液相色谱-串联质谱法测定腊肉制品中20种兽药残留量

◎ 仇志杰

（佛山市高明区农业技术服务推广中心，广东 高明 528500）

腊肉是指以鲜（冻）畜肉为主要原料，配以其他辅料，经腌制、烘干（或晒干、风干）、烟熏（或不烟熏）等工艺加工而成的非即食肉制品[1]。

腊肉的质量在很大程度上取决于原料鲜（冻）畜肉的质量。近年来，各地方对于病死牲畜的管理趋于规范，生鲜市场鲜有流入现象。各地对于病死牲畜的管理力度与当地财政收入的水平存在较大的关联，部分欠发达地区并未建设无害化处理中心，对于病死牲畜的无害化处理补贴仍不理想，病死牲畜肉依然存在流入食品行业的可能，其中用于腊肉制作更是其中一个较大的可能。

为令病死畜肉的卖相更为鲜艳并防治进一步腐化，往病死畜肉添加氟喹诺酮类磺胺类药物、氟喹诺酮类药物、抗生素等具有杀菌效果的兽药令腊肉制品依然存在不安全的食用因素。

依据《动物性食品中兽药最高残留限量》（农业部235号公告）[2]，肌肉中磺胺类总量限量为100 μg/kg，氟喹诺酮类药物单种限量为100 μg/kg，氯霉素为不得检出。目前，国家标准中已建立相对完善的检验检测标准[3-6]，但并无一个检测方法能同时涵盖这3类药物。本文着眼于实际工作需要，建立腊肉制品中20种兽药残留量的液相色谱-串联质谱分析方法，达到满足工作的需求。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器

液相色谱-串联质谱仪TSQ ENDURA（美国Thermo）、冷冻台式离心机ALLegraX-15R（美国Beckman）、涡旋混匀仪MS1（德国IKA）、电子天平AL204（瑞士Mettler Toledo）。

1.1.2 主要试剂

乙腈、甲酸、甲醇（质谱纯，德国Merck），乙酸铵（色谱纯，德国Merck），无水硫酸钠（分析纯，天当科密欧），DSPE净化管（美国Agilent），0.2 μm滤膜（英国Whatman），超纯水（美国Millipore AD10超纯水系统制备），20种兽药标准物质（德国Dr.Ehrenstorfer）。

1.2 方法

1.2.1 标准储备液和标准使用液的配制

分别称取20种兽药标准品（精确至0.01 mg），用甲醇溶解，容量瓶定容，配制成浓度为1 mg/mL的标准储备溶液。标准储备溶液于-18 ℃下避光保存，保存期为6个月。

分别吸取适量标准储备溶液，置于容量瓶中，用甲醇稀释成浓度为1.00 μg/mL的混合标准溶液。混合标准溶液于4 ℃下避光保存，保存期为1个月。

1.2.2 液相色谱条件

色谱柱：Poroshell 120，EC-C18柱（2.1×100 mm，2.7 μm）；柱温40.0 ℃；进样量：8 μL；流速：0.4 mL/min；流动相和梯度洗脱条件见表1。

表1 流动相及梯度洗脱参考条件表

1.2.3 质谱条件

电离方式：电子喷雾离子源（H-ESI），采用正负离子模式切换采集数据；电喷雾电压：正离子模式3 500 V，负离子模式3 000 V；鞘气：27 Arb；辅助气：2 Arb；吹扫气：0 Arb；离子传输管温度：270 ℃；喷针温度：300 ℃；扫描方式：SRM模式（即选择反应监测模式，Selected Reaction Monitoring）。

1.2.4 样品前处理方法

准确称取匀浆状样品6.00 g于50 mL具塞塑料离心管中，加入6.0 mL乙酸铵缓冲液（pH=3.0），涡旋混合30 s，避光超声提取10 min。再加入4 g无水硫酸钠、0.1 mL甲酸、10.0 mL乙腈，涡旋混合2 min，以10 000 r/min离心5 min，吸取上清液于50 mL棕色梨形瓶中。往离心管中加入10.0 mL乙腈，重复提取1次，合并提取液于50 mL棕色梨形瓶中。

提取液于40 ℃旋转蒸发至小于5 mL，转移并定容至5 mL，加入到DSPE净化管中，用1 mL乙腈润洗容量瓶，同时转移至DSPE净化管中，涡旋混合1 min，5 000 r/min离心5 min，吸收上清液1 mL，60 ℃氮气吹至近干，用1 mL流动相（0.2%甲酸+79.8%水+20%乙腈）溶解，经0.2 μm滤膜过滤，供高效液相色谱三重串联四级杆质谱测定。

1.2.5 方法有效性考察

1.2.5.1 线性关系考察

采用空白基质提取液配制标准曲线定量，配制成10、20、50、100 μg/L和200 μg/L共5个浓度点，以进样浓度X(μg/L)为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。

1.2.5.2 灵敏度的考察

将加标浓度为30 μg/L的20种混合标准溶液进行测定，以色谱图中3倍信噪比（S/N=3）为方法检出限（LOD），以10倍信噪比（S/N=10）为方法定量限（LOQ）。

对每种化合物分别采用正、负离子模式进行优化后，20种化合物经优化后的质谱参数见表2。

1.2.5.3 精密度与加标回收率的考察

在空白基质中以50、100、150 μg/L 3个不同浓度点添加20种混合标准溶液，冷冻存放24 h，解冻后按

1.2.4 的方法进行加标回收实验，按1.2.2和1.2.3的仪器方法进行仪器分析，每个水平重复进样6次。

2 结果与分析

2.1 SRM模式优化结果

表2 20种兽药的保留时间、质量分析参数表

上接表2

2.2 方法有效性考察

2.2.1 线性关系考察

按1.2.5.1方法操作，计算线性回归方程，结果表明，20种兽药组分在10～200 μg/L范围内有良好的线性关系，其相关系数均大于0.995。

2.2.2 灵敏度的考察

按1.2.5.2方法操作，结果表明，20种兽药组分的定量限（LOQ）在0.08～2.15 μg/kg范围内，每种化合物具体的定量限见表3。

表3 20种兽药的定量限、平均回收率、精密度表（n=6）

2.2.3 精密度与加标回收率的考察

经添加回收实验，20种兽药组分中3个加标浓度点的加标回收率为71.5%～92.3%，相对标准偏差（RSD）为3.5%～11.3%，具体见表3。

从表3可看出，本实验分析方法的准确度、精密度、灵敏度均满足国内外对多兽药残留分析测定的要求。

3 结论

本实验利用高效液相色谱-质谱联用仪测定腊肉制品中的20种兽药残留，通过酸性条件下避光提取及使用DSPE净化管进行净化，采用选择反应监测（SRM）方式进行数据采集，建立了同时检测20种兽药组分残留的方法，做到了一次提取同时检测磺胺类、氟喹诺酮类、抗生素类药物残留，从而提高了检测效率与准确度，满足实际工作分析测定的需求。