人尿酸盐转运子URAT1基因rs893006多态性与男性高尿酸血症的相关性

陆娜，修浩，崔开眉，桑圣刚，余平

(1.中南大学基础医学院免疫学系，湖南 长沙 410013；2.海南医学院热带医学与检验医学院，海南 海口 571199)

人尿酸盐转运子URAT1基因rs893006多态性与男性高尿酸血症的相关性

陆娜1，修浩2，崔开眉2，桑圣刚2，余平1

(1.中南大学基础医学院免疫学系，湖南 长沙 410013；2.海南医学院热带医学与检验医学院，海南 海口 571199)

目的 探讨海南汉族男性高尿酸血症与人尿酸盐转运子URAT1基因rs893006多态性的相关性，并分析高尿酸血症的影响因素。方法 将海南医学院第一附属医院2016年4月至2017年4月收治的100例高尿酸血症男性患者作为高尿酸血症组，另选取同期在我院体检的100例健康男性作为对照组，比较两组受检者的一般资料和生化指标水平，以及rs893006的等位基因和基因型分布情况、不同基因型个体的血尿酸水平及分析高尿酸血症的影响因素。结果 高尿酸血症组与对照组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)差异无统计学意义(P＞0.05)，体质指数(BMI)、肌酐(Crea)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)差异有统计学意义(P＜0.05)；高尿酸血症组患者的rs893006的GG型、GT型、TT型频率分别为53.0%、40.0%、7.0%，对照组分别为55.0%、35.0%、10.0%，两组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；两组TT型个体的尿酸水平比较差异有统计学意义(P＜0.05)，GG型、GT型个体的尿酸水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)；Logistic回归分析结果显示，BMI、Crea、TG、LDL可能为高尿酸血症的影响因素(P＜0.05)。结论 海南汉族男性高尿酸血症与URAT1基因rs893006多态性显著相关，BMI、TG、Crea、LDL可能为高尿酸血症的影响因素。

男性；高尿酸血症；URAT1基因多态性；rs893006；相关性

近年来，大量流行病学调查结果均显示，高尿酸血症和痛风的患病率日益提升，同时，高血压、糖尿病等均与血尿酸水平升高具有极为密切的关系，高尿酸血症和痛风已经对人类健康造成了严重威胁[1-3]。本研究对我院近年来收治的高尿酸血症男性患者的临床资料进行了回顾性分析，探讨海南汉族男性高尿酸血症与人尿酸盐转运子URAT1基因rs893006多态性的相关性，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取海南医学院第一附属医院2016年4月至2017年4月收治的100例高尿酸血症男性患者作为高尿酸血症组。纳入标准：所有患者均符合美国风湿病学会制定的高尿酸血症的诊断标准[4]。排除标准：血肌酐大于130 μmol/L者；肝肾功能不全、血液疾病、甲亢、恶性肿瘤和各种放化疗者；白血病、甲低及尿崩症等尿酸值继发性升高者；近期服用影响尿酸水平药物者，如服用呋塞米、吡嗪酰胺和乙胺丁醇等；痛风患者。另选取同期在我院体检的100例健康男性作为对照组。

1.2 方法

1.2.1 标本采集和测定 收集体格测量指标包括身高、体质量、血压；采集两组受检者的空腹静脉血，应用西门子ADVIA 2400生化分析仪检测其尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、血尿酸(SUA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)水平。男性高尿酸血症的诊断标准为血清尿酸水平在420 μmol/L以上。

1.2.2 外周血基因组DNA提取 收集各样本EDTA抗凝血2 mL，使用Ezup柱式血液基因组DNA抽取试剂盒，按照说明书提取DNA，使用紫外分光光度计检测浓度，选取OD260/280值在1.6～1.8范围的样本。

