甜瓜枯萎病拮抗菌的筛选及鉴定

余小兰　邹立飞　邹雨坤　李光义　李晓亮　李勤奋

摘要：【目的】筛选对甜瓜枯萎病菌有较强拮抗活性的菌株，并对拮抗菌株进行分类鉴定，为丰富热带地区甜瓜枯萎病生防菌资源库及田间应用提供参考。【方法】以前期筛选获得的82株菌株为试验材料，通过平板对峙、继代培养、发芽率及盆栽试验筛选出对甜瓜枯萎病菌有较强拮抗活性的菌株，并通过形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选获得的菌株进行分类鉴定。【结果】筛选出一株对甜瓜枯萎病菌有较强拮抗活性的放线菌菌株D2，其对枯萎病的防治效果达73.53%。D2菌株可形成气生菌丝和孢子丝，孢子丝呈螺旋形，孢子卵呈圆形，且与利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）聚于同一分支中，其同源性达99.6%；综合D2菌株的形态特征及生理生化特性，可鉴定其为利迪链霉菌（S. lydicus）。【结论】D2菌株对甜瓜枯萎病有较好的防治效果，具有开发成生物农药或生物肥料的潜力。

关键词： 甜瓜枯萎病；拮抗菌；筛选；鉴定；热带地区

中图分类号： S182 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2018）06-1118-07

Abstract：【Objective】Antagonistic bacteria with strong antagonistic effect to fusarium wilt of melon was screened and identified to provide reference for enriching the resources of biocontrol bacteria against melon fusarium wilt in tropical zone. 【Method】Eighty-two strains obtained in preliminary screening were used as experimental material， and antagonistic bacteria against melon fusarium wilt were screened by using plate confront culture， successive transfer culture， germination experiment and pot experiment.The strains were classified through characteristics in morphology， physiology and biochemistry and information of 16S rDNA. 【Result】A strain of actinomycetes D2 with strong antagonistic effect to melon fusarium wilt was screened and it had 73.53% control efficiency to fusarium wit of muskmelon. Strain D2 would form aerial hyphae and fibrillae of spores， and fibrillae of spores were spiral， and spore eggs were round. Strain D2 and Streptomyces lydicus were clustered in the same branch with 99.6% homology. Taking the morphological characters and physiological and biochemical characters of strain D2 into consideration， strain D2 was finally identified as S. lydicus. 【Conclusion】Strain D2 has strong antagonistic effect to fusarium wilt of melon and worth to be developed as biological pesticides and fertilizers.

Key words： melon fusarium wilt； antagonistic bacteria； screening； identification； tropical zone

0 引言

【研究意義】甜瓜是我国广泛栽种的经济作物之一（张永平等，2017），据中国农业统计年鉴数据显示，2016年我国甜瓜种植面积超过48万ha，产量达1570万t；海南省2016年甜瓜种植面积为2823 ha，产量5.69万t。在甜瓜种植面积、产量和效益稳步上升的同时，甜瓜土传病害尤其是枯萎病日益严重，极大地限制了甜瓜产业的可持续发展。目前，防治甜瓜枯萎病的主要途径有化学药剂防治（周小林等，2007；杨长成等，2010；张静和胡立勇，2012；?zbah?e et al.，2014）、种植抗病品种（王双伍等，2010）、农业措施（李瑞琴，2004；Egamberdiyeva et al.，2004；尹守恒等，2012）及生物防治（李旭等，2014；Madadkhah et al.，2014）等。化学药剂对枯萎病有一定防效，但易使枯萎病病原菌产生抗药性，造成甜瓜果实安全隐患。生物防治因生态环保且经济投入较少而受到人们的广泛关注（Cao et al.，2016）。因此，挖掘甜瓜枯萎病的生防菌资源，对甜瓜产业的健康发展具有重要意义。【前人研究进展】近年来，国内外学者对甜瓜枯萎病的生物防治进行了研究，已报道的能有效抑制镰刀菌而防治枯萎病的生防菌株有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）（黄建凤等，2016；李欢等，2017）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）（孙广正等，2015）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）（Ainhoa et al.，2009；Gava and Pinto，2016）、草酸青霉（Penicillium oxalicum）（Cal et al.，2009；白飞荣等，2014）、多粘类芽孢杆菌（GenBank accession number GQ849013）（赵青云，2011）、放线菌S14（邹立飞，2013；姚辉，2014）等。黄艳青等（2009）研究发现，接种木霉菌（Trichoderma spp.）制剂T23和Ta22可显著抑制甜瓜枯萎病的发生，且相对防效可达79%。牛梦天（2016）从土壤、微生物菌剂及生物肥料中筛选出对黄瓜枯萎病有较高抑制效果的多粘芽孢杆菌D1和解淀粉芽孢杆菌D3，其抑菌圈直径均大于3 cm。李晨楚等（2017）筛选出一株枯草芽孢杆菌B43，该拮抗菌对香蕉枯萎病有较好的防治效果。【本研究切入点】目前，针对我国热带地区甜瓜枯萎病生物防治的研究较少，有效的生防菌资源非常有限，且已报道的枯萎病生防菌多为细菌和真菌，因而有必要分离筛选更多不同类型的微生物功能菌。【拟解决的关键问题】对本课题组前期筛选获得的可对甜瓜枯萎病菌产生抑菌带的82株菌株进行平板对峙、继代培养、发芽率及盆栽试验，并通过形态学、生理生化特性、16S rDNA序列分析及构建系统发育树进行鉴定，以期为热带地区甜瓜枯萎病生防制剂研发提供菌种资源，为有效控制甜瓜枯萎病提供参考。

