两代丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)诊断试剂盒在无偿献血血液筛查中的比较

郭 咚，张 钢，陈 静，周 鼎

(长沙血液中心检验科，湖南 长沙 410000)

我国丙型肝炎病毒(HCV)感染率大约为0.43%，HCV感染者还在逐年上升，是当今感染HCV人口最多的国家[1]。随着无偿献血血筛试剂的发展，我国献血者中HCV流行率逐步下降[2]。 现阶段大多数血站实验室在抗- HCV检测上选择四代检测试剂盒与三代检测试剂盒联合检测。本实验室通过对无偿献血者血液筛查标本抗- HCV检测的结果分析，对第三代、第四代抗HCV试剂的性能进行评估。

1 材料与方法

1.1标本：2014年～2016年长沙市无偿献血者常规血液筛查标本417 044份。

1.2试剂和仪器：检验设备使用瑞士Hamilton Star全自动加样仪、瑞士Hamilton FAME24/30全自动酶联免疫检测系统；第三代抗-HCV检测试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，第四代试剂由北京万泰生物制品有限公司试剂盒提供；各浓度质控物由北京金豪制药股份有限公司提供；抗-HCV血清盘由北京康彻思坦生物技术有限公司提供。以上试剂及质控物均在有效期内使用。

1.3方法：使用第三代、第四代抗HCV检测试剂盒对无偿献血者血筛标本进行两次平行检测。某种时间初次检测结果为反应性时，使用原试剂进行双孔复查。结果判断：第三代、第四代抗HCV检测试剂盒均设置灰区范围(S/CO值：0.5～1.0)整个检测过程中，按照试剂使用说明书要求，在全自动设备上完成所有步骤。

1.4统计学方法：采用χ2检验，将数据导入SPSS 23.0软件进行统计学分析，P<0.05时差异有统计学意义。

2 结果

2.1使用浓度为1NCU/ml北京金豪抗-HCV质控物(批号20150717)，连续检测20 d，对精密度进行估计。万泰四代χ2值=7.57，CV%=9.7%，科华三代χ2值=3.15，VC%=12.8。

2.2康彻思坦丙肝病毒抗体血清盘(批号20160611)，对灵敏度、特异性进行评估。见表2。

2.3检出限检测结果：梯度稀释样本5份(L1～5)，L5为基质液，其他4份(L1～4)为阳性梯度稀释样本。见表3。

表1两种试剂血清盘检测结果

标本号确认结果万泰四代科华三代标本号确认结果万泰四代科华三代1---21+++2+++22+++3+++23---4---24---5---25+++6+++26---7+++27---8---28---9---29+++10+++30+++11---31+++12---32+++13+++33---14---34---15---35+++16+++36+++17+++37---18---38---19+++39---20+++40+++

表2两种试剂检出限结果

标本号L1L2L3L4L5浓度(NCU/ml)4210.5基质液科华三代(S/CO)7.43.21.50.960.01万泰四代(S/CO)13.76.43.41.80.01

2.4平行检测2014年～2016年长沙市无偿献血者血液筛查标本417 044份，对两试剂检测结果的符合性进行估计，差异有统计学意义(P<0.001)。见表3。

表3两种试剂平行检测结果

科华三代万泰四代 阳性 阴性 总计阳性32635361阴性722415 961416 683总计1 048415 996417 044

3 讨论

实验室使用的第三代检测试剂盒为间接法，包被于微孔板内饰基因重组表达的丙肝抗原；使用的第四代检测试剂盒为双抗原的夹心法，除包被了丙肝抗原外，还加入了生物素化丙肝抗原，形成“包被抗原-抗体-生物素化抗原”复合物。从同浓度的质控品重复性检测结果以及试剂检出限检测结果来看，第四代检测试剂盒灵敏度较第三代检测试剂盒有较大的提高。这是因为万泰第四代检测试剂盒使用了生物素-亲和素级联放大系统，提升了检测试剂的灵敏度。而双抗原夹心法增加了IgM的检测。IgM较IgG出现的早，缩短了窗口期。同时另外四代检测试剂加样量的增加使检测重复性更好。