1.2.3 引物设计与合成 根据文献报道rs893006位点引物[5-6]，由上海生工生物工程技术服务有限公司完成引物合成。序列具体见表1。

表1 PCR反应引物及非标记探针序列

1.2.4 不对称PCR扩增及高分辨率溶解分析 不对称PCR扩增在Piko Real 96 Real-time PCR仪(美国Thermo公司)进行。采用Precision melt supermix试剂盒(日本Bio-rad公司)，总体积为10 μL，反应体系：3.9 μL ddH2O，2×Precision melt supermix 5 μL 、0.5 μL DNA样本(10 ng)、上游引物(1 μmol/L)0.2 μL，下游引物(10 μmol/L)0.2 μL，非标记探针(10 μmol/L)0.2 μL，扩增反应条件为95℃预变性2 min，95℃ 30s，58℃30s、72℃ 30s，60个循环，72℃延伸5 min，最后在55℃～75℃下进行高分辨率熔解分析。

1.2.5 测序分析 采用普通PCR方法分别随机选取GG，GT及TT基因型DNA样本各5例进行PCR扩增，并将PCR产物送去测序分析。反应体系如下：2×Taq Mastermix 10 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物(10 μmol/L)1 μL，DNA样本(30 ng/μL)2 μL，ddH2O 6μL。 扩增反应程序如下：95℃ 2 min；95℃30s，58℃ 30s、72℃ 30s，30个循环，72℃延伸10 min，16℃ 10 min。

1.3 统计学方法 应用SPSS21.0统计学软件进行数据分析，计量资料呈正态分布，以均数±标准差((±s))表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，采用Logistic回归分析高尿酸血症的影响因素，均以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组受检者的一般资料和生化指标比较 高尿酸血症组患者的年龄22～79岁，平均(53.3±8.4)岁。对照组受检者年龄23～79岁，平均(54.1±8.3)岁。两组受检者的年龄、SBP、DBP、BUN、HDL比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，但在BMI、Crea、TC、TG、LDL方面，两组受检者比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 高尿酸血症组与对照组的一般资料比较(±s)

表2 高尿酸血症组与对照组的一般资料比较(±s)

指标 高尿酸血症组(n=100)对照组(n=100)t值P值BMI(kg/m2)SBP(mmHg)DBP(mmHg)BUN(mmol/L)Crea(μmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)22.3±1.8 121.10±15.00 79.40±10.12 4.91±1.23 92.86±13.35 5.14±1.06 1.72±1.15 1.39±0.32 2.99±0.83 23.2±1.6 118.05±14.95 78.45±10.05 4.70±1.11 81.65±16.11 4.30±1.22 0.91±0.36 1.41±0.18 2.37±0.47 4.91 1.638 1.533 1.19 5.249 5.09 6.59-0.51 6.26＜0.05 0.51 0.53 0.72＜0.05 0.049＜0.05 0.612＜0.001

2.2 两组受检者的rs893006的等位基因和基因型分布比较 两组受检者的rs893006的GG型、GT型、TT型频率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 两组受检者的rs893006的等位基因和基因型分布比较[例(%)]

2.3 两组受检者不同基因型个体的血尿酸水平比较 两组受检者的TT型个体的尿酸水平比较差异有统计学意义(P＜0.05)，而GG型、GT型个体的尿酸水平比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。高尿酸血症组患者的GG型、GT型个体的尿酸水平均明显高于TT型，而GG型个体的尿酸水平又明显高于GT型，差异均有统计学意义(P＜0.05)；对照组受检者的GG型、GT型、TT型个体的尿酸水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4 两组受检者中不同基因型血尿酸水平比较(±s，μmol/L)

表4 两组受检者中不同基因型血尿酸水平比较(±s，μmol/L)

注：与GT型比较，aP＜0.05；与TT型比较，bP＜0.05。

组别 例数GG型GT型TT型高尿酸血症组对照组t值P值100 100 471.47±49.64ab 339.55±54.76 13.17 0.4 488.74±68.18b 303.08±65.40 11.282 0.904 385.27±24.00a 296.33±51.83 4.899 0.017

