2015—2016年广西梧州市主要病毒性猪病的检测与分析

戴光文，吴颖航，陈雪英，江精华，韦邦伟，谢丽华

（1.梧州市动物疫病预防控制中心，广西梧州 543002；2. 梧州市水产畜牧试验场，广西梧州 543002）

2015—2016年广西梧州市主要病毒性猪病的检测与分析

戴光文1，吴颖航1，陈雪英2，江精华1，韦邦伟1，谢丽华1

（1.梧州市动物疫病预防控制中心，广西梧州 543002；2. 梧州市水产畜牧试验场，广西梧州 543002）

采用RT-PCR及PCR技术，对广西梧州市7个县（市、区）屠宰场2015—2016年送检的1 304份猪组织样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行高致病性蓝耳病病毒（HPRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）核酸检测，对7个规模场送检的70份病死猪组织病料样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行HPRRSV、CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、圆环病毒（PCV）核酸检测。采用ELISA技术，对梧州市7个县（市、区）送检的8 572份血清检测猪瘟免疫抗体，对2 066份血清检测猪蓝耳病免疫抗体。结果显示：HPRRSV、CSFV核酸检测均为阴性；规模场病死猪组织病料的PRV核酸阳性率为14.3%，PCV为57.1%；猪瘟免疫抗体合格率为90.41%，蓝耳病免疫抗体合格率为73.48%。监测结果表明：梧州市流行的生猪高热病主要涉及猪伪狂犬病和猪圆环病毒病2种病毒病；猪蓝耳病和猪瘟的强制免疫，有效控制了该地主要猪病毒性疫病的发生与流行。

主要病毒性猪病；高致病性蓝耳病；猪瘟；伪狂犬病；圆环病毒病

猪瘟病毒（CSFV）、高致病性猪蓝耳病病毒（HPRRSV）、猪圆环病毒（PCV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）是目前危害猪场最为严重的4种传染病病原，其均能导致猪群免疫力下降或免疫应答反应差，常引起猪高热病，造成猪群生长缓慢或停滞、病残和死亡猪只数量增多，饲料效率、生长速度和猪群整体均匀度降低，给猪场造成巨大经济损失。为掌握广西梧州市CSFV、HPRRSV、PCV和PRV感染情况及免疫保护效果，采用PCR、RT-PCR与ELISA方法开展监测，从而给这些疫病的科学防控提供决策依据。

1 材料与方法

1.1 样品

1.1.1 组织样品。对2015—2016年梧州市7个县（市、区）屠宰场送检的1 304份猪组织（肺脏、淋巴结、脾脏）样品进行CSFV、HPRRSV检测；对7个商品代饲养场送检的70份患高热病死亡猪的组织病料（肺脏、淋巴结、脾脏）样品进行CSFV、HPRRSV、PRV、PCV检测。每份样品包括颌下淋巴结2个、脾脏50 g和肺脏50 g。

1.1.2 血清样品。对2015—2016年梧州市7个县（市、区）的规模场和散养户送检的8 572份血清样品检测猪瘟抗体，对2 066份样品检测猪蓝耳病抗体。每份血清样品不少于2 mL，并且清亮、无融血。对血清样品冷冻保存，冷藏送检。

1.2 检测试剂

1.2.1 病原检测试剂盒。猪瘟病毒RT-PCR检测试剂盒、高致病性蓝耳病病毒RT-PCR检测试剂盒、伪狂犬病病毒PCR检测试剂盒、猪圆环病毒PCR检测试剂盒，均购自广州维伯鑫生物科技有限公司。

1.2.2 抗体检测试剂盒。猪瘟抗体检测试剂盒，购自韩国金诺公司；猪蓝耳病抗体检测试剂盒，购自法国LSI公司。

1.3 检测方法

对CSFV，采用《猪瘟防治技术规范》（农医发〔2007〕12号）中的反转录聚合酶链反应（RTPCR）；对HPRRSV，采用《猪繁殖与呼吸综合征诊断方法》（GB/T 18090—2008）中的反转录-聚合酶链反应试验（RT-PCR）；对PCV，按照《猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法》（GB/T 21674—2008）中的规定进行；对PRV，按照《伪狂犬病诊断技术聚合酶链反应方法》（GB/T18641—2002）中的规定进行。对猪瘟抗体，采用《猪瘟防治技术规范》（农医发〔2007〕12号）中的猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法；对猪繁殖和呼吸综合征（蓝耳病）抗体，采用《猪繁殖与呼吸综合征诊断方法》（GB/T 18090—2008）中的间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA）。

