苏禽黄鸡IGF1R基因第16外显子多态性及其与生长性状的关联研究

陈则东　王文浩

摘要 本研究以IGF1R基因作为影响苏禽黄鸡生长性状的候选基因，基因第16外显子单核苷酸多态性采用DNA测序和PCR-SSCP技术进行分析，并与鸡的生产性能进行关联分析。结果表明，共发现2个SNPs位点（C143082G和A143135G），在初生重方面，CC基因型个体的体重显著高于AA、AB、AC、BB和BC基因型个体的体重（P<0.05）。推测IGF1R基因可能是影响鸡体重的主（效）基因或与影响体重主（效）基因紧密连锁。

关键词 苏禽黄鸡；IGF1R基因；16外显子；生产性状；关联

中图分类号 S831 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0224-02

Abstract In this study，IGF1R gene as candidate gene of Suqin yellow chicken growth traits，using DNA sequencing and PCR-SSCP technology to analyze the correlation between IGF1R gene 16 exon SNPs and chicken production performance.The results showed that 2 SNPs loci（C143082G and A143135G）were found，the birth weight of CC genotype individuals were significantly higher than those in AA，AB，AC，BB and BC genotypes（P<0.05）.It was suggested that IGF1R gene might be the main（effect）gene of chicken weight，or it was closely linked to the main（effect）gene.

Key words suqin yellow chicken； IGF1R gene；exon 16；production performance；correlation

類胰岛素生长因子（insulin-like growth factors，IGFs）包含2类受体（IGF1R、IGF2R）、2个多肽类生长因子（IGF1、IGF2）和7种结合蛋白（IGFBP1-7）[1-5]，是重要的生长因子之一。IGF1R对机体胚胎期和出生后生长有着十分重要的生长调节作用，主要表现为免疫调节、淋巴细胞生成、肌肉和骨的生长[6]。鸡IGF1R基因位于10号染色体由单个基因编码，21个外显子构成，mRNA全长4 698 bp，编码1363氨基酸残基[1，7]。现研究已表明IGF1R基因对鸡生长性状有显著效应[8-9]。本研究以苏禽黄鸡为研究对象，以鸡IGF1R基因作为影响生长性状的候选基因[1，10]，通过DNA测序和PCR-SSCP方法的应用分析该基因多态性与生长性状之间的关系。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验母鸡品种为苏禽黄鸡，采自翔龙禽业有限公司，共150只，采集母鸡血样，待用。同时记录150只母鸡的0、4、8、12、16周龄体重。翅静脉采集血样1.5 mL，肝素钠抗凝，-20℃保存[1-2]。常规苯酚-氯仿法抽提基因组DNA。

1.2 引物设计及PCR扩增

根据GenBank中鸡的IGF1R基因序列（NC_006097）设计第16外显子的引物P16（F：TGACATGTTCTCCCTCTGCTT，R：GCCGTATCAGTCCACCTCAT），引物由上海生物工程有限公司合成。

1.3 PCR扩增

IGF1R基因引物最佳PCR扩增体系如下：DNA 1.5 μL，10×Buffer 3.0 μL，25mmol/L Mg2+ 2.2 μL，10 pmol/μL上游引物2.0 μL、10 pmol/μL下游引物2.0 μL，10 mmol/L dNTPs 1.3 μL，2U/L Taq DNA聚合酶0.5 μL，ddH2O 13.5 μL，总体系25.0 μL。IGF1R基因引物反应循环参数：95 ℃预变性6 min，95 ℃变性30 s，58.5 ℃退火30 s，72℃延伸30 s，30次循环，72 ℃延伸10 min，10 ℃保存[1-4]。

1.4 PCR-SSCP分析

在7.0 μL变性缓冲液中加入PCR产物3.0 μL，98 ℃变性10 min，再迅速冰浴5 min。在10%聚丙烯酰胺凝胶中加入变性好的PCR产物点样，140 V电压电泳8～24 h[1-4]。在电泳结束后，进行银染显色并拍照记录结果[1]。

1.5 数据统计分析

为比较鸡IGF1R各基因型之间的差异，特配合下列模型进行最小二乘方差分析。

yij=μ+Gi+eij

式中，yij、μ、Gi、eij分别为性状测定值、群体平均值、基因型效应、随机残差效应。

采用SPSS统计软件的GLM（General Linear Model）过程完成所有统计分析，采用LSD法进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 PCR-SSCP结果

P16引物扩增片段采用PCR-SSCP进行分析。P16扩增片段有AA、AB、AC、BB、BC、CC 6种带型（图1）。

2.2 序列分析结果

AA型与CC型相比在143 082 bp处发生了C→G突变，在143 135 bp处发生了A→G突变；BB型与CC型相比在143 135 bp处发生了A→G突变（图2）。endprint

2.3 IGFIR基因P16位点与生长性状的关联分析

由表1可知，在4、8、12、16周龄体重均没有显著影响（P>0.05），在初生重方面，AA、AB、AC、BB和BC基因型个体的体重小于CC基因型个体的体重，具有显著的差异性（P<0.05）。

3 结论与讨论

在外显子16处发现2个SNP位点（C143082G和 A1431

35G），位点全部位于编码区，突变都未导致氨基酸的改变。雷明明等[8]发现IGF1R基因与生长和屠体性状显著相关，与初生重显著相关（P<0.05）；金崇富等[3]发现IGF-IR基因IGR2-1、IGR2-2（AluⅠ）、IGR2-3、IGR3-2（Hin1Ⅰ）和IGR16（IGR16-1、IGR16-2）位点显著影响着鸡的生长性状（P<0.05）；高凤华等[9]发现肉鸡品系的IGF1R基因对5周龄体重有显著影响（P<0.05）；Moe等[10]发现IGF1R基因多态性与鹌鹑体重具有相关性，对10周龄体重有极显著的影响（P<0.01）。

本研究发现，在4、8、12、16周龄体重均没有显著影响（P>0.05），在初生重方面，CC基因型个体的体重显著高于AA、AB、AC、BB和BC基因型个体的体重（P<0.05）。2个多态位点与生长性状关联分析结果推测IGF1R基因可能是影响鸡体重的主（效）基因或与影响体重主（效）基因紧密连锁[1-2]。

4 参考文献

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