血液制品病毒灭活/去除方法概述

郑敏 刘亚绒 徐涛

【摘 要】目前，随着人们对血液制品的关注度越来越高，保障其安全性成为血液制品企业首要做到的重要内容，并且需要采取措施解决血液制品生产过程中的病毒。基于此，文章介绍了几种血液制品病毒灭活/去除方法，希望给相关人员提供参考意见。

【关键词】血液制品；病毒灭活；病毒去除；方法

目前，血液制品的种类在分离纯化工艺的发展下不断增多，为了提高血液制品的应用率，根据国家食品药品监督管理总局发布的相关规定，采取有效的血液制品病毒灭活/去除方法如物理法和化学法，在一定程度上提高了血液制品的安全性，同时，也为血液制品企业带来了巨大的经济效益。

一、血液制品中的几种病毒

血液制品因其不可替代的疗效和安全性在维护人们的生命健康中发挥着重要的作用，保障血液制品的病毒安全性是血液制品安全与质量控制的关键。目前，可经血/血液制品传播的病毒有甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、人免疫缺陷病毒（HIV）、人类细小病毒（B19），巨细胞病毒（CMV）以及人类朊病毒。因此，为提高血液制品的安全性，需要在血浆病原体中进行筛查并且对原料血浆检疫期进行有效管理，不断加强血液制品病毒灭活/去除的方法，从而实现有效的血液制品管理，并降低或是避免经血液途径传播的疾病，保证血液制品的质量。

二、血液制品病毒灭活/去除的方法

目前，对血液制品的病毒进行灭活和去除的基本方法有物理法和化学法，其中物理法主要是热处理法，包括湿热法（巴斯德法）、干热法（60℃72h，80℃72h）、蒸汽加热法（将湿润的冻干产品暴露于60℃、1119mPa的热蒸汽中进行病毒灭活10h）以及纳米膜过滤等方法；而化学法主要是低pH值孵放法、有机溶剂/表面活性剂法（S/D法）等。以下是对血液制品病毒灭活/去除的方法的具体分析。

（一）物理法

1.湿热法

湿热法也称巴斯德法，该方法的基本原理是在适宜的温度下，加快对病毒结构的破坏速率，并且该速率应大于蛋白质结构的破坏速率，由此实现血液制品病毒的有效灭活/去除。目前，该方法被广泛应用在生产静脉注射免疫球蛋白（IVIG）、因子Ⅷ、因子Ⅸ以及纤维蛋白原等方面。值得注意的是需要满足一定的条件，即无稳定剂、低盐、酸性的环境下进行。另外，在近50年的临床使用结果及近来的动物实验均证实，白蛋白在溶液状态下经60℃、10h加热处理，即巴氏消毒后，不仅能灭活乙肝病毒（HBV），也能灭活丙肝病毒（HCV）和人免疫缺陷病毒（HIV），使白蛋白成为在病毒安全方面最可靠的一种血液制品。

2.干热法

血液制品病毒灭活/去除物理法中的干热灭活法，就是将冻干后的制剂再进行加热处理，对血液制品中的病毒进行干热灭活的方法。一般情况下常用的干热法为：60℃～80℃、10h～72h加热法以及80℃、72h加热法。另外，在对FⅧ冻干浓制剂和凝血酶原复合物进行热处理时，需要使用80℃、72h干热法，因为在20世纪80年代初期就已证实其他热处理法无法实现对其的有效灭活。当然除了对FⅧ冻干浓制剂和凝血酶原复合物的病毒有效灭活，还对HBV、HCV、HIV等能够实现其独特的疗效。

3.纳米膜过滤法

纳米膜过滤病毒去除法的基本原理为：使用在15～45nm之间的滤膜对血液制品溶液进行过滤，并利用筛分原理在纳米膜过滤中将尺寸较大的病毒或其他病原体留在纳米膜上，而小于濾膜孔径的蛋白产继续留在溶液中。纳米膜过滤法最早被应用在20世纪90年代初、中期，到目前为止纳米膜过滤法已经发展成为一种较为成熟、有效、以及稳定的病毒去除方法。目前，在相关病毒去除专家的深入研究中，将纳米膜过滤法与巴氏消毒法进行结合，并以猪细小病毒作为模拟病毒，结果发现通过孔径为20nm的纳米滤膜后病毒数量滴度下降了4log，由此证明纳米膜过滤结合巴氏消毒法对病毒灭活的有效性，并且能够投入新的免疫球蛋白制品病毒去除工作，还在一定程度上提高了目标蛋白产品的安全性，使蛋白生物活性回收率能够达到90%～95%。

（二）化学法

1.低pH值孵放法

低pH值孵放法的基本原理是在pH值低于4的环境条件下，使病毒表面的细胞抗原电荷发生改变，由于蛋白质的空间结构发生不可逆变性，使得病毒丧失与细胞受体结合的能力，从而使得病毒无法进入细胞，更对细胞无法侵染。另外，在低pH值孵放法实施时需要满足的灭活条件为pH值是4且温度为24℃，以此来实现血液制品病毒的有效灭活/去除。

2.有机溶剂/表面活性剂（S/D）法

有机溶剂/表面活性剂S/D法最早应用于20世纪80年代中期，因其有效的灭活/去除血液制品病毒的特目前仍在沿用。有机溶剂/表面活性剂（S/D）法的基本原理是：根据有机溶剂和非离子表面活性剂的混合物能够破坏脂包膜病毒的类脂膜的特点，应用此方法加快类脂从病毒表面脱落速度，并使病毒失去其黏附能力，有效避免病毒感染细胞。举一个应用S/D法进行病毒灭活的例子，在高纯度的凝血因子中应用S/D法进行病毒灭活时，为实现有效灭活病毒的目的，需要以0.3%的TNBP和1%的Triton-X100为S/D试剂，并且在22℃条件下对凝血因子制品中的牛痘病毒、单纯疱疹病毒、辛德毕斯病毒等模拟脂包膜病毒进行有效的灭活。另外，S/D法也可以用于凝血因子制品、蛋白酶抑制剂、人免疫球蛋白等血液制品的脂包膜病毒的灭活。

三、几种病毒灭活方法的灭活效果比较

通过对各种病毒灭活方法的基本原理的具体分析，得出其对血液制品病毒灭活/去除的有效性，表1是对这几种病毒灭活方法灭活效果比较。

以脂包膜病毒和非脂包膜病毒为例，对其进行病毒灭活效果比较，由表可知物理灭活方法既对脂包膜病毒具有良好的灭活效果，也在非脂包膜病毒的灭活中起到一定的作用；而化学灭活方法只对脂包膜病毒灭活具有良好的效果，对非脂包膜病毒则没有灭活效果。

四、结语

综上所述，为保证血液制品的安全性，应当对血液制品病毒的有效灭活/去除环节格外重视。同时，针对病毒本身具有的不易去除的特点，采取适当、有效的病毒灭活/去除方式以达到高效灭活/去除病毒的目的。另外，随着经济的不断发展，在血液制品企业需要不断更新病毒去除/灭活工艺，从整体上实现更好的病毒去除/灭活效果。

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