青刺尖“金花菌”发酵茶的降血脂效果

刘 刚， 杨 妍， 胡婷婷， 邓钱江， 张晓喻， 黎 霞

（四川师范大学 生命科学学院，四川 成都 610101）

高血脂症是因体内血脂代谢异常而引发的一种慢性疾病[1]，也是引起脂肪肝、动脉粥样硬化等心血管疾病的主要原因之一[2]。临床上常用于治疗高血脂症的药物主要是他汀类药物，长期服用该类药物对人体有一定程度的毒副作用[3]。

青刺尖茶是蔷薇科李亚科扁核木属植物青刺尖Prinsepia utilisRoyIe的嫩茎叶，按照绿茶的工艺制成的代用茶[4]，该植物始载于《滇南本草》，具有多种功效[5]。现代研究证明，青刺尖茶[6]与茯砖茶[7]均具有降低血脂的功效，茯砖茶的降血脂功效与其附生的优势菌—“金花菌”的发酵作用有密切的联系。有研究表明，该菌产生淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等酶，在改善茶叶本身滋味[8]的同时，饮用此茶可以调节人体的脂质代谢，维持血脂的平衡[9]。目前，“金花菌”发酵作用对青刺尖茶降血脂功效影响的研究，尚未见文献报道。

将青刺尖茶经过“金花菌”发酵后，制备为代用茶，不仅符合绿色健康理念，满足当今社会对食品多元化的要求，而且为青刺尖茶功能的开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性昆明小鼠105只，体重18～22 g，合格证号SCXK（川）2013-24，成都达硕实验动物公司提供。

1.2 动物饲料

普通饲料：成都达硕实验动物公司；高脂饲料[5]配方为：基础饲料75%、蛋黄粉15%、猪油10%。

1.3 仪器与设备

TC6010L全自动生化分析仪、TGL-20M台式高速冷冻离心机、Multlskan Mk3型酶标仪、转轮式切片机 （徕卡-2016）、TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机、BMJ-Ⅲ型包埋机、PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪、数码三目摄像显微镜（BA400Digital）、图像分析软件Motic Images Advanced等。

1.4 实验试剂

青刺尖茶：产自四川盐源县左所乡；茯砖茶：中茶湖南安化茶厂有限公司；血脂康粉：北京北大维信生物科技有限公司；Mouse Apo-A1 ELISA kit：货号 Rm1760XL；Mouse Apo-B ELISA kit： 货 号Rm0743XL；Mouse LP-a ELISA kit： 货 号Rm0742XL，规格96孔/盒，Abcam公司生产，北京永辉生物科技有限公司进口分装。

1.5 茶汤制备

取真空密封包装的青刺尖茶500 g，置于1 500 mL三角瓶，按25%含水量加蒸馏水125 mL，在121℃下灭菌20 min。用平板法[10]从茯砖茶中分离纯化获得“金花菌”，取其浓度[11]为 1.0×107个/mL 的孢子悬液1.0 mL分别接入灭菌的青刺尖茶，放28℃恒温培养箱培养7d，然后将茶样烘干，备用[12]。

称取青刺尖茶样75 g，以料液比1∶20加入1 500 mL蒸馏水[13]，90℃回流提取45 min，滤过液经减压浓缩并定容至500 mL，得质量浓度0.15 g/mL的青刺尖茶样茶汤。再按照灌胃剂量0.3 mL/20 g制备9.0、6.0、2.0 g/kg 的高、中、低剂量的发酵茶茶汤和9.0 g/kg干茶茶汤，备用。

1.6 小鼠高脂血症模型的建立

小鼠适应性喂养3 d，105只小鼠称质量后随机分成基础饲料组和高脂饲料组，两组间小鼠体重的差异不显著。高脂饲料组的90只小鼠饲喂高脂饲料[14]，其余15只小鼠饲喂普通饲料。28 d后禁食不禁水 12 h，断尾取血[15-16]，37℃恒温水浴 1 h[17]，3 000 r/min离心15 min分离血清[18]，再测定血清中的胆固醇 TC、TG、HDL-C、LDL-C。

