抗肿瘤药物紫杉醇对腺样囊性癌细胞侵袭力以及明胶酶水平的影响

●徐磊 舒晓宏

抗肿瘤药物紫杉醇对腺样囊性癌细胞侵袭力以及明胶酶水平的影响

●徐磊1舒晓宏2

目的：通过对不同浓度的紫杉醇使用分析，对进行含有紫杉醇抗肿瘤药物对腺样囊性癌细胞侵袭力以及明胶酶水平的影响。方法：使用Bristol-Myers Squibb公司生产的紫杉醇，使用0.01mg/L、0.06mg/L以及0.1mg/L的不同浓度紫杉醇，对人ACC-M细胞进行培养。研究紫杉醇对腺样囊性癌细胞侵袭力以及明胶酶水平的影响。结果：未受紫杉醇处理的对照组细胞，粘附率达99.5%，而在不同程度下的紫杉醇实验组细胞粘附率都有所下降，其结果分别为86.2%、72.8%和59.5%，所产生结果与紫杉醇的浓度比例成正比关系。结论：通过实验数据表明，紫杉醇的浓度对ACC-M黏附性以及明胶酶活性等都有明显的抑制作用。

腺样囊性癌；紫杉醇；明胶酶

调查显示腺样囊性癌是一种侵袭力强，易发生转移的口腔和面部恶性肿瘤，经过多方查找与研究试验表明，紫杉醇对癌细胞有控制治疗作用，是当下一种高效抗癌药物[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

由Bristol-Myers Squibb公司生产的紫杉醇；大连医科大学中心实验室提供的人高转移腺样囊性癌细胞株（ACC-M）；广州鼎国生物有限公司提供的侵袭小室（boyden 小室）；广州基因公司提供的细胞外基质凝胶(ECM)，MILLIPORE公司的聚碳酸酯膜Isopore，日本SANYO的BB5060/BB16 二氧化碳培养箱，泸南科学仪器联营厂的BFX5-320 型低速离心机，上述实验用药都符合医学规定。

1.2 方法

1.2.1 紫杉醇处理后ACC-M黏附性的检测

利用96孔培养板分别注入ECM,干燥封闭，轻洗3次。加入不同浓度的紫杉醇的ACC-M细胞悬浮液100ul,培养2h后进行3次轻洗，洗去未黏附成功的细胞，然后100ul0.4g/L的MTT孵育4h，加入200ul的DMSO再对每个孔A450mmOD检测，通过细胞黏附率结果，可以对不同浓度下的紫杉醇和无紫杉醇的黏附率形成对比组。

1.2.2 紫杉醇处理下ACC-M侵袭力

在改良的boyden上下小室间涂上含有5ug/10ulfibronectin的聚碳酸酯膜，并ECM用4℃的RPMI1640稀释，分两次涂在膜的表面，每10min给5ug/10ul,下室加入含有10%FCS的RPMI1640，上室加入300ul 5⋆105ml的ACC-M细胞悬液，进行培养2h，当细胞贴壁后换含有不同浓度紫杉醇培育10h，再用棉签擦拭上室的ECM细胞，取出微孔膜、固定、染色，随机选取五个视野，采集数据，取平均值，重复三次，最后对不同浓度下紫杉醇侵袭数量、迁移数量和不含紫杉醇的细胞组进行对照。

1.2.3 明胶酶活性测定

在6孔每个细胞培养板中，加入ECM30.0ug/60ul,进行干燥与紫外线消毒，进行24h培养前再加入5.0⋆105/mlACC-M细胞的悬浮液1.5ml。然后在不同浓度的紫杉醇培养液培养24h，再将1.5ml无血清RPPMI1640培养72h，取其细胞上清液。利用“空斑法”对上清培养液的明胶酶活性进行测定，将通过Gelatin Type溶解浓度为4mg/ml的Tris-Cl缓冲液，琼脂糖与Tris-Cl溶解配成2%的溶液，两种溶液各取3ml铺在培养皿中，凝固，打孔，分别注入不同浓度的紫杉醇的培养液上清液，置于培养箱内72h，之后用1%的盐水冲洗，0.1%的考马斯量蓝R250溶液染色20min，脱色，测量空周围空斑的直径，以代表明胶酶活性，此实验重复五次，对数据记录。

1.3 疗效判定

显效：临床实验表明，紫杉醇对乳腺癌和卵巢癌已起到明显控制作用；有效：针对腺样囊性癌症，紫杉醇对其侵袭力起到转移效果，但未起到根治作用；总有效率=显效+有效/总比例⋆100%。实验显示，不同浓度的紫杉醇对腺样囊性癌细胞，产生的结果也各有不同，其产生的结果与含紫杉醇剂量成正比。

1.4 统计学分析

所得数据用SPSS11.0统计软件得出各组的平均值，行4组间两两对比t检验，P＜0.05为有显著差异。

2 结果

对照组的细胞未受紫杉醇的处理，其黏附率达99.5%，含有不同浓度紫杉醇处理下的ACC-M黏附率明显下降，分别为86.2%、72.8%、59.5%详情见表1。

表1 不同浓度紫杉醇处理下ACC-M黏附性比较

通过实验结果显示，紫杉醇在对抑制ACC-M的侵袭力等方面都有具有明显的效果，其结果也与紫杉醇呈明显的剂量关系，详情可以参考相关文献。

3 讨论

腺样囊性癌细胞利用自身特点贯穿于整个转移的过程中，想要抑制肿瘤控制侵袭力是关键，每个癌细胞在侵袭运动中，细胞骨架参与整个信息的传递，通过对构架改造来影响行为的运变能力。微观蛋白与微观系统是紫杉醇的核心，能够诱导和促进微管蛋白聚合，防止解散，稳定微管等作用。在实验中显示紫杉醇对ACC-M有明显下调能力，对其分析这与微管系统的破坏存有密切联系[2]。

本研究采用空斑法、ELISA对ACC-M明胶酶的表达及活性进行评价，结果显示，紫杉醇对明胶酶的酶原合成存在有效的影响，通过微管系统的破坏对细胞骨架失调起阻断影响，可以导致细胞黏附能力减弱，整合素分子聚集成局部黏附斑受阻。空斑法研究表明，细胞培养上清液中的明胶酶活性虽紫杉醇的浓度升高而降低，但低浓度紫杉醇作用下的数据显示，目前对明胶酶活性受抑制的机制还需要进一步研究。

综上所述，在0.1至0.01mg/L浓度范围内，紫杉醇能够对ACC-M的粘附力、运动以及侵袭力，有着明显下降的表达及活性,实验表明紫杉醇对ACC-M的侵袭起到有效的控制能力。

（作者单位：1烟台毓璜顶医院药学部；2大连医科大学药学院）

[1]林耿冰.紫杉醇抑制腺样囊性癌体外侵袭力及其机制的初步研究[D].福建医科大学,2003.

[2]刘浩,俞光岩.紫杉醇抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究[J].现代口腔医学杂志,2002,14(03)∶193-194+289.

舒晓宏，博士，教授，博士生导师。