竹叶参中多糖的提取

刘廷刚 ，张泽俊 ，李启彭 ，师 睿 ，毛艳红

（1.江西省武警总队，江西 南昌 330000； 2.昭通学院化学与生命科学学院，云南 昭通 657000）

竹叶参中多糖的提取

刘廷刚1，张泽俊2，李启彭2，师 睿2，毛艳红2

（1.江西省武警总队，江西 南昌 330000； 2.昭通学院化学与生命科学学院，云南 昭通 657000）

采用水提醇沉法提取昭通竹叶参中的多糖，利用sevage法除去蛋白质，多糖提取率2.16 %，用DEAE-52纤维素柱纯化多糖，得少量多糖精品.

竹叶参； 多糖 ； 提取

图1.竹叶参实物图片

多糖是自然界中天然大分子它由醛糖或者是酮糖通过糖苷键连接而成，广泛分布存在于自然界，不仅可以从动物植物体内提取还可以从真菌、藻类、细菌等提取.它在生命活动中扮演着很重要的角色，为生物体提供能量，还具有生理活性，被认为是构成生命的四大基本物质之一，还应用于临床医学，食品安全及外观，抑制脂质氧化，稳定酸性饮料[1].多糖的提取方法[2]有：水提醇沉法，利用的多糖的水溶解性；超声提取，利用超声波的作用使原料细胞破碎利于多糖的溶出；酸碱提取，利用酸碱使细胞膨胀破裂从而使多糖游离出来；微波辅助提取法，通过微波加热提取加快多糖的溶出.本实验采用水提醇沉法提取竹叶参中的多糖.

1 原材料、试剂与仪器

1.1 原材料

竹叶参，实验组从昭通市昭阳区永丰镇一山沟里挖取，去除叶子， 留竹叶参根部，洗净，阴干备用.

1.2 试剂

氯化钠（AR，中国医药公司北京采购站）；石油醚（AR，天津市风船化学试剂科技有限公司）；无水乙醇（AR，西陇化工股份有限公司）；丙酮、正丁醇（AR，天津市光复科技发展有限公司）；三氯甲烷（AR，重庆川东化工（集团）有限公司）；苯酚（AR，成都化学试剂厂）；无水醋酸酐、乙酸酐（AR，洛阳市化学试剂厂）

1.3 仪器

HH-S26s 数显恒温水浴锅、电热恒温培养箱（上海—恒科技仪器有限公司）；SC-04 低速离心机（安徽中科中佳科技仪器有限公司）；DEAE纤维素/DE-52（AS#9013-34-7 粒径:50μm，上海源叶生物有限公司）；40目标准筛（浙江上虞市道墟五四仪器厂）；721分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）

2 提取方法与步骤

2.1 竹叶参多糖粗品的制备

称取经干燥粉碎的竹叶参4.5633 g（过40目筛子），于100 mL烧杯中加入3倍体积的80 %乙醇，将烧杯置于80 ℃水浴锅中加热提取1 h，其间不断用玻璃棒搅拌，趁热过滤，收集滤渣，再加入三倍体积的乙醇溶液再进行水浴加热重复做四次后收集滤渣，将滤渣放入烧杯中加入4倍体积的蒸馏水，把烧杯放在95 ℃水浴提取2 h（其间不断用玻璃棒搅拌），然后过滤，重复以上步骤四次合并滤液.将收集到的滤液进行浓缩（置于60 ℃水浴），将滤液浓缩到一定量加入2倍体积95 %的乙醇，静置60 min，让多糖析出，缓慢倒去上层清液（乙醇溶液），把烧杯中溶液倒入离心管中进行离心（3500转/min离心4 min ），把上清夜去除合并离心剩下的沉淀[6]，用量筒量取石油醚与丙酮按1:1比例混合，向烧杯中加入5倍石油醚与丙酮混合溶液.然后将烧杯放在60℃水浴锅中加热40 min（不断用玻璃棒搅拌），冷却并进行离心（3500转/min离心4 min ）合并沉淀，将沉淀放在85℃恒温烘箱中烘干后取出冷却到室温就得到了灰色的竹叶参多糖粗品.

