黄芪复方中草药饲料添加剂对东北黑脚麻鸡免疫功能的影响

金 东 春

(延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

东北黑脚麻鸡以“三高一低”，即可食部、氨基酸及维生素含量高，胆固醇含量低微而深受欢迎，尤其东北黑脚麻鸡对东北气候环境适应性强,抗病力强，死亡率低，同时，因其肉质嫩滑、皮爽、骨软、鲜嫩味美，风味独特而广受欢迎。但近年来，在抗生素和化学药物等饲料添加剂所造成的畜禽产品的负面影响，人们对畜禽产品品质的要求越来越苛刻。消费者不但追求无污染、无残留、无副作用，能增强机体免疫力，安全可靠、营养丰富的无公害绿色食品，而且更关注纯天然饲料饲养的禽类产品。近年来，国内许多学者对中草药添加剂进行了大量的研究，发现中草药添加剂不但能够增强畜禽的免疫器官，而且对提高机体免疫力有一定作用。因为天然中草药具有天然性、多靶点、多功能性、毒副作用小、无环境污染、无残留、无副作用，又能增强机体免疫力等特点，已成为国内外研究饲料添加剂的研究热点。

黄芪(Radix Astragali)是多年生草本植物，特别是东北黄芪具有喜冷凉，耐寒性强，含有甙类、多糖、氨基酸及微量元素等多种有效成分，其中多糖含量较多。它不仅可以影响免疫器官的重量，而且促进免疫细胞的增值分化，提高机体的体液免疫功能，促进抗体的生成。黄芪多糖是黄芪的天然活性成分，能促进机体非特异性和特异性免疫，增强机体免疫功能。现代医学研究表明，黄芪成分中的黄芪多糖具有增强机体免疫功能作用，目前黄芪多糖的研究主要集中在提高免疫器官指数[1-3]、增强免疫功能[4-9]、增加机体血清淋巴细胞百分数、刺激淋巴细胞增殖影响免疫细胞信息传导方面[10-15]及增加红细胞分化成熟方面的研究[16]。

本试验以东北黑脚麻鸡为研究对象，通过在基础日粮中添加不同浓度的黄芪复方中草药饲料添加剂，观察对东北黑脚麻鸡的血液生理生化指标和免疫器官的影响，证实黄芪复方中草药饲料添加剂对东北黑脚麻鸡的血液生理生化指标和免疫器官有影响效果,为今后黄芪复方中草药饲料添加剂的开发研究提供理论依据和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

1) 鸡饲养研究日粮组成 鸡试验饲料是参照NRC(1994)，设计日粮和肉鸡饲养标准和鸡饲养标准(2004版)[17]，并结合我国实际情况，执行饲养配制，日粮配方及各组日粮营养水平(表1、2)。

2) 复方中药配方 黄芪复方中草药由黄芪、东北人参茎、党参、VA、VE等组成。

表1对照组基础日粮组成

Table1Thebasaldietcompositionofthecontrolgroup(%)

组成成分日龄1～2122～4243～60玉米68．0068．0070．00豆粕21．0021．0021．00玉米麸6．707．005．00大豆油1．501．201．20柠檬酸钠0．500．500．50碳酸钙1．001．001．00碳酸氢钙0．100．100．10DL蛋氨酸(40%)1．001．001．00矿物质添加剂0．100．100．10维他命添加剂0．100．100．10总量100．00100．00100．00

表2 对照组基础日粮营养水平

1.2 方法

1.2.1 试验设计

共设4个试验组，即3个试验组和1个对照组。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加1%、3%和6%的黄芪复方中草药添加剂，试验期分别为40和60 d。

1.2.2 饲喂方法

试验选用健康1 d东北黑脚麻鸡仔，将体重相近的120羽分为4组，每组30羽，饲养60 d对照组饲喂基础日粮，试验组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)为实验组饲喂基础饲料加复方中药添加剂，采用舍内笼养，自由采食、饮水。

1.2.3 各组免疫器官指数测定

饲养60 d后，每组30羽东北黑脚麻鸡中挑出体重相近的3羽。空腹8 h后，在鸡翅下静脉采新鲜血液，脱臼致死，解剖剥离并摘取胸腺、脾脏和法氏囊，用滤纸拭去表面污血，称重/mg。

免疫器官指数的计算公式如下:

脾脏系数=[脾脏鲜重(mg)/活体重(g)]×10;

胸腺系数=[胸腺鲜重(mg)/活体重(g)]×10;