2014年～2016年长沙市无偿献血者血液筛查标本417044份的两种试剂平行检测符合性结果为99.8%，尤其是四代检测试剂的灰区和假阳性标本大幅度减少，说明该试剂检测特异性较好。另外，由于血清中非特异性IgG以及类风湿因子等的干扰而造成的假阳性反应。而万泰四代使用了基因工程重组表达的抗原作为原料取代了酶标二抗，原料纯度大幅度高，提高了特异性。

目前我国大多数血站对献血者抗- HCV初筛检测仍采用两遍的ELISA法，其初筛反应性样本的正确率约为30%左右[3]；而各血站对试剂的灰区设置非常的严格，初筛检测灰区淘汰的献血者和单试剂反应性淘汰的献血者确认阳性率则会更低。而这部分献血者被检测结果为“不合格”而被淘汰。试剂灵敏度的提高提前了窗口期，保证了血液安全弱阳性标本能够检出，保证了血液安全；特异性的提升，使灰区及假阳性的标本减少，避免了灰区标本重复试验带来的成本增加和工作量增加，避免血液报废节约成本、避免献血员的流失血源紧张。

因此，这几年我国越来越多血站开始关注献血者归队问题，并根据各自实验室的情况，制定对淘汰的献血员再次抽取血液进行确证试验，并对假阳性相对应的献血者保留资格[4]。同时通过各种大型的招募活动，培养献血者的忠诚度，发展固定的献血者队伍，也是血站保障血液安全的措施[5]。但是近几年有高危行为献血者也参与到无偿献血中，也给采供血机构提出了巨大的挑战。有研究显示，男男同性恋者中抗-HCV流行率约为0.07%～2.9%，其感染HCV的危险性是一般人群的3倍[6]。

2015年国家卫计委要求核酸检测覆盖全国无偿献血标本筛查，仍有但经核酸检测为阴性而ELISA检测为阳性的报道[7]。所以核酸检测 HCV RNA虽可以缩短窗口期，但还是存在漏检风险[8]，NAT检测为阴性而 ELISA检测为阳性，则说明 ELISA法在血液筛查的作用仍然不能被忽略。ELISA检测的是其抗体，而核酸检测的是HCV RNA，就检测原理的理论上来说，这两种方法对同一标本的两次检测结果是互补的。2015版血站技术操作规程血液检测方法中增加了针对血清学标志物的其他检测手段，即化学发光免疫分析试验(CLIA)。朱为刚，曾劲峰等研究表明[9]，将化学发光法与NAT检测相结合的方案，在采供血机构值得推广，能进一步保障血液安全。

4 参考文献

[1] 潘华伟,苑 远.丙型肝炎病毒感染的流行病学研究进展[J].吉林医药学院学报,2017,38(2):123.

[2] 杨海英,汪 峰,费静娴,等.浙江省湖州地区无偿献血人群丙肝感染危险因素分析[J].临床血液学杂志(输血与检验),2017,30(02):305.

[3] 张秀慧,钟政荣,余加宏.献血者抗-HCV检测及确认结果研究进展[J].安徽医学,2015,36(1):122.

[4] 李 玲,刘 忠.初筛反应性献血者确证方案与归队策略分析[J].中国输血杂志,2016,29(1):1.

[5] 康瑞博,王 戴.无偿献血者抗-HCV筛查结果与ALT检测结果关系的分析[J].吉林医学,2012,33(05):906.

[6] Hahné Susan J M，Veldhuijzen I K，Lucas W，et al.Infection with hepatitis B and C virus in Europe：a systematic review of prevalence and cost-effectiveness of screening[J].Bmc Infectious Diseases，2013，13(1):181.

[7] 刘峭梅,覃柳燕.献血者血液单人份核酸检测及血清学检测结果的分析[J].检验医学与临床,2014,11(1):102.

[8] 蒋昵真,胡文佳,朱胜江,等.江苏省反应性献血者屏蔽、保留与归队情况分析[J].国际检验医学杂志,2017,38(10):1299.

[9] 朱为刚,曾劲峰,李 彤,等.一种化学发光检测试剂在血液筛查中的应用评估[J].中国输血杂志,2016,29(06):581.