鸡大肠杆菌的简易药敏试验

王运成

（辽宁省凌源市东城动物卫生监督所，辽宁 凌源 122500）

在鸡群患大肠杆菌病时，为及时有效控制病情，避免盲目滥用抗生素，应通过药敏试验选择敏感药物进行治疗。

1 试验原理

将不同的复方药品按治疗剂量放大相同倍数配制药液，制作药敏片。药敏片上含有的抗菌药物向琼脂培养基扩散，通过对细菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，在药敏片周围形成抑菌圈，根据抑菌圈的大小确定药物抗菌能力强弱。

2 试验设备、药品

高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、干燥灭菌箱、普通天平、酒精灯、手术剪、镊子、普通营养琼脂、玻璃棒、定性滤纸、打孔器、蒸馏水、药匙、尺子、灭菌棉拭子、小玻璃瓶（如青霉素瓶，10个）、玻璃平皿（直径90mm，10个）、烧杯等。

3 试验步骤

3.1 消毒准备

将烧杯、玻璃平皿、玻璃棒、小玻璃瓶用干燥灭菌箱160℃灭菌2h，冷却备用。用打孔器将定性滤纸打成圆形药敏纸片若干份（直径约6mm，100片/份），干燥灭菌箱灭菌备用。

3.2 平皿培养基制备

先向烧杯中加入100mL蒸馏水，再加入4.5g普通营养琼脂，边混合边搅拌，使琼脂全部溶化。然后将烧杯放入高压蒸汽灭菌锅，加热至121℃20min。稍作冷却后，缓慢解压。然后，趁热将琼脂倒入平皿中，每个平皿约需20～25mL琼脂液，琼脂厚度约3～5mm，倒完盖上平皿。冷却后放入冰箱（2～8℃）备用，可保存 5～7d。

3.3 药液浓度配比对照试验

将不同的复方制剂分别按治疗剂量的不同倍量加入蒸馏水，制作药敏片，经过多次试验和临床实践，大多数药品的药敏片在50倍治疗量浓度下抑菌圈较大，便于观察和测量，抑菌效果明显。我们将50倍量作为快速简易药敏试验的药液浓度标准。

3.4 药敏片制备

将常用大肠杆菌治疗药物分别取1g于烧杯中，加蒸馏水50倍量溶解，分别放入100片药敏纸片，充分浸泡4h。然后用镊子把药敏纸片夹入玻璃平皿中，用牙签将药敏纸片摆平分开，不重叠。放入恒温箱（37℃）24～48h烘干。烘干后，用镊子将制好的药敏片放入小玻璃瓶中，加盖密封，粘上口缺纸，标注药品名称，放入冰箱（2～8℃）保存备用，有效期为6个月。

3.5 采集病料

对病死鸡进行剖检，发现有大肠杆菌病典型病变特征的病例，即可无菌采取肝、心、气囊等处病料置于灭菌容器内备用。

3.6 贴药敏片

准备好待试验的药敏片，按顺序排列，做好记录。用灭菌棉拭子蘸取病料新鲜截面，均匀涂布于琼脂平板表面。在平皿外壁做好起始标记。用镊子在酒精灯火焰上消毒后，夹取1号药敏片贴在琼脂平板的起始标记处，按平按实。然后，镊子消毒，依次夹取2号药敏片，按逆时针顺序贴在琼脂平板上，直至全部。最后将平皿倒置，放入恒温箱37℃培养12～24h。

3.7 结果判定

表1 药敏试验结果

4 药物选择

4.1不光要考虑药敏试验抑菌圈的大小，但还要考虑到药物的吸收性、稳定性等影响因素。

4.2 药物的溶解性对试验结果的影响不易溶解的药物不能充分扩散到培养基中，抑菌圈就可能比真实效果要小。如氟苯尼考、粘杆菌素等。

4.3 药物的稳定性对试验结果的影响青霉素类、部分头孢类等药物不稳定，在药敏片制作、贮存、试验过程中，会受到各种因素影响，药物效价降低，试验结果也会比真实值偏低。

4.4 培养基对试验结果的影响琼脂厚度和浓度越大，药物的抑菌圈越小。

4.5 影响试验结果的因素还有药敏纸片、pH值、涂菌数量等。

在做药物选择时，只有综合分析到这些影响因素，才能找到最敏感的药物。

5 总结

在实验中，是将药敏纸片放入药液中浸泡吸收，不做定量分析；药敏试验液是用复方药品的治疗量浓度的增大浓度配制，抑菌圈相对较大。本快速简易药敏试验主要用于鸡大肠杆菌病时敏感药物的选择，限于粗略检测，适于技术设备薄弱的基层诊疗机构。

[1]朱维正.消毒灭菌法[M].新编兽医手册，2000.

[2]张美喜，等[C].纸片法药敏试验影响因素的正交试验研究.河南医科大学学报，1990（25）：374.