1.7 实验设计

确定造模成功后，再将高脂血症小鼠随机分成6组：青刺尖“金花菌”发酵茶高剂量组（9.0 g/kg）、中剂量组（6.0 g/kg）、低剂量组（2.0 g/kg）、青刺尖干茶组（9.0 g/kg）、血脂康组（0.3 g/kg）与模型组，各组间无差异性。处理组连续给药28 d，空白组和模型组给予等量的蒸馏水，每三天称一次体重，调整剂量。末次给药后禁食不禁水12 h，先称质量，再用戊巴比妥钠麻醉，心脏取血，分离血清，测定方法同1.6。

1.8 测定方法

全自动生化分析仪测定胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）；试剂盒测定载脂蛋白-AI（Apo-AI）、载脂蛋白-B（Apo-B）、脂蛋白 A（LP-a）。 取血后，剥离小鼠的肝脏，用生理盐水洗去污血，再用滤纸吸干、称质量，计算肝脏指数[19]，肝脏指数=脏器质量/小鼠质量（g/g），然后，按病理检验SOP程序进行脱水、修剪、包埋、切片、HE染色、封片等，最后镜检。

1.9 统计与分析

用SPSS20.0对数据进行处理，组间比较用t检验，多重比较用LSD法[20]。

2 结果与分析

2.1 高血脂模型小鼠的建立

小鼠经3 d适应性饲养，再用不同饲料处理28 d，普通饲料、高脂饲料对小鼠的影响见表1。

表1 饲料对小鼠血脂生化指标和体重增长的影响Table 1 Effect of high-fat diet on blood lipid level in mice

从表1可看出：不同饲料处理28 d后，与普通饲料组比较，高脂饲料组小鼠的体重增长差异显著（p＜0.05），同时，其 TC、TG、HDL-C、LDL-C 等生化指标均升高，具有极显著的差异性（p＜0.01），表明小鼠高血脂症模型建立成功。

2.2 发酵茶对高血脂小鼠血脂的影响

在灌胃期间，各组小鼠均取食正常，毛洁白而具光泽，无排稀便现象。药物灌胃28 d后，各组小鼠血脂生化指标的影响见表2。

表2 发酵茶对高血脂症小鼠血脂生化指标的影响Table 2 Effects of Prinsepia utilis fermented tea on blood lipid level in mice

从表2可看出：与模型组比较，青刺尖“金花菌”发酵茶的低中高剂量组血清TC、TG、HDL-C、LDL-C浓度均降低，其中，低剂量组的TC与TG浓度均有显著差异（p＜0.05），而中剂量组的TC与TG浓度的差异极显著 （p＜0.01）；低中高剂量组的HDL-C浓度均极显著差异 （p＜0.01）；低剂量组的LDL-C浓度差异达到显著（p＜0.05），而中剂量组的LDL-C浓度差异达到极显著（p＜0.01）。与青刺尖干茶组相比，青刺尖“金花菌”发酵茶的高剂量组血清TC、TG、LDL-C浓度均降低。与阳性组比较，青刺尖“金花菌”发酵茶3个剂量组的血清指标差异性不显著。

2.3 发酵茶对高血脂小鼠血清Apo-AI、Apo-B和LP-a的影响

经过“金花菌”发酵，对高血脂小鼠血清Apo-AI、Apo-B和LP-a的影响见表3。

表3 发酵茶对高血脂小鼠血清Apo-AI、Apo-B及LP-a的影响Table 3 Effects of Prinsepia utilis fermented tea on Apo-AI、Apo-B and LP-a

由表3可知：与模型组比较，各剂量组血清的Apo-AI均高于模型组，中剂量组的差异达到极显著（p＜0.01），高剂量组差异显著（p＜0.05）；各剂量组Apo-B均低于模型组，中剂量组差异达到极显著（p＜0.01），低、高剂量组差异显著（p＜0.05）；各剂量组的Apo-B/Apo-AI比值均低于模型组，中剂量组差异显著（p＜0.05）；各剂量组LP-a均低于模型组。

