灵景口服液的制备工艺研究

李书贞，吴伟东，李远文，莫全毅

(深圳技师学院 应用生物系，广东 深圳 518116)

灵景口服液是以红景天、灵芝为主要原料生产的口服制剂，具有抗疲劳，提高机体免疫力等功效。其中红景天主要有抗疲劳、抗辐射和抗缺氧等功效，红景天的主要成分为红景天苷和酚醇等化合物，还含有18种氨基酸(包含了人体必需的8种氨基酸)，35种无机元素以及15种人体必需的宏量和微量元素，其根茎中还含有维生素A、C、D、E、B1、B2、B6，其中维C的含量比苹果高15倍，比柑桔多2.7倍，并蕴含大量具有抗衰老作用的活性物质及丰富的营养物质[1]。灵芝化学成分主要含麦角甾醇0.3%～0.4%，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。在水溶性提取液中含有水溶性蛋白质，天门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，多肽及多糖类。尚含树脂、内酯、香豆精等。经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效[2]。在传统中药剂型中，中药口服液具有疗效好、起效快、作用强、使用方便、安全可靠的特点。本文采用正交试验设计方法，以功效成分红景天苷[3]含量为测定指标，重点对灵景口服液的制备工艺进行研究，以寻找最佳的产品制备方法。

1 仪器与试药

口服液灌装机(楚天-YGZ16/25型)；超声波振荡器(宁波金达超声波仪器厂JD-600R型)；高效液相色谱仪(安捷伦-1260型)；旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司SB-1100型)；真空泵(巩义市予华仪器有限公司SHZ-D型)；离心机(常州国华有限公司800型)；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司AB-S/A型)；电炉；恒温恒湿实验仪(台湾杨程仪器工业公司)；pH计(梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司 PHS-3C型)；中药材红景天、灵芝均由深圳市前海千金方有限公司购进，甲醇(广东广试试剂科技有限公司)；红景天苷对照品(上海金穗生物科技有限公司，含量99.9%)。

2 实验方法及结果

2.1 有效成分红景天苷含量的测定

2.1.1 照高效液相色谱法(通则0512)测定[4]

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以V(甲醇)∶V(水)=15∶85为流动相;检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。

2.1.2 对照品溶液的制备

取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备:

取本品10mL，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注人液相色谱仪，测定，即得。

2.2 方法

2.2.1 正交试验法优选中药材提取工艺

中药材提取工艺的正交试验筛选[5]，选择影响提取效果的主要因素：加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(c)作为考察对象，以红景天苷含量为评价指标，每个因素确定不同的水平进行试验，确定考察因素和范围如表1。

表1 中药材提取工艺因素水平表

选择 L9(34)表，分别称取处方量的中药材，按照实验设计所定条件，平行操作条件下，进行中药材提取，按红景天苷含量测定方法分别测定样品中红景天苷的含量。每实验号的实验按试验方法重复测定3次，3次重复所得结果取平均值作为该实验号的结果，结果见表2。

表2 中药材提取工艺实验设计及实验结果

表2(续)

K1、K2、K3分别为各因素1、2、3水平的平均红景天苷含量；R为平均红景天苷含量的极差。

图1 灵景口服液样品高效液相色谱图

结果分析：从表2数值进行直观分析，以最大红景天苷含量为判断标准，应选择A2B2C3，不同因素对结果影响强弱顺序为：A2>A3>A1,B3>B2>B1,C3>C2>C1。同时，从R值可以看出，A、C因素较为重要，应选A因素的2水平和C因素的3水平，B因素不同水平之间的影响不太明显，从实际生产考虑，应选B因素的1水平，从而初步认为中药材提取最佳工艺条件为A2B1C3。即加10倍量水，提取4次，40min/次。以表2数据继续进行提取工艺对红景天苷含量影响的显著性分析，结果见表3。

表3 中药材提取工艺实验显著性分析表

注：*表示差异显著(P<0.05)

从表3中结果可见：影响因素强弱顺序为C>A>B,因素A和C的水平变化对实验结果有高度显著影响，因素B的水平变化对实验结果无影响。确认灵景口服液中药材的最佳提取工艺条件应为A2B1C3，即加10倍量水，提取4次，40min/次。这与直观分析法所得的结果一致。

2.2 灵景口服液制备工艺

根据选取的中药材提取工艺，设计灵景口服液制备工艺如下：

红景天、灵芝两味中药拣除杂质后，粉碎成粗粉，加水浸润30分钟min后超声波提取，加水10倍量超声提取4次，每次40min。合并提取液，用80目筛网粗滤，离心(4000 r/min)15min，取上清液减压浓缩，浓缩液再次离心(4000r/min)15min，取上清液配液，用纯化水定容至规定量，灌装、灭菌即得成品。

2.3 工艺验证

(1) 按照灵景口服液制备工艺进行验证，重复制备3批产品，直观观察产品为红棕色液体且无沉淀生成，按红景天苷含量测定方法测定功效成分红景天苷含量为(5.2±0.05)mg/10mL,均符合产品质量标准，且重现性良好。

(2) 稳定性[6]实验 通过加速实验依法考察其密度、pH值、含量的变化情况，以确定产品的稳定性。将本品按上市包装，在40℃及75%的相对湿度的条件下进行实验，放置6个月，在0，1，2，3，6月末分别取样，按质量检测方法进行检测，均符合标准。检测结果见(表4)。

表4 样品加速实验考察结果

3 讨论

如何保证其功效成分红景天苷的含量及其它多糖类有效成分不被分解，是本产品生产工艺的关键点。本文首选了超声提取的工艺，采用正交试验设计方法，以红景天苷含量为测定指标，来确定灵景口服液制备工艺。超声波辅助提取法作为一种天然产物活性成分分离提取的新技术，其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的溶出，从而达到提取目的，具有提取温度低、高效、方便的特点，并且具有较高的实用价值 。在制备工艺浓缩方面选择了减压旋转蒸发浓缩，灭菌工艺选择微波隧道式灭菌，可以最大限度保护多糖类成分不被高温分解。按照实验筛选出来的制备工艺对成品进行了工艺验证和稳定性试验，试验数据证明该工艺条件稳定可行。

[1] 李凤林，吕艳荣，宫敬利，等.高山红景天提取抗疲劳作用研究[J].江苏调味副食品，2013(4):34-37.

[2] 毛 健，马海乐.灵芝多糖的研究进展[J].食品科学,2010,31(1):295-299.

[3] 韩雪娇，郭 娜，朱美宣，等.红景天苷药理作用及其作用机理研究进展[J].中国生化药物，2015(1)：171-175.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[M].北京；中国医药出版社,2015.

[5] 刘佩沂,赖岳晓,田素英,等. 正交试验法优选肺热清解口服液的提取工艺[J].中国民族民间医药，2010(08)：54-58.

[6] 徐晓梅，谭本仁，卞益民.中药口服制剂稳定性实验研究[J].中国药事，1998(2).