2 结果与分析

2.1 核酸RT-PCR扩增结果

2.1.1 HPRRSV核酸RT-PCR扩增结果。应用RT-PCR 方法。阳性质控品出现124 bp条带，阴性质控品不出现条带或出现条带片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。若被检样品出现124 bp条带，判断为阳性，否则为阴性。RT-PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果见图1。

图1 HPRRSV RT-PCR检测结果

2.1.2 HPRRSV临床样品检测结果与分析。对屠宰场及规模猪场采集的42批次1 374份组织样品进行HPRRSV核酸检测，发现均为阴性（表1、表2）；对种猪场、商品代饲养场及农村散养户采集的111批次2 066份血清样品进行猪蓝耳病免疫抗体检测，发现个体免疫合格1 518份，个体免疫合格率为73.48%，群体合格72个，群体合格率为64.86%。检测结果说明，实施强制免疫，提高免疫质量，对于控制猪蓝耳病的发生及流行起到了一定的效果。

表1 屠宰场组织样品HPRRSV检测结果

表2 规模猪场病死猪组织样品HPRRSV检测结果

2.1.3 猪蓝耳病免疫抗体检测结果与分析。2015—2016年，共在102个商品代饲养场、1个种猪场和8个散养户，抽检111批2 066份血清样品进行猪蓝耳病免疫抗体检测，检出阳性样品1 518份，抗体合格率为73.48%，群体合格率为72%（表3）。检测结果表明，梧州市的猪群蓝耳病免疫效果较好，抗体合格率达到了农业部规定的标准（70%以上）。

表3 猪蓝耳病免疫抗体检测结果

2.2 CSFV检测与分析

2.2.1 CSFV核酸RT-PCR扩增结果。应用RTPCR 方法。阳性质控品出现142 bp条带，阴性质控品不出现条带或出现条带片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。若被检样品出现142 bp条带，判断为阳性，否则为阴性。RT-PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果见图2。

图2 CSFV RT-PCR检测结果

2.2.2 CSFV临床样品检测结果与分析。2015—2016年，从屠宰场采集35批次1 304份组织样品，从7个商品代饲养场采集70份病死猪组织样品，进行CSFV核酸检测，未发现阳性样品（表4、表5）。

2.2.3 猪瘟免疫抗体检测结果与分析。2015—2016年，从屠宰场及规模猪场采集42批次1 374份组织样品进行CSFV核酸检测，发现均为阴性；对种猪场、商品代饲养场、市场、屠宰场及农村散养户采集500批次8 572份猪血清样品进行猪瘟免疫抗体检测，发现个体免疫合格7 750份，个体免疫合格率为90.41%，群体合格472个，群体合格率为94.40%（表6）。该结果表明，梧州市的猪瘟免疫效果较好，说明强制免疫可防止CSFV的感染，有助于控制猪瘟的发生及流行。

表4 屠宰场组织样品CSFV检测结果

表5 商品代饲养场病死猪组织样品CSFV检测结果

表6 猪瘟免疫抗体检测结果

2.3 PRV检测与分析

2.3.1 PRV核酸PCR扩增结果。应用PCR 方法。阳性质控品出现148 bp条带，阴性质控品不出现条带或出现条带片段较小的引物二聚体条带，则实验结果成立。若被检样品出现148 bp条带，判断为阳性，否则为阴性。PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果见图3。

2.3.2 PRV临床样品检测结果与分析。2015—2016年，共对7个商品代饲养场的70份病死猪组织病料样品进行PRV病毒核酸检测，2015年从1个商品代饲养场的10份样品中检出PRV核酸阳性，检出率为14.3%（表7）。该结果说明梧州市仍有猪伪狂犬病疫情发生，需引起关注。

图3 PRV PCR检测结果

表7 商品代饲养场样品PRV检测结果

2.4 PCV检测与分析

2.4.1 PCV核酸PCR扩增结果。应用PCR 方法。阳性质控品出现124 bp条带，阴性质控品不出现条带或出现条带片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。若被检样品出现124 bp条带，判断为阳性，否则为阴性。PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果见图4。

图4 PCV PCR检测结果

2.4.2 PCV临床样品检测结果与分析。2015—2016年，共对7个商品代饲养场70份病死亡猪组织病料样品进行PCV核酸检测，从2015年3个商品代饲养场及2016年1个商品代饲养场的40份样品中检出PCV核酸阳性，检出率为57.1%（表8）。这说明梧州市的猪圆环病毒病发病率较高，是目前该地区猪场存在的主要病毒病。

