兔巴氏杆菌病病原分离鉴定与药敏实验

方月 （辽宁省东港市动物疫病预防控制中心 118300）

兔巴氏杆菌病病原分离鉴定与药敏实验

方月 （辽宁省东港市动物疫病预防控制中心 118300）

针对一例病兔进行细菌分离培养、生化鉴定、动物实验以及药敏实验，实验结果：经染色镜检，生化实验该病原为多杀性巴氏杆菌，动物实验证明，该菌有一定的致病力，药敏实验结果表明该菌对强力霉素，羧苄西林中度敏感，对四环素，卡那霉素，先锋霉素Ⅵ，万古霉素，苯唑西林，氧氟沙星，新霉素，多西环素，奥尼妙林高度敏感，对庆大霉素耐药。

巴氏杆菌；分离鉴定；动物实验；药敏实验

兔巴氏杆菌病是由病原菌多杀巴氏杆菌引起的一种在世界各地均发生频率较高的传染病，其主要特征为出血性败血症[1]，临床上表现为败血症型，鼻炎型，肺炎型，中耳炎型，结膜炎型等型。发病兔子食欲不振，精神沉郁，呼吸困难，体温升高，流鼻液[2]。该病呈世界性分布，是严重危害养兔业的重要传染病之一。

目前兔巴氏杆菌病的发生呈上升趋势，近年国内也不断有疫情报道，该病给养兔业造成巨大的经济损失。因此，加强对多杀性巴氏杆菌的研究，对兔巴氏杆菌的控制以及促进养兔业的发展至关重要。本实验通过对兔巴氏杆菌病病原进行分离鉴定，并结合动物实验和药敏实验，进一步了解兔巴氏杆菌及其生理特性，希望能够为兔巴氏杆菌疾病的诊断和治疗提供一些参考。

1 材料与方法

1.1 材料

普通营养琼脂、牛肉膏、蛋白胨、药敏纸片等。

1.2 实验方法

1.2.1 病原分离培养

取病料接种接种于鲜血培养基，37℃培养24h后观察，挑取直径1～2mm、透明、光滑、湿润的疑似菌落接种于TSA平板上纯化，然后挑取单个菌落进行革兰氏染色，观察结果。

1.2.2 生化实验

对已经纯化细菌进行糖发酵实验，硫化氢实验，枸橼酸盐实验，观察结果。

1.2.3 动物实验

已经纯化好的菌接种于普通肉汤培养基上，控制温度在37℃培养24h。将实验所用健康小鼠分为2组，每组5只，进行腹腔注射。第一组接种菌液0.2ml，第2组接种营养肉汤0.2ml，为对照组。将注射后的小白鼠隔离饲养，观察其发病及死亡情况。小白鼠死亡后立即进行剖解，采脾脏、肝脏等部位病料在鲜血培养基上划线培养，镜检观察其是否为所接种的菌。

1.2.4 药敏实验

将分离菌纯培养物分别均匀地涂抹在营养琼脂平板之上，等培养基表面略干以后再用无菌镊子夹取药敏纸片贴在琼脂培养基表面，每一平板可贴7片纸片。然后翻转置于37℃温箱里培养24h，最后取出平板观察药敏试纸周围有无抑菌环出现并测量抑菌环直径。

2 实验结果

2.1 分离培养结果

在鲜血琼脂平板上培养24h后，生长良好，平板上可见光滑湿润，圆形隆起，浅灰色透明，直径1～2mm的菌落，染色镜检可见革兰氏染色呈阴性，两端钝圆无芽孢杆菌。

2.2 生化实验

葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖，甘露醇，果糖，蔗糖，产酸不产气。不能发酵乳糖，鼠李糖，肌醇，麦芽糖。硫化氢实验呈阳性，枸橼酸盐实验呈阴性。该生化实验结果符合巴氏杆菌生化特性。

2.3 动物实验

12h后实验组小鼠出现被毛凌乱，精神沉郁，食欲不振，呼吸困难，对照组小鼠无明显变化，24h后实验组小鼠陆续死亡，解剖后可见淋巴结，肝脏肿大，心脏有出血，然后挑取单个菌落进行革兰氏染色，在油镜下观察到，两端钝圆的短杆菌或球杆菌，单个存在，无芽胞，革兰氏染色为阴性。

2.4 药敏实验

参考杭州微生物试剂有限公司纸片法药敏实验抑菌环直径判断标准。由附表可以得知，该分离病原菌对强力霉素，羧苄西林中度敏感，对四环素，卡那霉素，先锋霉素Ⅵ，万古霉素，苯唑西林，氧氟沙星，新霉素，多西环素，奥尼妙林高度敏感对庆大霉素耐药。

附表 分离菌的药敏实验结果

3 讨论分析

经过对病料的检查结果初步诊断，该病的病原菌为巴氏杆菌，由生化实验鉴定可确诊病原菌为巴氏杆菌。

通过动物实验表明，该分离菌有较强的致病性，且小鼠的死亡率达100%，所以在防治过程中，除了及时预防，还要尽量辅助治疗以减少损失，药敏实验结果可以看出，分离病原菌对强力霉素，羧苄西林中度敏感，对庆大霉素耐药，余下药物高度敏感。由于巴氏杆菌会出现耐药性，因此我们在进行防治时需要注意更换药物，或进行联合用药，以避免出现抗药菌株，导致防治效果不理想。

巴氏杆菌是多种动物的重要病原菌，兔子一般是9周龄至6月龄易感，感染后常引起大批发病和死亡。比起治疗，该病的防治更为最重要，饲养中兔病的发生与环境有很大关系，大多数病都是饲养环境太差造成的，所以要加强科学的饲养管理，搞好卫生，提高兔子本身抵抗力，如果养兔场一旦发病应立即进行隔离，治疗，消毒等工作，尽量不要让该病继续扩散[3]。总而言之，做好日常的饲养管理和防疫接种，保证兔的营养和维持圈舍的清洁卫生是预防本病发生的关键。

[1]苏雄.兔巴氏杆菌的分离与鉴定[J].华中农业大学学报,2008,15(8)：21-22.

[2]郭永刚,陈益,侯春斌.一例兔巴氏杆菌病的诊断[J].河南畜牧兽医（综合版）,2013,28(11)：38-39.

[3]秦翠丽.豫西地区兔巴氏杆菌病病原特性与PCR检测技术研究[D].南京农业大学,2008,26(7)：124-126.