2.4 高尿酸血症相关影响因素 以是否患高尿酸血症(1=患病；0=不患病)为因变量，分别将基因型(哑变量形式)、BMI、SBP、DBP、Crea、BUN、TG、TC、HDL、LDL引入模型，采用Logistic回归分析，变量赋值见表。结果显示：BMI、Crea、TG、LDL(P＜0.05)，进入模型，见表5。

表5 高尿酸血症危险因素分析

3 讨论

相关医学研究证实，在原发性高尿酸血症和高尿酸血症的发生中，遗传因素发挥着极为重要的作用[5-7]。近年来，相关医学研究结果表明，血清尿酸水平升高及高尿酸血症和人尿酸盐转运子1(URAT1)的基因多态性具有相关性。URAT1基因在11q13上分布，有外显子10个、碱基2 642个，由位于第11号染色体短臂上的SLC22A12基因编码，SLC22A12基因序列的突变会使肾脏对尿酸重新收减少，URAT1功能会在其基因突变的情况下发生缺陷，进而会促进肾性无症状性低尿酸血症的发生[8]。Enomoto，Ichida等研究表明，编码hURAT1的SLC22A12基因SNP位点多态性可导致其转运尿酸的功能异常，尿酸排泄减少，从而引起高尿酸血症[9]。近年来，相关医学学者发现，血清尿酸水平与URAT1突变谱及SNP位点具有相关性[10-12]。因此，将一种对URAT1突变进行快速检测的方法建立起来极为必要和重要。

rs893006SNP位点是SLC22A12基因上的第4号内含子，相关研究显示rs893006GG基因型，错义突变C426T，C258T以及-788T＞A，都可能与血尿酸水平升高有关[13]。Guan等[14]研究表明rs893006位点的多态性可能是中国男性高尿酸血症患者的风险基因。

本研究重点探讨rs893006位点与海南汉族男性高尿酸血症的相关性。结果表明，高尿酸血症患者rs893006位点的GG型、TT型、GT型频率差异无统计学意义，此结果与相关文献[15]结果不同，可能是由于基因易感性存在地区、种族、民族差异所致，或者是由于样本量的差异所致。

高尿酸血症组的体质指数BMI、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇的指标均值都高于对照组，并且差异有统计学意义。多因素条件Logistic分析显示，体质指数BMI、肌酐、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇是高尿酸的影响因素。体重超标多有内分泌功能紊乱、雄激素和促肾上腺皮质激素水平低下或酮酸生成增加，可抑制尿酸排泄，日常摄入高蛋白、高嘌呤食物过多，嘌呤生成增多，可导致血尿酸生成增加。高尿酸血症的患者常伴有血脂异常[16]，载脂蛋白E2可介导肾脏对尿酸的分泌减少，甘油三酯是高尿酸血症的危险因素。肌酐是监测肾脏功能的指标，因此血肌酐是高尿酸血症的危险因素。

综上所述，海南汉族男性高尿酸血症和URAT1基因多态性显著相关，值得临床充分重视。

[1]张新军.高尿酸血症的发病机制与分型诊断[J].中国心血管杂志,2010,15(6):418.

[2]胡大一,丁荣晶.无症状高尿酸血症合并心血管疾病诊治建议中国专家共识[J].中国全科医学,2010,13(11):1145-1149.

[3]石海燕,马臻,董砚虑.痛风和高尿酸血症的危险因素[J].国外医学内科学分册,2003,30(5):211-213.

[4]石海燕,董砚虎,南海荣,等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T突变与高尿酸血症的相关性研究[J].中国糖尿病杂志,2006,14(3):178-181.

[5]Guan M,Zhang J,Chen Y,et al.High-resolution melting analysis for the rapid detection of an intronic single nucleotide polymorphism in SLC22A12 in male patients with primary gout in Chin a[J].Scand J Rheumatol,2009,38:276-281.

[6]王瑛,施雪莺,高泳.男性高尿酸血症与URAT1基因多态性的关系[J].检验医学,2012,27(01):30-33.

[7]王燕,赵新新,康闪,等.TLR4基因Asp299Gly多态性与消化系统肿瘤关系Meta分析[J].齐鲁医学杂志,2013,28(5):377-380.

