6种古老珍稀植物对3种蔬菜病原细菌的抑制活性

余思策， 李俊凯， 刘显良， 杜晓英

(长江大学农学院，湖北荆州 434025)

蔬菜细菌性病害严重危害了蔬菜的品质和产量，控制蔬菜病原细菌的药剂主要是农用抗生素[1]。但由于长期大量不科学地使用抗生素，产生的抗性问题越来越突出。因此，开发新型安全的杀菌剂显得十分必要。植物产生的一些次生代谢产物很多具有抑菌活性[2-4]，目前，这方面的研究较多，且已经发现了许多具有抑菌活性的化合物[5-7]，但对本研究中采集到的6种古老珍稀植物的抑菌活性成分的研究较少，仅发现汪超等研究了连香树精油对玉米大斑病病菌、黑曲霉及根霉的抑菌活性[8]；Tada等从连香树叶子的甲醇提取物中分离出2种对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用的化合物[9]；金则新等研究了七子花不同时期、不同溶剂提取物对枯草芽孢杆菌等细菌的抑菌活性[10-11]。本试验研究6种古老珍稀植物对3种蔬菜病原细菌的抑菌活性，以期为进一步探寻这些植物的抑菌活性成分及新型杀菌剂的研发奠定基础。

1　材料与方法

1.1　试验材料

1.1.1供试植物样品供试植物样品详情如表1所示，均采自武汉植物园。

表1　供试植物详细信息

1.1.2供试菌种及来源黄瓜细菌性角斑病病菌(Pseudomonassyringaepv.lachrymans)、魔芋软腐病病菌(Erviniacarotovorapv.carotovora)、生姜青枯病病菌(Ralstoniasolanacearum)，均采自田间，经室内分离纯化所得，由长江大学周燚教授鉴定。

1.1.3培养基培养基配方：15 g/L琼脂、10 g/L蔗糖、10 g/L 蛋白胨、3 g/L牛肉膏，pH值调至7.0。

1.2　试验方法

1.2.1植物样品的制备将采集的植物材料粉碎后用甲醇浸提3次，过滤后在50 ℃条件下减压浓缩成膏状，密封保存[12]。

1.2.26种植物甲醇提取物抑菌活性的测定将0.5 g膏状提取物用2.5 mL丙酮溶解，取1 mL丙酮溶解液用含1‰吐温80的无菌水定容至10 mL，配制成质量浓度为20 mg/mL的药液。将供试病原细菌活化，配成浓度为105～106CFU/mL 的悬浮液。利用琼脂打孔药剂扩散法[13]来测定各甲醇提取物的抑菌活性。每个培养皿倒入30 mL含有 200 μL 细菌悬浮液的50 ℃左右的培养基，冷却后用灭菌打孔器打孔，并用少许琼脂封底，加入50 μL配制好的无菌药液，并设置溶剂对照组。在30 ℃条件下培养1 d，测量抑菌圈的直径。每个处理重复3次，取其平均值。

1.2.3连香树甲醇提取物的最低抑菌浓度测定用丙酮将连香树甲醇提取物配制成5.00、4.00、3.20、2.56、2.05、1.64、1.31、1.05、0.84、0.67 mg/mL等一系列浓度梯度的药液，最低抑菌浓度测定方法同“1.2.2”节。

1.2.4连香树甲醇提取物萃取物抑菌活性测定采取液-液分配萃取法，将连香树甲醇提取物进行初步分离。用少量甲醇溶解适量提取物，放在50 ℃恒温水浴锅热溶后加10倍蒸馏水，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取。将各萃取液和水层减压浓缩至膏状，并在质量浓度为5 mg/mL条件下对3种病原细菌进行抑菌活性测定，测定方法同“1.2.2”节。

2　结果与分析

2.1　6种古老珍稀植物甲醇提取物对3种蔬菜病原细菌的抑菌活性初筛

由表2可知，当质量浓度为20 mg/mL时，连香树甲醇提取物对3种蔬菜病原细菌的抑制活性最好，其抑菌圈直径分别为1.31、1.68、1.10 cm；山白树和牛鼻栓的甲醇提取物对魔芋软腐病病菌、生姜青枯病病菌均有抑制活性，山白树甲醇提取物对两者的抑菌圈直径分别为1.14、0.89 cm，牛鼻栓甲醇提取物对两者的抑菌圈直径分别为0.54、0.48 cm；其余植物对供试病原细菌均无抑制活性。

表2　6种古老珍稀植物甲醇提取物对3种病原细菌的抑制效果

注：“-”表示没有活性，下表同；同列数据后不同小写字母表示在0.05水平上差异显著，表4同。

2.2　连香树甲醇提取物对3种蔬菜病原细菌的最低抑菌浓度测定

为明确连香树甲醇提取物对供试病原细菌的最低抑制浓度，采取琼脂打孔药剂扩散法对其进行测定。由表3可知，连香树对3种病原细菌的最低抑制浓度均为1.64 mg/mL。

2.3　连香树甲醇提取物各萃取相对3种蔬菜病原细菌的抑制活性测定

由表4可知，当质量浓度为5 mg/mL时，连香树甲醇提取物除石油醚相外，其他各萃取相对3种病原细菌均有抑制效果，其中，乙酸乙酯相、水相表现出较好的抑制效果，抑菌圈直径分别大于2.3、1.8 cm，石油醚相对这3种病原细菌均没有抑制活性。可以初步判断出连香树甲醇提取物中具有抑菌活性成分化合物的极性较大。

3　结论与讨论

质量浓度为20 mg/mL时，本研究的植物材料中只有连香树、山白树、牛鼻栓等3种植物的甲醇提取物对3种供试病原细菌有抑制活性，其中，连香树甲醇提取物的抑制活性最好，其最低抑菌浓度为1.64 mg/mL。采用液-液分配萃取法分离并对连香树提取物进行生物测定。研究表明，连香树甲醇提取物抑菌活性成分的极性较大，此结果与Tada等从连香树叶甲醇提取物乙酸乙酯萃取层分离到的2种抑菌化合物[9]相一致，可以进一步对其做色谱分离。山白树的抑菌活性也较好，可以对其进行进一步的研究。

表4　5 mg/mL连香树甲醇提取物各萃取相对

珍稀濒危植物往往因为其生活的特殊环境为人类提供了珍稀的物质材料。本试验采集到的6种古老珍稀植物中，有3种植物的甲醇提取物具有抑菌活性，因此，古老珍稀植物可能是一个开发植物源杀菌剂的方向。

参考文献：

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