2.4 发酵茶对小鼠体重及肝脏指数的影响

连续灌胃28 d，对小鼠体重及肝脏指数的影响见表4。

表4 发酵茶对小鼠体重及肝脏指数的影响Table 4 Effects of Prinsepia utilis fermented tea on body weight and liver index in mice

由表4可知：与空白组比较，模型组体重有一定的增长，但差异不显著，各剂量组体重的增长量均有降低，且均达到极显著（p＜0.01）。与空白组比较，模型组的肝脏指数极显著升高（p＜0.01），青刺尖金花菌发酵茶各剂量组的肝脏指数差异不显著。与模型组比较，发酵茶处理组的体重增长量、肝脏指数两项指标均降低，体重增长量差异极显著 （p＜0.01），低、中剂量组肝脏指数差异极显著（p＜0.01），高剂量组差异显著（p＜0.05）。而与阳性组和干茶组比较，各剂量组的肝脏指数差异均不显著，而低剂量组的体重增长量低于阳性组和干茶组，且差异显著（p＜0.05）。

2.5 发酵茶对小鼠肝脏组织的影响

青刺尖发酵茶对小鼠肝脏组织的影响，肝脏组织病理显微结构见图1。

参照文献[21]，由图1可知，空白组小鼠肝小叶结构完整，未见增生及假小叶形成，小叶中央静脉未见淤血，肝细胞未见变性及坏死，也未见肝细胞增生、纤维化，肝细胞内及细小胆管内无胆汁淤积；模型组小鼠肝小叶结构欠清，肝细胞可见中度弥漫性水肿变性，可见脂肪变性；低、中剂量组小鼠肝小叶结构清晰，肝索呈放射状排列，可见散在脂肪小滴肝细胞及轻度水肿变性；高剂量组、干茶组及阳性组水肿程度较低、中剂量组轻，可判断有极少散在脂肪小滴的肝细胞。

图1 小鼠肝脏组织的病理显微结构(HE染色,x200)Fig.1 Microstructure of Pathology on the mice liver tissue(HE staining,x200)

3 结语

研究结果表明，经“金花菌”发酵，青刺尖发酵茶处理组小鼠的体重增长量明显低于空白组和模型组，呈一定的剂量效应，其中，低、中剂量组控制体重增长的效果优于高剂量组，低剂量组体重增长量低于阳性组和干茶组，且差异显著（p＜0.05）；发酵茶各剂量组的肝脏指数明显低于模型组，而与干茶组、阳性组和空白组比较均无显著差异。与青刺尖干茶相比，青刺尖发酵茶可极显著降低TC、TG（p＜0.01），而显著降低 LDL-C（p＜0.05），同时，可控制HDL-C的过度增长。青刺尖茶经此发酵，各处理组小鼠的血清LP-a、Apo-B/Apo-AI均低于模型组，其中，中剂量组差异显著（p＜0.05）；而与干茶组、阳性组和空白组比较，各处理组均无显著差异。

从小鼠的肝脏病理切片可知，青刺尖茶经“金花菌”发酵后，其高剂量组的肝脏组织只有极少、散在的脂肪小滴，肝细胞病变程度较低，且与阳性组和干茶组比较，均无显著差异，说明青刺尖发酵茶可能具有控制高血脂小鼠肝脏发生脂肪积累性病变的功能。因此，经过“金花菌”发酵的青刺尖茶具有良好控制高血脂小鼠体重增长、降低血脂各项指标、控制肝脏脂肪积聚的功效，且这些作用呈现一定的剂量效应。同时，金花菌属于安全性的菌类，在黑茶中最为常见，以此菌发酵青刺尖具有很高的安全性。

青刺尖茶经过发酵，其降脂效果更佳，控制体重增长更明显，但要将其开发为新的功能性保健茶还需要对其风味等感官和理化指标进行进一步的优化及科学客观的评鉴。

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