阿尔茨海默病患者接受多奈哌齐治疗前后血浆β淀粉样蛋白-42水平的研究

河南省新乡医学院第二附属医院（453003）潘飞 许彤 赵瑾 李玉凤

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是最常见的老年性痴呆中的一种，是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，以进行性记忆和认知功能障碍为主要临床特征。其特征性病理学改变包括：神经细胞外的老年斑（senile plaques，S P）、神经细胞内的神经元纤维缠结（neurofibrillary tangle，NFT）及区域性神经细胞死亡（神经元与神经突触异常丢失）等[1]。SP的主要成分则是由β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP）水解生成的β-淀粉样蛋白（Aβ）组成，NFT主要由双股螺旋纤维（paired helical filament，PHF）构成，其主要成分是过度磷酸化tau蛋白的各种异构体。随着当今社会逐步进入老龄化，AD的发病率逐年升高，对社会造成了重大影响。

Aβ为病理状态下由跨膜蛋白APP经β-分泌酶和γ分泌酶的协同作用裂解而来，非溶性Aβ在大脑沉积形成神经炎性斑，是AD发病的核心环节[2]。Aβ-40和Aβ-42是Aβ中最常见的残基亚型，但Aβ-42较Aβ-40疏水性强，具有更强的毒性作用，也是老年斑的主要成分，与AD疾病的关系较为密切[3]。研究表明，AD患者的脑脊液中Aβ-42水平下降[4]（由于Aβ-42在脑内沉积，使得脑脊液中Aβ-42含量减少），其诊断AD的灵敏度为86%，特异性可达90%。而Aβ-42在神经细胞中的沉积可能是通过降低蛋白磷酸酶2A（Protein phosphates 2A, PP2A）的活性来实现对神经细胞的毒理作用，从而影响AD患者的认知功能[5]。研究发现，Aβ-42同样也存在于外周血细胞中，事实上，AD患者的生化改变不仅在大脑中，而且也发生于血管和血细胞里，同时虽然脑脊液是反应中枢神经系统细胞生化改变最直接的体液组织，但由于脑脊液标记物取材不易，代价偏高，因此AD血液标记物仍是目前国内外研究的热点，用血液生化方法检测早期AD可以进行有针对性的干预治疗。而由于外周血液中富含APP和代谢所需要的相关蛋白酶，因此，外周血可以作为研究Aβ-42的一个良好载体[6]。

所以，AD患者外周血中Aβ-42的动态变化是否可以作为AD诊断和判断病情进展的生物标志物之一，以推测AD病理改变情况还需进一步探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部病例选自2012年10月～2015年10月年新乡医学院第二附属医院收治的符合标准的病例60例，其中5例由于不合作而脱落，因此最终共计收得入组病例55例。所有病例均来源于河南地区汉族人群，其中男性21例，女性34例，年龄在50～80岁，平均年龄（67.41±4.35）岁，平均受教育年限（5.84±2.07）年。入组标准：①AD诊断标准符合美国精神病学会精神障碍诊断和统计手册第四修订版（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-IV, DSM-IV）的诊断标准；②头颅CT或MRI符合AD诊断；③父母均为汉族；④入组前一个月内未服用胆碱酯酶抑制剂或拟胆碱类药物。

排除标准：①血管性痴呆、假性痴呆及其他可能引起痴呆的疾病；②意识障碍；③患有严重的不稳定躯体疾病，合并癫痫、活动性溃疡、明显的肝、肾、肺、代谢和内分泌异常、明显的泌尿系梗阻及严重的心血管疾病患者。④未按试验方案规定用药的病例或疗程未结束而出现过敏反应或严重不良反应者。

另选择正常对照组55例。正常老年对照者均来自新乡医学院第二附属医院的职工体检者或患者家属，均为河南地区汉族人群，年龄为50～80岁，其中男性26例，女性29例，年龄在60～80岁，平均年龄（67.50±5.13）岁，平均受教育年限（6.59±2.34）年。在年龄、性别和受教育年限等方面与病例组相比差异无显著性(P>0.05)。入组标准：①无严重躯体疾病；②目前精神状况良好，既往无各类严重精神障碍；③否认二系三代有任何精神疾病遗传史；④与实验组的受教育年限、年龄和性别方面无显著性差异；⑤MMSE>27分。

排除标准：①有神经系统疾病史或神经系统疾病家族史；②目前患有严重的躯体疾病和精神系统疾病、长期物质滥用史和内分泌疾病者；③有癫痫病史或癫痫发作病史者。④知情后不合作者；⑤患有影响记忆力的其他疾病患者；⑥ MMSE≤27分。