法氏囊系数=[法氏囊鲜重(mg)/活体重(g)]×10。

1.2.4 血液生化指标的测定

分别在养殖40和60 d的东北黑脚麻鸡各试验组中选取3羽体重相近的健康东北黑脚麻鸡，空腹6 h后鸡翅下静脉真空管采血，用全自动血液分析仪进行测定。

1.2.5 血清中免疫球蛋白测定

分别在养殖40和60 d的东北黑腿麻鸡中选取2羽体重相近的健康东北黑脚麻鸡，空腹6 h后鸡翅下静脉采血，3 000 r/min离心10 min,分离血清，采用酶联免疫技术测定,使用鸡免疫球蛋白试剂盒(上海钰博生物科技有限公司)，按照说明书要求进行测定。

1.2.6 数据处理与分析

统计学分析结果数据采用SPSS13.0统计分析软件处理，2组间比较用t检验，以P<0.05,判断为差异显著。

2 结果与分析

2.1 免疫器官指数的检测结果

对东北黑脚麻鸡脾脏指数检测结果如表3所示。试验Ⅰ组(40 d,15.00%)和试验Ⅰ组(60 d,17.47%)的胸腺指数明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05)；试验Ⅱ组(40 d,33.84%)和试验Ⅱ组(60 d,36.47%)的胸腺指数明显高于对照组,有极显著性差异(P<0.01)；试验Ⅲ组(40 d,39.09%)和试验Ⅲ组(60 d,46.47%)的胸腺指数明显高于对照组,有极显著性差异(P<0.01)。说明3%和6%黄芪复方中草药饲料添加剂对提高东北黑脚麻鸡胸腺指数有影响。

表3东北麻鸡免疫器官指数的影响

Table3TheeffectontheimmuneorgansoftheNortheastHeijiaoMAchicken

饲喂后天数/d项目指数对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组40胸腺指数2．66±0．173．06±0．20b3．56±0．67a3．70±0．17a60胸腺指数2．69±0．113．16±0．20b3．66±0．37a3．94±0．24a40脾脏指数1．16±0．441．24±0．101．36±0．37b1．72±0．27a60脾脏指数1．34±0．171．26±0．201．46±0．671．62±0．15b40法氏囊指数1．03±0．421．06±0．471．13±0．14b1．17±0．34a60法氏囊指数0．93±0．421．03±0．121．09±0．221．13±0．42a

注：组间t检验，同一行与对照组比较，b有显著性差异P<0.05；a有极显著性差异P<0.01,下同。

由表3可知，试验Ⅰ组(40 d,6.89%)和试验Ⅰ组(60 d,1.34%)的脾脏指数与对照组之间没有显著性差异；试验Ⅱ组(40 d,17.24%)脾脏指数与对照组之间有显著性差异(P<0.01)，试验Ⅲ组(40 d,48.28%)脾脏指数明显高于对照组，有极显著性差异(P<0.01)，而试验Ⅲ组(60 d,20.09%)的脾脏指数明显高于对照组，有显著性差异(P<0.01)。说明6%黄芪复方中草药饲料添加剂对提高60 d东北黑脚麻鸡脾脏指数有影响。

由表3可知，试验Ⅰ组(40 d,13.00%)和试验Ⅰ组(60,8.00%)的法氏囊指数与对照组之间有显著性差异；试验Ⅱ组(40 d,8.00%)的法氏囊指数与对照组之间没有显著性差异，而试验Ⅱ组(60 d,26%)的法氏囊指数与对照组有极显著性差异(P<0.01)；试验Ⅲ组(40 d,18.5%)和试验Ⅲ组(60 d,18.3%)的法氏囊指数与对照组比较，有极显著性差异(P<0.01)。说明6%黄芪复方中草药饲料添加剂明显延长60 d东北黑脚麻鸡法氏囊萎缩时间。

2.2 东北黑脚麻鸡血象指标测定

红细胞检测结果表明(表4)，第40天时，试验Ⅱ组(24.19%)与对照组相比有显著性差异(P<0.01)；第60天时，试验Ⅱ组(13.41%)与对照组相比有显著差异(P<0.05)。说明3%黄芪复方中草药饲料添加剂明显提高40和60 d红细胞数值。

白细胞检测结果表明(表4)，第40天时，试验Ⅱ组(13.65%)与对照组比较差异显著(P<0.05)，试验Ⅲ组(33.90%)与对照组比较差异极显著(P<0.01)；第60天时，试验Ⅱ组(14.14%)与对照组比较差异显著(P<0.05)，试验Ⅲ组(41.97%)与对照组比较差异极显著(P<0.01)。说明6%黄芪复方中草药饲料添加剂可明显增加40和60 d的白细胞数值。