[8]赵勇,王洪杰,曾和松.瘦素基因启动子22548多态性与冠心病的关系[J].临床内科杂志,2006,23(7):489-491.

[9]Wang H,Wang L,Xie R,et al.Association of serum uric acid with body mass index:a cross-sectional study from Jiangsu Province,China[J].Iranian Journal of Public Health,2014,43(11):1503-1509.

[10]钟毓瑜,欧阳欣,朱瑞清,等.男性血尿酸水平与心血管疾病危险因素的关系[J].海南医学,2006,17(8):21-22.

[11]吴炜戎,郭阶明,杨薇,等.广州市1482例体检人员痛风和高尿酸血症患病现状的调查[J].海南医学,2007,18(9):110-112.

[12]韦贵鹏,李亮.高分辨率熔解曲线法的非标记探针基因分型技术[J].生命的化学,2010,30(2):314-317.

[13]任贵生,胡伟新.肾脏调节排泄的分子机制[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2014,23(5):467-471.

[14]Guan M,Zhang J,Chen Y,et al.High-resolution melting analysis for the rapid detection of an intronic single nucleotide polymorphism in SLC22A12 in male patients with primary gout in China[J].Scand J Rheumatol,2009,38:276-281.

[15]Yu S,Yang HM,Guo XF,et al.Prevalence of hyperuricemia and its correlates in rural Northeast Chinese population:from lifestyle risk factors to metabolic comorbidities[J].Clinical Rheumatology,2016,35(5):1207-1215.

[16]李东晓,迟家敏.高尿酸血症与代谢综合征[J].国外医学:内分泌学分册,2004,24(6):386-388.

Correlation between URAT1 gene rs893006 polymorphism and hyperuricemia in men.

LU Na1,XIU Hao2,CUI Kai-mei2,SANG Sheng-gang2,YU Ping1.1.Department of Immunology,School of Basic Medical Sciences,Central South University,Changsha 410013,Hunan,CHINA;2.School of Tropical Medicine and Laboratory Medicine,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To analyze the correlation between hyperuricemia of male Han People in Hainan and human urate transporterURAT1gene rs893006 polymorphism,and analyze the influential factors of hyperuricemia.Methods The clinical data of 100 male patients with hyperuricemia in First Affiliated Hospital of Hainan Midical University from April 2016 to April 2017 were statistically analyzed.These patients were regarded as hyperuricemia group,another 100 healthy men

physical examination in the hospital during the same period were selected as control group.The individual general data,biochemical indexes levels,rs893006 allele and genotype distributions,blood uric acid levels of different genotype were compared between the two groups.The influential factors were statistically analyzed.Results There were no statistical differences in systolic blood pressure(SBP),diastolic blood pressure(DBP),blood urea nitrogen(BUN)and high-density lipoprotein cholesterol(HDL)between the control group and the hyperuricemia group(P＞0.05),while body mass index(BMI),creatinine(Crea),total cholesterol(TC),triglyceride(TG)and low-density lipoprotein cholesterol(LDL)were significantly different between the two groups(P＜0.05).The frequency of rs893006 GG type,GT type,TT type were 53.0%(53/100),40.0%(40/100),7.0%(7/100)in hyperuricemia group versus 55.0%(55/100),35.0%(35/100),10.0%(10/100)in the control group(P＞0.05).The uric acid level of GG type,GT type individual showed no significant difference between the two groups(P＞0.05),but the difference in the level of TT type individual were statistically significant(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that BMI,Crea,TG,LDL may be influential factors of hyperuricemia(P＜0.05).Conclusion Hyperuricemia of male Han People in Hainan is associated withURAT1gene rs893006 polymorphism.The influential factors of hyperuricemia may include BMI,TG,Crea,LDL.

Men;Hyperuricemia;URAT1 gene polymorphism;rs893006;Correlation

R589.6

A

1003—6350（2017）21—3460—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.21.007

余平。E-mail：yuping1953@sina.com

2017-09-06)