高效液相色谱法同时测定鸡尾酒中7种合成色素

□ 周欣蕊 金昱言 赵 洋 王 婷 吉林省食品检验所；吉林省安信食品技术服务有限责任公司

人工合成色素用于食品着色，可以使食品色彩鲜艳、着色能力强，要比天然色素稳定，但人工合成色素的安全问题备受关注[1]。目前，检测合成色素的方法有气相色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法、离子色谱法、薄层色谱法、毛细管电泳法、离子选择电极法、光度法、极谱法、伏安法等。多组分混合色素的分析，薄层色谱操作比较繁琐[2]；色谱-质谱联用法灵敏度和分辨率都很高，但是仪器昂贵；极谱法易受到干扰，很难定性；光度法需要化学计量学的方法，数据处理较繁琐；毛细管电泳法的重现性很差[3]。所以本次实验采用高效液相色谱法进行混合色素的测定。

如今市场上新兴一类鸡尾酒，就是利用五彩斑斓的颜色吸引了广大消费者的眼球，这种颜色的产生正是因为添加了人工合成色素[4]。为了保障食品的安全，我国现行有效标准GB 2760-2014《食品安全果酒标准 食品添加剂使用标准》，规范着食品添加剂的使用。其中在鸡尾酒中对于柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红、亮蓝、赤藓红、苋菜红的使用提出了限值[5]。本次实验利用高效液相色谱技术根据GB 5009.35-2016《食品安全果酒标准 食品中合成着色剂的测定》测定鸡尾酒中的柠檬黄、日落黄、胭脂红、亮蓝、赤藓红，根据行业标准SN/T 1743-2006《食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测高效液相色谱法》测定鸡尾酒中的诱惑红。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

甲 醇，MS 1922-001； 乙 酸 铵，分析纯，国药集化学试剂有限公司生产，10001218； 柠 檬 黄，0.5 mg/mL，GBW(E)100001a；苋菜红，0.5 mg/mL，GBW(E)100002a；胭脂红，0.5 mg/mL，GBW(E)100004a；赤藓红，100 μg/mL，GBW(E)100191； 亮 蓝，0.5 mg/mL，GBW(E)100005a；日落黄，0.5 mg/mL，GBW(E)100003a，中国计量科学研究院出产；诱惑红，1.0 mg/mL，GBW(E)100164为北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司出产；超纯水。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪，SHIMADZU，LC-20AT；电子天平，AB204-N；超纯水制备系统，Milli-Q，德国默克密理博公司；色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm×5 μm）。

1.3 标准溶液配制

将柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、诱惑红、赤藓红标准物质溶液按照一定的比例，用超纯水稀释混合得到质量浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的混合标准工作溶液，置于4 ℃冰箱保存。

1.4 样品制备

选用的样品均为市售的鸡尾酒：1#朗姆预调酒-荔枝味；2#威士忌预调酒-蓝玫瑰味；3#伏特加预调酒-蓝莓味；4#威士忌预调酒-芒果味；5#白兰地预调酒-水蜜桃味；6#白兰地预调酒-草莓味。

制备方法：称取15.00 g样品置于50.0 mL比色管中，直接定容至50 mL涡旋混匀，过0.45 μm水膜，备用，上机。和很多前处理方法相比较，省去了很多繁琐的过程，但是仍保留了实验的精准性。

2 实验结果与讨论

2.1 液相色谱条件选择

2.1.1 检测波长

利用二极管阵列检测器采集柠檬黄、胭脂红、苋菜红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红7种合成色素在190～800 nm的光谱图，将其最大吸收波长作为检测波长：柠檬黄424 nm、胭脂红508 nm、苋菜红530 nm、日落黄484 nm、诱惑红510 nm、亮蓝610 nm、赤藓红530 nm。

2.1.2 梯度洗脱条件

实验过程中柱温为35 ℃，进样量为10 μL，0.02 mol/L乙酸铵溶液加入5%甲醇+甲醇作为流动相，根据实验对7种色素的分离情况，最终确定了梯度洗脱的方式。梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件

在最佳色谱条件下，对0.01 mg/mL的标准样品进行分析，其色谱图见图1。

2.2 实验线性关系及检出限

在实验条件下，对7种色素的标准系列混合溶液进行检测，绘制标准曲线，线性范围：1～50 μg/mL，得到对应的线性回归方程，按3倍的信噪比计算出7种色素的检出限，各色素的保留时间、线性回归方程、线性相关系数R2以及检出限见表2。

2.3 实验回收率及精密度测定

选用样品1#进行加标回收测定，称取3份，添加7种色素，添加浓度分别是1、3、5 mg/kg，按照样品制备方法处理后，进样测定，结果见表3。从表3中可以看出，样品加标后的回收率为96.7%～103.3%，相对标准偏差RSD值为0.61%～1.65%。加标浓度为5 mg/kg的1#荔枝味鸡尾酒样品色谱图如图2所示。

表3 7种合成色素的加标回收率和精密度

2.4 实际样品的测定

对市售的不同品牌、不同味道的6份鸡尾酒样品进行了测定，根据各色素峰保留时间以及光谱图进行定性，外标法峰面积定量分析。其中有5份鸡尾酒有不同的色素检出，日落黄和赤藓红没有检出。根据国家标准[6]配制酒中合成色素限量值：柠檬黄≤0.1 g/kg、苋菜红≤0.05 g/kg、胭脂红≤0.05 g/kg、日落黄≤0.1 g/kg、诱惑红≤0.05 g/kg、亮蓝≤0.025 g/kg、赤藓红≤0.05 g/kg。该6种不同品牌的鸡尾酒均符合国家规定，属于合格产品。具体检出值见表4。

3 结论

本文建立了鸡尾酒中柠檬黄、胭脂红、苋菜红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红7种合成色素的高效液相色谱测定方法。该方法样品前处理简单，在28 min内可以同时分析出7种色素，且检出限为0.05～0.1 μg/mL，在1.0～50 μg/mL 范围内线性良好，相关系数R2均大于0.999 88，回收率为96.7%～103.3%，RSD为0.61%～1.65%。从上述结果可知，该方法简便、快速、经济高效、有良好的重现性，由此可用于测定鸡尾酒中合成的色素。

图1 7种色素标准品色谱图

表2 7种色素保留时间、线性方程、相关系数和检出限

图2 加标后1#荔枝味鸡尾酒样品色谱图

表4 鸡尾酒样品中色素含量（g/kg）

[1]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会. GB/T 5009.29-2016食品中梨酸、苯甲酸的测定[S].北京：中国标准出版社,2016.

[2]沈坚,傅晓,潘旭,等.高效液相色谱法测定动物性食品中合成色素[J].理化检验-化学分册,2011(2)：139-143.

[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T 5009.28-2016 食品中糖精钠的测定[S].北京：中国标准出版社,2016.

[5]赵丽.偏最小二乘法-分光光度法同时检测6种合成色素的研究[J].福建分析测试,2015(5)：13-17.

[6]张玉萍.食品中合成色素的应用及其检测技术研究进展[J].农产品质量与安全,2013(5)：44-47.