气相色谱-质谱联用法测定婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量

文/尚东洋 高 杨

（黑龙江省龙丹乳业科技股份有限公司）

气相色谱-质谱联用法测定婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量

文/尚东洋 高 杨

（黑龙江省龙丹乳业科技股份有限公司）

婴幼儿配方乳粉试样经石油醚、乙醚提取脂肪后，再用正己烷溶解，经毛细管色谱柱分离，质谱检测器检测，外标法定量测定1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量。结果显示：回收率在86.0%～94.7%，相对标准偏差在2.89%～3.20%，表明分析结果可靠。

气相色谱-质谱联用法；1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯；婴幼儿配方乳粉

母乳喂养可以为婴儿健康生长发育提供最理想食品，无论在营养学、免疫学还是心理学等方面，母乳喂养对于婴儿的益处是婴幼儿配方乳粉喂养无可比拟的。任何婴幼儿配方乳粉都不能与母乳相媲美，只能作为母乳喂养失败后的无奈选择，或母乳不足时对母乳的补充。因此，所有的婴幼儿配方乳粉所追求的终极目标就是使产品无限接近母乳。

作为母乳替代品的婴幼儿配方乳粉，其脂肪结构应尽量接近母乳。1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯作为一种新资源食品，是由脂肪酶催化酯交换反应，使脂肪酸在甘油分子上的位置重新排列而得，其与母乳脂肪结构相似。许多研究证明，婴幼儿配方乳粉中添加1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯可使其在微观上更接近母乳脂肪成分，能够提高脂肪酸的吸收利用率，促进婴儿对脂肪、矿物质的吸收，促进婴儿骨骼矿物质的沉积，预防便秘。

2008年5月26日，中华人民共和国卫生部发布公告（2008年第13号），批准了1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯作为营养强化剂在婴儿配方食品、较大婴儿和幼儿配方食品中使用，并于2010年1月4日中华人民共和国卫生部发布的第1号公告中明确了1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的使用范围及使用量。1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯作为母乳脂肪的替代品之一，正在被广泛地添加在婴幼儿配方乳粉中。因此准确测定婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量具有重要意义。目前国家尚未出台标准的检测方法，文献上的检测方法主要有：薄层色谱分离与气相色谱法、反相高效液相色谱法、气相色谱法、蒸发光散射高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、银离子交换柱分离与液相色谱法、胰脂肪酶与液相色谱法等。本文论述了采用气相色谱-质谱联用法测定婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法，该方法精密度高，重现性好，适用于婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的测定。

1 材料和方法

1.1 试剂和材料

乙醇：分析纯，体积分数为9 5%；氨水：分析纯，25%～28%；正己烷：色谱纯；石油醚：分析纯；乙醚：分析纯。

1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准贮备液，浓度为10 mg/ mL：精确称取0.5000 g 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准品于50 mL容量瓶中，用正己烷溶解定容。

1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准中间液，浓度为1 mg/ mL：取标准贮备液1 mL，用正己烷定容至10 mL。

分析用水应符合GB/T 6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》中规定的三级水。

1.2 仪器和设备

毛氏抽脂瓶；毛氏离心机；毛氏水浴锅；毛氏振荡器；分析天平：奥豪斯，CAV214C；涡旋振荡器：其林贝尔，XW-80A；超声波清洗机：昆山，KQ-700DE；旋转蒸发仪：上海沪西，RE52-3；气相色谱-质谱联用仪：日本岛津，GCMS-QP2010E。

1.3 试验方法

试样处理：称取混合均匀的婴幼儿配方乳粉固体试样约1.5 g（精确到0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10 mL 45 ℃的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全散开，之后冷却。

脂肪的提取：①第一次提取：向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL氨水，混匀。置于60 ℃水浴中15～20 min，冷却至室温。加入10 mL乙醇和1 滴刚果红溶液，混匀。再加入25 mL乙醚，塞上软木塞，放到毛氏抽脂瓶摇混器上震荡1 min。再加入25 mL石油醚，震荡1 min，4 000 r/min离心分层。倾出上清液于脂肪收集瓶中。②第二次提取：在剩余试样液中再加入5 mL乙醇，25 mL乙醚，25 mL石油醚，按上述操作步骤进行第二次提取。离心分层后倾出上清液与第一次的上清液合并。将脂肪收集瓶置于旋转蒸发器上，在60 ℃通入氮气条件下旋转蒸发除去溶剂，保留残渣，即为脂肪，用10 mL正己烷溶解备用。

1.4 色谱条件

毛细管色谱柱：HP-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm，弹性石英毛细管柱；

载气：高纯氦气，流量1 mL/ min；

分流比：1∶50；

进样量：1 μL；

溶剂延迟：3 min；

进样口温度：365 ℃；

接口温度320 ℃，柱温300 ℃，保持3 min，以2 ℃/min速率升至350 ℃，保持12 min；

质谱条件：离子源为EI源，电子能量70 eV，离子源温度250℃，四极杆温度200 ℃，扫描范围30～800 amu，电子倍增器电压1.5 kV。

2 结果与分析

2.1 测定方法

将标准中间液进行系列稀释，制成标准系列工作液，浓度分别为0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mg/mL。将标准系列工作液与试液分别注入色谱仪，按上述的仪器条件进行测定，得到相应的总离子流图，采用外标法定量。以标准系列工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。用标准工作曲线计算未知样品的浓度，进行结果计算。线性方程为：Y=650752X+528.7，相关系数为0.9994（图1）。

表1 平均回收率和相对标准偏差（n=6）

表2 准确度（n=2）

图1 标准曲线

2.2 样品加标回收率与精密度

在待测样品中添加3 个不同水平的1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准工作液，每个水平做6 个平行样，计算回收率和相对标准偏差。按照1.3的样品处理方法进行处理。结果见表1。其回收率在86.0%～94.7%，相对标准偏差在2.89%～3.20%，表明分析结果可靠。

2.3 准确度

重复性条件下两次独立测定结果，准确度为1.73%。如表2。

2.3 试验过程注意事项

2.3.1 实验试剂乙醚、石油醚等用于空白试验，以检验试剂的纯度。

2.3.2 保证气质联用仪的气密性，避免漏气造成抽真空不正常。最常见的漏气部位可能是进样垫，需要判断固定进样垫的螺母、玻璃衬管的O型圈及进样口螺母、毛细柱两端的螺母、真空腔体门是否拧紧。

2.3.3 气质联用仪每次重新开机时，色谱柱均需要更换，进样垫更换后均需要重新做调谐。

2.3.4 每次试验结束后，需将气质联用仪的进样针取下，用适宜的溶剂进行清洗。

3 结论

本测定方法样品前处理简单，干扰因素少，适用于婴幼儿配方乳粉及同类产品中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的测定。

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[2] 赵晨，王敏，刘宁，等. 1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的合成研究[J]. 中国乳品工业，2014，42（5）：13-16.

[3] 马小宁，田燕，宋小莉，等. 气相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯[J]. 检验检疫学刊，2013，23（6）：32-38.

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[6] 邹建凯. 椰子油甘油三酯的高温气相色谱质谱分析. 分析化学研究简报，2002，30（4）：428-431.

尚东洋（1985-），女，助理工程师，从事乳品质量管理工作。

2017-03-23）