表4 对东北黑脚麻鸡红白细胞数量的影响

2.3 对东北黑脚麻鸡的白细胞数量的影响

40和60 d东北黑脚麻鸡血液中嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞检测结果表明(表5)，40和60 d试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比较无显著性差异(P>0.05)；而40和60 d淋巴细胞检测结果表明(表5)，试验Ⅲ组(7.60%,40 d)和试验Ⅲ组(8.03%,60 d)对照组比较呈显著性差异(P<0.05)。说明6%黄芪复方中草药饲料添加剂对东北黑脚麻鸡淋巴细胞有影响。

表5 对东北黑脚麻鸡的白细胞亚群数量变化影响

2.4 对东北黑脚麻鸡血清生化指标的影响

40和60 d组中总蛋白血清生化指标检测结果表明(表6)，试验Ⅱ组(40 d,15.78%)和试验Ⅱ组(60 d,16.33%)的总蛋白指数明显高于对照组，且差异显著(P<0.01)，试验Ⅲ组(40 d,19.28%)和试验Ⅲ组(60 d,20.97%)的总蛋白指数明显高于对照组，且差异显著(P<0.01)。

由表6可知，试验Ⅱ组(40 d,21.75%)和试验Ⅱ组(60 d,34.55%)的白蛋白指数明显高于对照组，且差异极显著(P<0.01)，试验Ⅲ组(40 d,35.35%)和试验Ⅲ组(60 d,44.24%)的白蛋白指数明显高于对照组，且差异极显著(P<0.01)。

由表6可知，试验Ⅱ组(60 d,14.24%)和试验Ⅲ组(60 d,19.14%)的球蛋白指数高于对照组，且差异显著(P<0.01)。

说明3%和6%黄芪复方中草药饲料添加剂可显著提高东北黑脚麻鸡总蛋白、白蛋白和球蛋白指数。

表6 对东北黑脚麻鸡血清生化指标的影响

2.5 血清中免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)含量测定结果

IgA的检测结果表明(表7)，试验Ⅱ组(40 d,19.4%)和试验Ⅱ组(60 d,20.6%)的IgA明显高于对照组，且差异显著(P<0.05)，试验Ⅲ组(40 d,34.4%)和试验Ⅲ组(60 d,50.0%)的IgA明显高于对照组,且差异极显著(P<0.01)。表明6%黄芪复方中草药饲料添加剂明显提高40和60 d组血清中IgA数值。

IgM的检测结果表明(表7)，试验Ⅱ组(40 d,28.13%)和试验Ⅱ组(60 d,43.01%)的IgM明显高于对照组，且差异极显著(P<0.01)；试验Ⅲ组(40 d,34.71%)的Ig明显高于对照组，且差异极显著(P<0.01)，试验Ⅲ组(60 d,20.0%)的IgM指数明显高于对照组，差异显著(P<0.05)。证明6%黄芪复方中草药饲料添加剂明显提高40和60 d血清中IgM数值。

IgG的检测结果表明(表7)，试验Ⅱ组(40 d,21.38%)和试验Ⅱ组(60 d,20.25.01%)的IgG指数高于对照组,且差异显著(P<0.05)；试验Ⅲ组(40 d,13.10%)和试验Ⅲ组(60 d,3.17%)的IgG有显著性差异(P<0.05)。说明6%黄芪复方中草药饲料添加剂明显提高40 d组血清中的IgG数值。

表7 对东北黑脚麻鸡血清免疫球蛋白含量的影响

3 讨论与分析

试验主要以黄芪为主，配以人参茎、党参等组成的自拟中药复方饲料添加剂，研究其对东北黑脚麻鸡免疫功能的影响,观察东北黑腿麻鸡免疫器官指数和血清生化指标。从试验结果可以看出，40 d,6%和60 d,6%的黄芪复方中药饲料添加剂可以明显提高东北黑脚麻鸡脾脏和胸腺指标，进而增强机体体液免疫功能，这与王福传等[18]对黄芪、金银花的研究结果一致。本文首次发现，60 d,6%的黄芪复方中草药添加剂可以明显延长法氏囊萎缩时间，能明显促进东北黑脚麻鸡生长期法氏囊的生长发育，这可能与添加维生素A和维生素E，提高了淋巴细胞的转换率和免疫功能的增加有关，但还有待于进一步研究。

