抗体检测，结果如表1所示。

表1 不同类型养猪场猪圆环病毒2型抗体检测结果Tab 1 Detection of porcine circovirus Type 2 antibody in pig farms of different types

不同类型养猪场均可检出猪圆环病毒2型抗体，抗体阳性率为32.68%(647/1980)，其中种猪场、商品猪场和农户猪场的抗体阳性率分别为37.50%(15/40)、32.84%(582/1772)和29.76%(50/168)。由此可见，种猪场猪圆环病毒2型抗体阳性率最高，应加强种猪场猪圆环病毒病预防控制，从源头上消除该病感染。

2.2 不同生长阶段猪圆环病毒2型抗体检测结果

采用ELISA检测试剂盒对采集自不同生长阶段猪群1980份血清样本进行猪圆环病毒2型抗体检测，结果如表2所示。

表2 不同生长阶段猪群猪圆环病毒2型抗体检测结果Tab 2 Detection of porcine circovirus Type 2 antibodies at different growth stage pigs

不同生长阶段猪群均可检出猪圆环病毒2型抗体，抗体阳性率为32.68%(647/1980)，其中种公猪、经产母猪、育成猪和哺乳仔猪的抗体阳性率分别为37.50%(3/8)、57.03%(73/128)、29.48%(342/1160)和33.47%(229/684)。由此可见，在不同生长阶段猪群中经产母猪的猪圆环病毒2型抗体阳性率最高，因此应加强经产母猪猪圆环病毒病的预防控制，以减少猪圆环病毒的垂直传播与水平传播。

2.3 养猪场猪圆环病毒2型核酸检测结果 采用PCR检测试剂盒对采集自不同类型养猪场135头份疑似病例组织样本进行猪圆环病毒2型核酸检测，结果如表3所示。

表3 养猪场猪群猪圆环病毒2型核酸检测结果Tab 3 Detection of porcine circovirus Type 2 nucleic acid in pig farms

不同类型养猪场疑似病例均可检出猪圆环病毒2型核酸，检出率为78.52%(106/135)，其中种猪场、商品猪场和农户猪场的检出率分别为86.36%(19/22)、77.45%(79/102)和72.73%(8/11)。由此可见，盐源县养猪场中已普遍存在猪圆环病毒病感染，应得到足够的重视。

3 讨论与结论

猪圆环病毒病是目前危害养猪场健康发展的重要疫病之一，其中猪圆环病毒2型在世界范围内广泛分布并且在猪群中存在至少有50多年[9]，但由于猪圆环病毒病单独感染导致猪只大批死亡现象较为少见，且感染后表现明显临床症状的不到20%，因此很多养猪场对猪圆环病毒病不够重视。本次调查发现，盐源县养猪场未免疫猪群中猪圆环病毒血清抗体的阳性率为32.68%(647/1980)，且不同类型养猪场不同生长阶段猪群均存在不同程度的血清抗体阳性率；在受检猪场的疑似病例组织样本中，猪圆环病毒核酸检出率为78.52%(106/135)。这些结果说明，盐源县养猪场已普遍存在猪圆环病毒感染，应当引起养猪场的高度重视。

针对猪圆环病毒病广泛的流行势态和严重的危害状况，世界各个国家都开展了PCV-2疫苗的研制工作，如德国勃林英格公司PCV-2亚单位疫苗、荷兰英特威公司PCV-2灭活疫苗、美国富道公司Suvaxvn PCV-1/PCV-2重组灭活疫苗、法国梅里亚公司CIRCOVAC®PCV-2灭活疫苗以及我国洛阳普莱柯生物工程有限公司的猪圆环病毒疫苗、上海海利生物药品有限公司的海利圆环病毒疫苗(圆毕净)和哈尔滨兽医研究所的PCV-2灭活疫苗等[10-12]。通过临床应用表明，疫苗免疫后能使猪群死亡率降低6%～7%，同时能使仔猪在5周龄内有效地抵御PCV-2的感染。但仅靠疫苗接种是不能控制猪圆环病毒病的发生与流行，必须采取有效的综合防控措施，包括：(1) 制定科学免疫程序，提高猪群抗病能力。疫苗接种是控制猪圆环病毒病的有效方法，建议的免疫程序是：仔猪在5周龄和7周龄各免疫一次(若是母猪未免，则提前至2周龄和4周龄)；后备母猪和青年公猪配种前免疫2次，间隔2周后再免疫1次；怀孕母猪在怀孕第10周和12周各免疫1次；经产母猪和公猪间隔2周各免疫1次[13]。(2) 加强猪群饲养管理，减少应激因素刺激。改善饲养环境，减少应激因素，包括：严格引种检疫，实行全进全出制度；科学饲养密度，严禁不同大小/批次猪只混养；注意保温和通风，禁止饲喂霉变饲料；定期灭鼠与杀蚊，无害化处理污物；保持圈舍清洁卫生，全面落实消毒制度；保证仔猪及时吸吮初乳，提高仔猪抗病力等。(3) 定期开展疫情监测，及时淘汰患病猪只。严格疫病监测制度是保障养猪场健康发展的有力措施，一般要求：每季度开展1次猪圆环病毒2型血清抗体检测，每半年进行1次猪圆环病毒2型病原检查，特别是公猪精液病原检查；及时挑出弱猪、病猪，及时隔离与消毒，淘汰隐性感染的公猪和母猪。(4) 采取合理药物预防，控制猪群继发感染。猪圆环病毒病是一种免疫抑制性疾病，在平时的饲养管理中可以选用既有免疫增强和免疫调节功能、又有抗病毒/抗细菌/抗应激作用的细胞因子制剂和中草药制剂及某些化学物质，以提高猪群免疫抵抗力，防止猪蓝耳病病毒、猪链球菌、猪副嗜血杆菌、猪肺炎支原体等病原的继发感染。

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(编辑：李文平)

Investigation and Analysis of Porcine Circovirus Infection in Pig Farms of Yanyuan County

ZHOU Hou-ji1, ZHENG Min2, WU Liang-tao2, WAN Run2, HUA Min2, WANG De-sheng2*

(1. Vocational Technical Middle School of Yanyuan County, Sichuan Yanyuan, 615700, China;2. Institute of Animal Diseases, Guizhou University, Guiyang, 550025, China)

WANG De-sheng, E-mail:zjqzsb110513@163.com

To understand the infection situation of porcine circovirus disease in Yanyuan pig farms, 1980 samples of serum and 135 samples of suspected cases were collected and detected by ELISA and PCR respectively. The results showed that the positive rate of Porcine circovirus type 2 antibody were respectively 37.50% (15/40), 32.84% (582/1772) and 29.76% (50/168) in breeding, commercial and scattered farms, with an average of 32.68% (647/1980). The positive rates of antibody were respectively 37.50% (3/8), 57.03% (73/128), 29.48% (342/1160) and 33.47% (229/684) in the boars, the multiparous sows, the breeding pigs and the suckling piglets. Among the swine breeding farms, commercial farms and scattered farms, the detection rates of porcine circovirus in suspected cases were respectively 86.36% (19/22), 77.45% (79/102) and 72.73% (8/11). These results suggested that the porcine circovirus infection have been prevalent in pig farms of Yanyuan County, should strengthen for prevention and control of this disease.

Yanyuan courty; porcine circovirus disease; ELISA; PCR; investigation

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.5.03

周厚继，学士，中教高级教师，从事畜牧兽医方面教学与科研工作。

汪德生。E-mail：zjqzsb110513@163.com

2017-01-13

A

1002-1280 (2017) 05-0012-04

S852.65