表8 商品代饲养场病死猪组织样品的PCV检测结果

3 讨论

猪高热病不是某一特定猪病，是指具有高热症状的一系列猪病的总称。其病原分为病毒、细菌、寄生虫3类。其中，病毒以PRRSV、PCV、CSFV、PRV以及猪流感病毒（SIV）等为主[1]；发病猪群以冬末春初的保育仔猪为主[2]。对疑似高热病发病死亡猪组织病料进行上述相关病毒的核酸检测表明，梧州市流行的生猪高热病中，主要涉及猪伪狂犬病和猪圆环病毒病2种病毒病，且多以单病种发病，未发现混合感染。

以RT-PCR来监控HPRRSV、CSFV是可行的[3]。日常监测未发现阳性样品的结果说明强制免疫对于控制疫病发生及流行具有一定的效果。但鉴于样品量不够、采样地点不全面、抽样限制等因素，不排除临床上存在高致病性猪蓝耳病和猪瘟的可能。种猪场、商品代饲养场及农村散养户的猪蓝耳病和猪瘟免疫抗体，经检测均达到了国家规定的免疫抗体合格率70%以上的标准。这可以有效阻断疫病的传播与流行[4]。

近年来，猪圆环病毒病和猪伪狂犬病发病率较高，对养猪业危害较大。目前国际上对猪伪狂犬病的控制和根除主要依靠接种基因缺失疫苗和与之相配套的鉴别诊断方法。针对猪圆环病毒病和猪伪狂犬病，现在我国对种猪主要采取净化措施，对商品猪采取免疫措施。目前商品猪场及散养户在防控猪圆环病毒病方面，除了谨慎引种，严格卫生防疫消毒制度，做好灭蚊、灭蝇、灭鼠等工作外，重要的是还要使用高效、优质疫苗免疫，定期进行抗体监测。

[1] 苏双，任锐，吕雪峰，等. 我国猪高热病的流行现状、流行趋势与防制对策[J]. 吉林畜牧兽医，2010，31（5）：5-7.

[2] 柳金雄，李晓成，刘道新，等. 湖南省猪瘟流行病学调查和分析[J]. 畜牧与兽医，2005，37（11）：21-23.

[3] 胡杰，陈义祥，陆文俊，等. 广西种猪场CSF、PRRS、PCV2与PR监控效果研究[J]. 广西农业科学，2010，41（5）：485-488.

[4] 母安雄，杨宗照，严惠群，等. 仔猪PRRS母源抗体消长规律及疫苗免疫效果观察[J]. 浙江农业科学，2008（1）：110-112.

（责任编辑：朱迪国）

Detection and Analysis on Major Viral Swine Diseases in Wuzhou City of Guangxi from 2015 to 2016

Dai Guangwen1，Wu Yinghang1，Chen Xueying2，Jiang Jinghua1，Wei Bangwei1，Xie Lihua1
（1. Wuzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Wuzhou，Guangxi 543002；2. Wuzhou Fishery and Animal Husbandry Proving Ground，Wuzhou，Guangxi 543002）

In order to determine the epidemic situation and immune protection effect of swine viral diseases，the nucleic acid detection was carried out towards 1 304 pig tissue samples（including lung，lymph node and spleen）from slaughterhouses of 7 counties（cities，districts）to detect HPRRSV and CSFV by the methods of RT-PCR and PCR，and 70 tissue samples（lung，lymph node，spleen）collected from scaled swine farms were also detected for HPRRSV，CSFV，PRV and PCV . A total of 8 572 serum samples from 7 counties (cities，districts) of Wuzhou City were detected for antiibodies against CSFV by ELISA，and 2 066 serum samples were tested for antibodies against PRRSV. The results showed that the nucleic acids of both HPRRSV and CSFV were undetectable. The positive detection rates of PRV and PCV were 14.3% and 57.1%，respectively. The qualified rates of immune antibody of CSFV and PRRSV were 90.41% and 73.48%，respectively. Monitoring results showed that the major prevalent viral swine diseases in Wuzhou City were two kinds swine viral diseases of Pseudorabies and Porcine circovirus disease，and the occurrence and epidemic of viral swine diseases were controlled effectively by compulsory immunization of CSF and PRRS.

major viral swine diseases；HPRRS；CSF；PR；PC

S851.3

B

1005-944X（2017）11-0004-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.11.002

广西水产畜牧科技推广应用项目（桂渔牧科201528021）

江精华