红细胞参数、血红蛋白电泳及地贫基因分析在地中海贫血中的应用分析

张 丹，刘公洪

（1.西南医科大学附属中医医院检验科，四川 泸州 646000；2.泸州市人民医院脑外科，四川 泸州 646000）

红细胞参数、血红蛋白电泳及地贫基因分析在地中海贫血中的应用分析

张 丹1，刘公洪2

（1.西南医科大学附属中医医院检验科，四川 泸州 646000；2.泸州市人民医院脑外科，四川 泸州 646000）

目的 探究红细胞（red blood cell，RBC）参数、血红蛋白（hemoglobin，Hb）电泳与CD41-42β地贫基因的携带情况在产前筛查地中海贫血中的应用价值。方法 择取我院2013年1月～2014年10月收治的地中海贫血患者50例（研究组），另选取正常人群50例（常规组），分别对两组人群进行红细胞参数实验、血红蛋白电泳实验，分析检测人群地中海贫血的特异度、灵敏度等指标。结果 研究组的阳性检出率明显高于常规组（P＜0.05）；平行检测的阳性率明显高于联合检测的阳性率（P＜0.05）；平行检验的灵敏度、准确度、阴性预报值要高于联合检验方法；红细胞参数检验的灵敏度、特异性、准确度、阳性与阴性预报值均低于HB检验结果；且所有检测人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例为CD41-42杂合子，1例为CD41-42复合α地贫基因。结论 对地中海贫血行产前筛查时应用红细胞参数实验与血红蛋白电泳实验的诊断价值较高，两者联合检测的应用效果更佳。

血红蛋白电泳；红细胞参数；地中海贫血；地贫基因

地中海贫血是一种遗传疾病，主要发病地区为长江以南，严重时可出现溶血性贫血，严重影响了人们的身体健康。目前，临床上主要采用一系列的生物学技术进行疾病诊断，如：聚合酶链反应[1]等，但是该类检测方法的操作步骤较为复杂，检验条件的要求较高，对一些新增的基因变异情况无法准确预估，所需检测费用较高，局限性较大，不适于临床上普遍采纳[2]。为此，本文采用红细胞参数实验与血红蛋白电泳对地中海贫血患者进行产前筛查，旨在探究其应用价值，为临床检测提供相关的参考依据，现将资料分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

择取我院2013年1月～2014年10月收治的地中海贫血患者50例（研究组），该50例病例均经临床诊断后确诊为地中海贫血，另选取正常人群50例（常规组），分别行红细胞参数与血红蛋白电泳试验。

1.2 试验方法

1.2.1 选用仪器

包括血红蛋白电泳仪、微量振荡器、台式自动平衡离心机、冰箱（零下20℃）、扫描仪、恒温箱、超纯水处理机。

1.2.2 红细胞参数检测

选用一管法对红细胞参数进行临床检测，选用试剂盒为米基公司所生产的试剂盒。

（1）A液：将总容量为3.5 mL的氯化钠溶液、磷酸氢二钠溶液、磷酸二氢钠溶液兑入至100 mL的蒸馏水溶内；B液：给予5.0 mL的氯化钠溶液兑入至蒸馏水溶内，使得溶液总量为100 mL；C液：给予1.0 mL的皂素兑入至蒸馏水溶内，使得溶液总量为60 mL。

（2）操作步骤：给予1 mL的A液于37℃的水浴内，先持续预热2 min，后将10μl的抗凝全血兑入，同样置于上述温度的水浴内预热5 min；给予1 mL的B液兑入上述溶剂中，离心5 min，速率为3000 r/min；后将上述溶液置于比色杯内，读取光密度D1；给予0.5 mL的C液。待到全部溶血后将比色杯内的溶液兑入至试管内，摇匀后再将溶液倒入比色杯内，以530 nm为参照值进行波长比色，读取D2光密度值，其中溶血率为D1/（D2×1.25）×100%[3]。

1.2.3 血红蛋白电泳检验

将柠檬酸钠、酸-枸椽酸盐-葡萄糖溶液[4]与乙二胺四乙酸抗凝血标本进行离心，将红细胞100 μl兑入至生理盐水（5 mL）中，混匀，离心5 min后将上清液吸净；取水和四氯化碳，分别为350 μl和300 μl，保持每分钟300 0r的速率持续离心5 min，得到血红蛋白液；将17 μl的标本置于标本盘内；取点样刀锋于自动加样器内，加入界面液；置入电泳片，并将多余液体擦净，将电泳片的保护膜揭去；将电泳片的缓冲液吸去；开始进行电泳操作，结束后将盖子打开，铲掉盐桥，移去碳棒；将取出的电泳片置于染色架槽中进行染色、脱色、烘干等操作，结束后将电泳片取出并扫描。

1.2.4 地贫基因分析

取3 mL静脉血，并给予全血DNA提取试剂对DNA组进行提取，扩增PCR，并选用PCR-膜反向点杂交技术对检测人群中的基因组DNA中β珠蛋白基因突变的常见位点与少见位点进行检测，之后再给予跨断裂位点PCR检测方法对较为普遍的3种缺失型α地贫基因进行检测。

