江苏省徐州市部分猪场母猪弓形虫感染抗体检测

2018-09-07 02:29王玉燕昌莉丽张林吉汪鹏旭王善辉
中国动物检疫 2018年9期
关键词:灭鼠弓形虫徐州市

王玉燕,昌莉丽,张林吉,王 飞,汪鹏旭,王善辉

(1. 徐州生物工程职业技术学院,江苏徐州 221006;2. 拜耳(四川)动物保健有限公司,四川成都 610000)

弓形虫病是一种人兽共患寄生虫病,呈世界性分布,属于我国二类动物疫病。该病病原是弓形虫科、弓形虫属的刚第弓形虫(Toxoplasma gondii),寄生于动物和人有核细胞内。猫是弓形虫唯一终末宿主,其中间宿主范围广泛,包括人、畜、禽及野生动物等,养殖动物中以猪最多见。临床上各阶段猪只均可感染弓形虫,患猪主要表现高热、呼吸困难和神经症状,以及公猪睾丸肿大,妊娠母猪流产或产死胎等症状[1],多为轻症和隐性感染,但在免疫力低下时,隐性感染可表现病症。

为了解徐州市母猪群的弓形虫感染及流行状况,2017年5—6月,采集徐州市5个猪场的321份母猪血清进行弓形虫抗体检测,为该地区猪场弓形虫病防控提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

选择徐州市5个未免疫弓形虫疫苗的规模化猪场(编号A、B、C、D、E),随机采集外表健康母猪的前腔静脉血液样品321份,其中A场76份、B场83份、C场67份、D场45份、E场50份。现场询问该场猪群有无猫接触史,有无灭鼠措施,是否进行过抗虫药物预防。

1.2 待检血清制备

按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血,无污染。血清样品保存时间在1周内的,置于2~8 ℃冰箱保存,保存时间超过1周的,置于-20 ℃冰箱保存。冰箱内保存的血清样品应恢复至室温并混匀后再进行抗体检测。

1.3 诊断试剂及仪器

猪弓形虫IgG抗体诊断试剂盒:购自深圳芬德生物技术有限公司;Bio-Rad 9602型全自动酶标仪。

1.4 检测方法及结果判定

采用酶联免疫吸附(ELISA)法,按试剂说明书进行检测。样品A450值大于0.18判为阳性,小于0.18判为阴性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17软件进行统计学分析,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 总体检测情况

徐州市5个规模化猪场的母猪均存在弓形虫血清IgG抗体,场抗体阳性率为100%;321份血清中,检出阳性189份,样品阳性率为58.9%(189/321)。其中,A场抗体阳性率最高,为67.1%(51/76),C场阳性率最低,为38.8%(26/67)。具体结果见表1。

表1 5个猪场弓形虫抗体检测情况

2.2 不同胎次母猪检测情况

7胎及以上母猪的弓形虫抗体阳性率最高,为63.6%,其次为1~2胎母猪,阳性率为63.0%,3~4胎最低,为46.5%。具体结果见表2。

表2 不同胎次母猪弓形虫抗体检测情况

2.3 有无灭鼠措施猪群检测情况

未采取灭鼠措施的A、B、E场平均个体抗体阳性率为64.1%,采取灭鼠措施的是C、D场平均个体抗体阳性率为49.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表3。

表3 有无灭鼠措施母猪群抗体检测情况

2.4 有无药物预防措施猪群检测情况

5个猪场中,只有C场做过磺胺类药物预防,个体抗体阳性率为38.8%,A、B、D、E场均未做过药物保健,个体抗体阳性率为64.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表4。

表4 有无药物预防措施猪群抗体检测情况

3 分析与讨论

猪感染弓形虫后不表现临床症状,但可终身带虫,其是否发病取决于虫体毒力、感染数量、感染途径及宿主抵抗力等,一旦发病可造成猪成批死亡,给养猪业带来重大经济损失。因此猪弓形虫病监测对养猪业健康发展意义重大。

本次弓形虫IgG抗体检测采用的是商品化弓形虫病ELISA诊断试剂盒。目前,应用于猪弓形虫病检测的方法有多种,包括病原学诊断、免疫学诊断、分子生物学诊断,其中最可靠的是病原学诊断。但病原学诊断方法敏感性低,症状轻微或即将耐过的病猪,以及使用磺胺类药物治疗过的病猪不易检出弓形虫,容易导致漏检,并且该方法在染色镜检和病料采集时存在局限性,而且费时费力。免疫学诊断方法是利用弓形虫感染猪体后在猪体内释放的循环抗原(弓形虫代谢或者裂解产物)或者产生的抗弓形虫抗体进行检测诊断,包括间接荧光抗体试验(IFAT)、Sabin-Feldman染色试验(SFDT)、间接血凝试验(IHAT)、改良凝集试验(MAT)、金标免疫层析法、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。其中,ELISA是弓形虫病诊断检测的最常用方法。杨亚晓等[3]比较金标法、IHAT和ELISA,发现ELISA检测弓形虫 IgG 抗体的敏感性和特异性较高,适合于大规模的弓形虫 IgG 抗体筛查。罗才庆等[4]对 ELISA和IHAT比较发现,ELISA更适用于猪弓形虫抗体检测。因此本研究采用了弓形虫病ELISA诊断试剂盒。