1.2 方法

1.2.1 临床资料的收集：根据入组标准确定病例组和对照组，并分别进行血浆β淀粉样蛋白-42（Aβ-42）浓度测定。各病例组治疗24周后再次进行血浆β淀粉样蛋白-42（Aβ-42）浓度测定。血浆β淀粉样蛋白-42（Aβ-42）浓度测定，使用北京TAD有限公司生产的β淀粉样蛋白-42（Aβ-42）酶联免疫分析试剂盒对所有受试者血液样本进行分析，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 给药方法：病例组给予多奈哌齐药物常规治疗。第1～6周各单药组多奈哌齐剂量为5mg/晚（5mg/片），饭后30分钟温开水送服。若无严重心律失常、昏厥、癫痫或黑便等不良反应发生，则第7～24周加量至10mg/晚（10mg/片）。

1.2.3 数据管理：所有入组人员的基本资料（包括性别、年龄、学历等）、病例组的临床资料以及正常对照者和治疗前后血浆Aβ-42水平均使用Microsoft Excel 2010软件进行管理，所有计量资料采用均数±标准差（±s）表示。

1.2.4 临床数据统计分析 所有数据统计分析在SPSS20.0软件中进行。治疗前正常对照组、和AD组的血浆Aβ-42水平，AD组与对照组比较采用独立样本t 检验进行，AD组治疗前后比较采用配对样本t 检验进行。双侧P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

分析血浆Aβ-42水平，对比AD组和正常对照组发现：治疗前AD组Aβ-42为21.50±5.10ng/L，正常对照组的Aβ-42为16.49±3.63 ng/L，治疗前AD组血浆Aβ-42水平明显高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（t=6.02，P<0.01）。具体见Aβ-42为17.65±3.84 ng/L，治疗前AD组血浆Aβ-42水平明显高于治疗后，两组比较差异有统计学意义（t=15.00，P＜0.01）。具体见附表2。

对比治疗后AD组和正常对照组发现：治疗后AD组Aβ-42为17.65±3.84 ng/L，正常对照组的Aβ-42为16.49±3.63ng/L，治疗后AD组血浆Aβ-42水平稍高于正常对照组，两组比较差异无统计学意义（t=1.63，P＞0.05）。具体见附表3。

3 讨论

Aβ是由跨膜糖蛋白APP分泌而来，在大脑沉积形成神经炎性斑，是AD发病的核心环节，而Aβ-42是最常见的残基亚型，与疾病关系更为密切，Aβ-42在AD的病因研究中越来越受到重视[7]。研究证实，Aβ-42主要存在于神经元和外周血细胞中，而AD患者的生化改变不仅发生在脑脊液中，而且也发生于外周血中。但由于脑脊液标记物取材不易，而血液取材方便，简便易行，具有一定优势，因此外周血作为Aβ-42的一个良好载体仍被广泛研究应用[6]。

本研究利用ELISA测定血浆Aβ-42水平发现，AD患者与正常对照组相比较，血浆Aβ-42水平升高，差异有统计学意义（P<0.05），并且AD患者经过多奈哌齐24周规范治疗后血浆Aβ-42水平明显降低，病情有所改善，说明血浆Aβ-42水平可以在一定程度反映脑内SP程度，进而反映AD严重程度。考虑由于外周血中的Aβ-42不会像脑脊液中的Aβ-42在中枢神经系统中那样沉积，因此AD患者外周血中的Aβ-42水平往往比正常人偏高，国内外的附表1。

对比AD组治疗前后发现：治疗前AD组Aβ-42为21.50±5.10 ng/L，治疗后AD组一些研究也证实了此结论[8][9]。

附表1 AD组治疗前与对照组血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

附表1 AD组治疗前与对照组血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

组别 例数 Aβ-42 t P治疗前AD组 55 21.50±5.10 6.02 ＜0.01对照组 55 16.49±3.63

附表2 AD组治疗前后血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

附表2 AD组治疗前后血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

组别 例数 Aβ-42 t P治疗前AD组 55 21.50±5.10 15.00 ＜0.01治疗后AD组 55 17.65±3.84

附表3 AD组治疗后与对照组血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

附表3 AD组治疗后与对照组血浆Aβ-42水平比较（±s，ng/L）

组别 例数 Aβ-42 t P治疗后AD组 55 17.65±3.84 1.63 ＞0.05对照组 55 16.49±3.63

AD患者经过多奈哌齐24周规范治疗后血浆Aβ-42水平明显降低，病情有所改善，说明多奈哌齐对于治疗AD有一定作用。作为第二代胆碱酯酶抑制剂，其作用机制主要是通过可逆性地抑制乙酰胆碱酯酶，从而引起乙酰胆酰水解使得受体部位的乙酰胆碱含量增加，而研究表明多奈哌齐可能还包括有其他作用机制，尤其是通过增强PP2A的活性以及调节糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）和烟碱型乙酰胆碱受体（Nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）的活性来抑制Aβ-42所带来的神经细胞毒理作用，减轻淀粉样蛋白的神经毒性，起到神经保护作用，都可能是它影响患者认知功能和精神症状的作用通路。

综上所述，说明多奈哌齐对于治疗AD有一定作用，能改善AD症状。血浆Aβ-42水平可以在一定程度反映AD严重程度，作为一项便于操作且客观的检查，将对AD筛查，诊断及治疗提供有力的证据，值得临床上推广。