2.2 粗多糖脱蛋白

将上述烘干的灰色竹叶参粗多糖加入10 mL蒸馏水充分溶解（溶解过程中缓慢，可置于60℃水浴加热使其完全溶解）用sevage法[3-4]（氯仿：正丁醇=5:1）除去蛋白质，加入sevage试剂，然后将所有的混合液倒入离心管中进行离心3min，取出此时离心管中溶液分为三层最上层为澄清液体其次为乳白色固体（蛋白质）最下层为有机层，重复上述操作直至离心管中没有乳白色固体产生停止操作.合并上述清夜，在向清夜中中加入4倍体积95%的乙醇溶液，放在室温中静置60 min使多糖尽可能的充分析出，在用离心机离心分离多糖和有机试剂倒去有机试剂合并多糖，将合并的多糖放入50 ℃恒温烘箱中烘干，取出冷却到室温待用.

2.3 DEAE-52纤维素处理

取一定量纤维素放入烧杯中用蒸馏水中浸泡2小时，然后用蒸馏水调节pH置中性，加入一定量0.5 mol/L的盐酸浸泡1小时，反复用蒸馏水调至中性，然后在加入一定量0.5 mol/L的氢氧化钠溶液浸泡1小时，再用蒸馏水调节pH至中性，装柱备用.

2.4 多糖精品的制备

将经过脱蛋白的多糖放入烧杯中加20 mL蒸馏水溶解将烧杯放入60 ℃水浴加快溶解其间用玻璃棒搅拌，冷却到室温将溶液倒入DEAE-52纤维素柱中，用离心管接用蒸馏水洗脱3 mL每管，用苯酚－硫酸法检测（苯酚0.025 g溶解在16 mol/L的硫酸溶液中，加7滴待测溶液），待溶液冷却到室温在用721分光光度计在490 nm测出分光光度值，统计数据并作出曲线图，在收集独立峰值最大处的试液.合并之后干燥，得竹叶参多糖精品.

3 结果与讨论

本实验采用水提醇沉法提取竹叶参根中的多糖，粗多糖经除蛋白，得较纯的竹叶参多糖0.0985 g，提取率2.16 %，再经纤维素柱处理得到少量的竹叶参多糖精品.该实验得到的叶参多糖精品量较少，本实验组将进一步优化条件，进一步提高多糖的产率.

[1]严成，严夏．枸杞多糖提取工艺比较及体外抗氧化性研究[J]．食品科学，29 (7) :183-185．[2]宋艳雨，杨镇，马晓颖，等．植物生菌醇沉多糖对玉米盐作用的处探[J]．辽宁农业科学，2014 (03) :32-33．

[3]尹艳，高文宏，于淑娟．多糖提取技术的研究进展[J]．食品工业科技，2007 (2) ：248-250．

[4]鲁瑞娟．植物多糖的提取和分析方法[J]．天津药学，2015 ，27 (2) :67-69．

Extraction of Polysaccharides in Bamboo Leaf Ginseng

LIU Ting-gang1，ZHANG Ze-jun2，LI Qi-peng2，SHI Rui2，MAO Yan-hong2，
（1.The Chinese Armed Police Force of Jiangxi, Nanchang 330000，China；2.School of chemistry and life science,Zhaotong University, Zhaotong 657000, China）

The polysaccharides were extracted from Bamboo Leaf Ginseng by water-extraction and alcohol-precipitation method.It’s extracted rate was 2.16% that removed proteins employing with sevage reagents.The polysaccharides were purified from DEAE-52 cellulose column, and a small amount of polysaccharides were obtained.

Bamboo leaf ginseng; Polysaccharides； Extraction

R284.2

A

2095-7408（2017）05-0051-02

2017-09-18

云南省应用基础研究计划项目青年项目(2013FD057和2016FD083)；云南省教育厅科学研究基金资助性项目(2016ZZX229)和云南省高等学校昭通高原特色农产品工程研究中心项目资助.

刘廷刚（1993— ），男，云南文山人，学士，主要从事化学分析研究.

张泽俊（1983— ），男，云南昭通人，讲师，硕士，主要从事中药材活性成分的提取和分析研究.竹叶参（Bamboo Leaf Ginseng）（见下图）是万寿竹的根和颈（Root and Rhizome of Canton Fairybells），属于百合科植物.叶片交叉生长并且很薄，长50-100毫米，宽10-15毫米，最终呈现披针形.上端短尖，基部却圆，叶柄短.花型呈现伞型顶生与叶对生，花一般有2-4朵，最为罕见的5-7朵；花柄比较短，花自然下垂颜色是白色或淡紫色，基部有距；雄蕊有6；子房3室，花期为夏季.生长在温度适宜的山坡草丛及林下.竹叶参是一味中草药具有很多的药理作用，其在药品领域有着很大的应用前景，故研究竹叶参中的多糖有很大的意义.