由于被检测猪场均未进行弓形虫疫苗免疫,因此血清IgG抗体阳性就表明已经感染了弓形虫。本次检测发现,徐州市5个猪场均存在弓形虫血清IgG抗体阳性,个体阳性率达58.9%,表明5个猪场的母猪存在较严重的弓形虫感染。经临床检查,被检测母猪均未表现弓形虫感染症状,属于隐性感染。文献查阅发现,关于徐州市猪弓形虫血清学调查的报道较少。孔猛等[5]对江苏省部分地区动物弓形虫病进行血清学调查,发现徐州市睢宁县育肥猪弓形虫阳性率为11.1%。而国内其他地区有关母猪弓形虫血清学调查的报道较多。华利忠等[6]报道黑龙江、辽宁、河北和山西的母猪弓形体阳性率分别为63.24%、52.55%、50.92%和45.45%。杨娜等[7]采用改良凝集试验(MAT),对从辽宁省沈阳、辽阳、大连等14市采集的2 152份血清进行弓形虫抗体检测,发现繁殖母猪阳性率为33.9%,普遍高于育肥猪(13.4%)。邵晓冬等[8]采集河南洛阳地区规模化养殖场和散养户母猪、育肥猪、保育猪的血清样品410 份,应用 ELISA 方法检测弓形虫IgG 抗体,发现母猪弓形虫血清抗体阳性率达35.4%,育肥猪和保育猪的阳性率分别是34.5% 和22.2%。邵金龙等[9]对厦门市部分猪场猪弓形虫感染情况进行血清学调查,发现35日龄猪的阳性率为22.02%,90日龄猪的阳性率为31.41%,哺乳母猪的阳性率为67.52%,各猪场不同日龄猪都有一定程度的弓形虫感染,且哺乳母猪感染率最高。虽然抗体检测方法不同会造成结果不同,但上述报道中的母猪弓形虫抗体阳性率与本次检测结果基本一致,阳性率大多在35%~60%之间,表明弓形虫感染在母猪群中普遍存在。

国内多数报道认为,弓形虫IgG抗体阳性率随母猪胎次增加而上升。华利忠等[6]报道东北及华北地区猪弓形虫IgG抗体阳性率从后备母猪的22.73%上升到6胎次母猪的75.24%。鹿双双等[10]针对东北、华北地区22个猪场的657份样本,采用间接ELISA的方法进行猪弓形虫抗体检测,发现2胎次以上母猪阳性率明显高于后备母猪及1胎次母猪。本次抗体检测结果显示,1~2胎次的阳性率反而高于3~6胎次,这可能与各胎次的样本容量存在差异有关。

目前商品化弓形虫疫苗主要针对绵羊和山羊,而针对猪、猫和人的弓形虫疫苗依然较为缺乏[11],因此药物预防仍是弓形虫病防控的重要措施。本次检测发现,做过磺胺类药物预防的母猪抗体阳性率明显偏低,因此经产母猪使用药物来预防和净化弓形虫十分必要。猪的年龄、性别、饲养条件,以及外界环境中是否有猫、鼠类等多种因素都可影响猪弓形虫感染[12]。本次抗体检测发现,猪场内控制啮齿动物活动,实施灭鼠措施母猪的弓形虫抗体阳性率远低于无灭鼠措施母猪,说明控制弓形虫感染风险因素对于弓形虫病防控具有重要意义。C场的抗体阳性率明显低于其他猪场。分析发现,只有该场既采取了灭鼠措施,又进行了磺胺类药物预防,由此也例证了这些措施综合运用的有效性。

4 结论

综上所述,弓形虫隐性感染在徐州市的5个规模猪场母猪群中普遍存在,且胎次多,无灭鼠措施,未进行药物预防母猪的感染率更高。因此,这些猪场应严格落实生物安全措施,禁止猪群与猫、鼠类等接触,采取灭鼠和防鼠措施,定期进行药物预防等,严格控制弓形虫感染风险因素,尤其是母猪群。

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