试验中6%黄芪复方中草药饲料添加剂明显有助于提高淋巴细胞的免疫水平，说明黄芪复方中草药饲料添加剂对东北黑脚麻鸡生理机能具有促进作用。这与高微微等[14]的报道一致。3%黄芪复方中草药饲料添加剂明显提高了红细胞免疫水平，说明黄芪复方中草药饲料添加剂对东北黑脚麻鸡的生理机能具有促进作用,这与杨海燕等[19]的报道一致。

该研究也发现，基础日粮中添加3%,6%黄芪复方中草药添加剂明显提高了40和60 d东北黑脚麻鸡血清中的IgG和IgM含量，这表明3%和6%的黄芪复方添加剂可明显促进东北黑脚麻鸡生长后期免疫球蛋白的分泌，促进免疫器官生长发育，增强机体免疫细胞功能。

4 结论

6%黄芪复合中草药饲料添加剂作用效果最明显,不仅明显提高东北黑脚麻鸡胸腺免疫功能指数，免疫器官指数，也明显地延长了法氏囊萎缩时间，为今后黄芪为主方的复合中草药饲料添加剂开发研究提供理论依据。

[1] 李亚杰，赵献军.益生菌黄芪多糖胶囊制剂对肉鸡生长性能免疫器官指数及血液生化指标的影响[J].安徽农业科学，2007,35(01):345-352.

[2] 安松兰，张善玉，朴慧顺.1年生黄芪中多糖对小鼠免疫器官指数的影响[J].延边大学医学学报，2007,30(01):20-22.

[3] 靳二辉,陈耀星,周金星,等. 黄芪、枸杞、金银花等中草药复方制剂对肉鸡免疫器官发育及免疫功能的影响[J]. 畜牧兽医学报,2017,48(06):1128-1139.

[4] Li S P,Zhao X J,Wang J Y.Synergy of Astragalus polysaccharides and probiotics(Lactobacillus and Bacillus cereus)on inmunity and intestinal microbiota in chicks[J].Poult Sci，2009,88:519-525.

[5] 张训海，王德云，胡云亮，等.黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用[J].中国兽医学报，2009,29(03):312-315.

[6] 周泽伟，刘浩，王凯，等，黄芪灵芝口服液对皱鸡免疫功能的影响[J].中国兽医杂志，2016,52(08):59-61.

[7] 王旭贞，李宏全，孙杰.黄芪多糖对接种NDIV皱鸡红细胞免疫功能的影响[J].中兽医医药杂志,2011，13(04):29-33.

[8] 任敏，张晓静.黄芪多糖(APS)对断奶仔猪免疫功能的影响[J].郑州牧业工程高等专科学校学报，2006,26(01):7-9.

[9] Chen H L,Li D F,Chang B Y,et al.Effects of Chinese herbal polysaccharides on the immunity and growth performance of young broilers[J].Poult Sci,2003,82(03):364-370.

[10] 胡庭军，梁纪兰，程福胜，等.黄芪多糖对鸡脾脏淋巴细胞内游离子浓度的影响[J].中兽医医学杂志，2001(05):4-6.

[11] 聂小华,史宝军,敖宗华,等,黄芪多糖的提取及其对淋巴细胞增殖的影响[J].安徽农业大学学报，2004，31(01):34-36.

[12] 范云鹏,王德云,胡元亮,等.黄芪多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖的影响[J].南京农业大学学报,2011,34(04):95-99.

[13] 罗燕,谷新利,徐雷,等.黄芪多糖分级组分对鸡脾淋巴细胞增殖影响[J].中兽医医药杂志,2009,28(05):13-14.

[14] 高微微,曹丽,李展,等.黄芪成分对鸡外周血淋巴细胞增殖反应的影响[J].中国兽药杂志,2001(06):16-18.

[15] 聂小华,史宝军,敖宗华,等,黄芪多糖的提取及其对淋巴细胞增殖的影响[J].安徽农业大学学报，2004，31(01):34-36.

[16] 张训海，王德云，胡云亮，等.黄芪多糖对鸡体液免疫增强作用[J].中国兽医学报，2009,29(03):312-315.

[17] Ren Z,Na L,Xu Y.Dietary supplementation with lacto-wolfberry enhances the immune response and reduces pathogenesis to influenza infection in mice[J].Meydani SN J Nutr,2014;144(02):224-9.

[18] 王福传，韩一超，赵洪恩，等．复方中草药免疫增强剂对鸡免疫器官组织形态学影响的研究[J]．中国预防兽医学报，2001，23(06)：419-421．

[19] 杨海燕，张传美，汤薇,等.中药复方制剂对鸡是红细胞免疫功能影响的研究[J].辽宁畜牧兽医，2004(5):8-10.