1.3 观察指标

判断红细胞参数试验与血红蛋白电泳试验后的灵敏度与特异度。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0的统计软件对数据进行统计处理。

2 结 果

2.1 分析两组试验的检测结果

研究组的阳性检出率明显高于常规组，比较差异显著（P＜0.05），且血红蛋白电泳的阳性检出率较高于红细胞参数实验的阳性检出率。见表1。

表1 红细胞参数与血红蛋白电泳实验结果分析（%）

2.2 比较红细胞参数检验与HB电泳检验的灵敏度、特异度、准确度等

红细胞参数检验的灵敏度、特异性、准确度、阳性与阴性预报值均低于HB检验结果。见表2。

表2 分析两组试验的检验结果（%）

2.3 联合检验的结果分析

平行检验的灵敏度、准确度、阴性预报值要高于联合检验方法。见表3。

表3 平行检验与联合检验的结果分析（%）

2.4 两种检验方法联合检测结果分析

研究组：平行检测的阳性率明显高于联合检测的阳性率（P＜0.05）。见表4。

表4 两种检测方式的检测结果分析（%）

2.5 地贫基因分布情况分析

50例检测人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例为CD41-42杂合子，1例为CD41-42复合α地贫基因，1例为CD41-42复合β地贫基因，且儿童与成人之间上述地贫基因的携带率无明显差异（P＞0.05）。

2.6 血细胞分析

比较不同地贫基因型组合的红细胞参数特点。见表5。

表5 CD41-42不同地贫基因型组合的红细胞参数特点分析（±s）

表5 CD41-42不同地贫基因型组合的红细胞参数特点分析（±s）

注：与CD41-42杂合子组比较，*P＜0.05；与CD41-42复合α地贫组比较，#P＜0.05

指标CD41-42杂合子CD41-42复合α地贫CD41-42复合β地贫RBC（×109/L）5.51±1.535.24±1.333.02±1.52*#Hb（g/L）110.81±30.16116.89±32.4671.43±32.16*#Hct（%）0.36±0.110.36±0.110.23±0.10*#MCV（fL）63.42±10.46#69.97±20.01*74.62±13.58* MCH（pg）20.06±2.62#22.51±7.22*23.76±5.42*

3 讨 论

地贫指的是由于遗传基因的某项缺陷导致人体内的血红蛋白合成缺乏或不足，并逐步演变为贫血。目前，临床上主要采用红细胞参数实验与血红蛋白电泳实验进行疾病筛查，且应用价值重大。

本次研究表明，对地中海贫血患者进行红细胞参数检验的灵敏度、特异度均低于血红蛋白电泳试验，这与赵颖[5]的研究结果一致。

对地中海贫血患者进行红细胞参数检验时，所用到的仪器设备较简单，无需进行繁杂的实验操作，但是对实验结果产生影响的相关因素较多，例如：操作人员对实验是否熟练等。相比红细胞参数检验而言，行血红蛋白电泳检验时所需的器械设备较复杂，操作步骤较多，实验时间较长，但是可以较为准确的对血红蛋白含量进行分类，与红细胞参数检验相比，该项检验方式的应用价值更高，但是试验结果也会受到实验操作人员的影响。

本次研究结果显示，研究组的阳性检出率明显高于常规组（P＜0.05）；平行检测的阳性率明显高于联合检测的阳性率（P＜0.05）；平行检验的灵敏度、准确度、阴性预报值要高于联合检验方法；红细胞参数检验的灵敏度、特异性、准确度、阳性与阴性预报值均低于HB检验结果；且所有检测人群中，CD41-42基因型有6例，包括4例为CD41-42杂合子，1例为CD41-42复合α地贫基因。

红细胞参数检验与血红蛋白电泳检验各有优缺点，若将其联合用于地中海贫血患者的筛查将明显提高灵敏度与特异性，从而有效减少实验操作中的误区，以免出现误检、漏检现象，对于基层医院的应用价值较高。

[1] 张立军,刘艾芹,钟利若,等.孕16～28周胎儿脐血β-地中海贫血基因及其血红蛋白电泳、红细胞参数变异分析[J].中国当代医药,2011,18(16):86-88.

[2] 姚莉琴,浦 剑,邹团标,等.红细胞参数在儿童地中海贫血筛查中的价值探讨[J].检验医学与临床,2010,07(15):1572-1574.

[3] 董孝平,魏炳华,向 明,等.血细胞分析对妊娠合并地中海贫血筛查的价值[J].临床和实验医学杂志,2011,10(8):617-618.

[4] 庞丹凤,罗元标,杨 希,等.Sebia毛细管电泳仪系统结合MCV、MCH对506例产前孕妇地中海贫血的检测分析[J].中外健康文摘,2012,09(8):115-116.

[5] 赵 颖,商 璇,熊 符,等.异常血红蛋白(Hb J-Bangkok)合并β-地中海贫血的临床表型分析[J].中华医学遗传学杂志,2013,30(2):148-151.

本文编辑：吴玲丽

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ISSN.2095-8242.2017.018.3493.02