1 材料与方法

1. 1 試验材料

供试枯萎病菌：由中国热带农业科学院生态农业研究中心保存。供试拮抗菌：从海南省11个县（市、地区）露地栽培的厚皮甜瓜根际土壤中分离获得，共82株菌株，保存于中国热带农业科学院生态农业研究中心。甜瓜品种：南海蜜。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 拮抗菌筛选

1. 2. 1. 1 平板对峙试验 以甜瓜枯萎病菌为指示菌，对供试82株菌株进行平板对峙试验，计算拮抗菌的拮抗指数。拮抗指数=（抑菌圈半径-拮抗菌半径）/拮抗菌半径

1. 2. 1. 2 继代培养试验 以拮抗指数变化为依据，对平板对峙试验筛选获得的拮抗菌进行室内继代培养，从而筛选出对甜瓜枯萎病菌拮抗作用能稳定遗传的菌株。

1. 2. 1. 3 种子发芽率试验 将继代培养试验筛选获得的拮抗菌株制成菌悬液进行甜瓜种子发芽率试验，以未添加拮抗菌的培养基为对照，每处理50粒种子，重复3次。种子处理方法：将饱满且大小一致的甜瓜种子放入10% H2O2溶液中消毒5 min，用蒸馏水清洗2～3次后放入菌悬液中浸泡2 h，取出种子均匀置于铺有湿润无菌滤纸的灭菌培养皿中，将培养皿放入恒温培养箱中，30 ℃培养36 h后统计种子发芽数，计算种子发芽率。

1. 2. 1. 4 盆栽防效试验 选择拮抗效果较好的菌株（D1、D2和H3）作为拮抗菌，以甜瓜枯萎病菌为试验病原菌，进行甜瓜枯萎病防治效果盆栽试验。试验设19个处理，每处理9盆，每盆种植甜瓜1株，接菌量均为10 mL/株，3次重复，具体试验设计见表1。甜瓜枯萎病分级标准参照相关文献（李瑞琴，2004）。

1. 2. 2 拮抗菌鉴定及系统发育进化分析 拮抗菌的形态观察及生理生化测定方法参照《伯杰细菌鉴定手册》（Buchanan and Gibbons，1995）。拮抗菌的16S rDNA测序及系统发育进化分析：菌株16S rDNA引物设计、PCR扩增参照Sambrook和Russell（2002）、邹立飞（2013）的方法。PCR反应体系50.0 ?L：浓缩反应缓冲液5.0 ?L，dNTP混合物（0.2 mol/L）1.0 ?L，Tap DNA聚合酶0.5 ?L，氯化镁（1.5 mol/L）5.0 ?L，上、下游引物（1 ?mol/L）各1.0 ?L，DNA模板1.0 ?L，无菌水35.5 ?L。测序分析：将测得的16S rDNA序列在NCBI数据库（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中进行相似性检索，在MEGA7.0中采用ClustalW将拮抗菌及其同源序列对齐，进而构建Neighbor-Joining进化树，分析拮抗菌与其他已报道菌株间的系统发育进化关系。

2 结果与分析

2. 1 拮抗菌筛选结果

2. 1. 1 平板对峙试验结果 由表2可知，在初筛得到的82株菌株中，拮抗指数>2.00的菌株有9株，其拮抗指数排序为D2>D3>H5=H3>D1>H6>H20>H7>H2。

2. 1. 2 继代培养试验结果 对2.1.1中筛选获得的9株菌株D2、D3、H5、H3、D1、H6、H20、H7和H2进行继代培养，各菌株子代拮抗病原菌能力如图1所示。由图1可知，各菌株随着继代数的增加，其拮抗能力逐渐下降，当经历到20代时，只有D1、D2、H3、H5和H6菌株对病原菌仍有一定的拮抗作用，故可判定D1、D2、H3、H5和H6菌株对甜瓜枯萎病菌的拮抗性遗传较稳定，有利于拮抗菌在生产实践应用中持续发挥拮抗作用。

2. 1. 3 种子发芽率试验结果 经菌株D1、D2、H3、H5和H6处理后的甜瓜种子发芽率结果如图2所示。由图2可知，经菌株D1、D2和H3处理后的甜瓜种子发芽率分别为86.7%、93.3%和94.4%，与CK的种子发芽率（90.0%）差异不显著（P>0.05），故可判定D1、D2和H3菌株不影响甜瓜种子发芽。因此，选择D1、D2和H3菌株为盆栽防效试验菌，研究其对甜瓜枯萎病的防治效果。

2. 1. 4 盆栽防效试验结果 试验结果（表3）表明，经D2菌株处理的甜瓜发病情况均轻于D1和H3菌株处理，其中D2-6处理的甜瓜发病最轻，其对枯萎病的防效达73.53%，故相对于D1和H3菌株，D2菌株拮抗甜瓜枯萎病效果最好。试验还发现，先接种拮抗菌后接种病原菌的处理D1-4、D1-5、D1-6、D2-4、D2-5、D2-6、H3-4、H3-5和H3-6，其病情指数均低于先接种病原菌后接种拮抗菌的处理，说明在前期使用拮抗菌预防甜瓜枯萎病的效果更佳。

2. 2 拮抗菌鉴定结果

同步平板对峙试验、继代培养、发芽率试验及盆栽试验均显示D2菌株对甜瓜枯萎病菌的防治效果最佳，故对D2菌株进行分析鉴定。由图3可知，D2菌株可形成气生菌丝和孢子丝，孢子丝呈螺旋形，孢子卵呈圆形。从图4可看出，D2菌株与Streptomyces lydicus NBRC 13058T（AB184281）和S.chattanoogensis DSM 40002T（AJ621611）的亲缘关系最近，且在NBCI的比对中其同源性分别达99.6%和99.5%。由D2菌株的形态特征（表4）及生理生化特性（表5）比对可知，D2菌株与S. lydicus NBRC 13058T（AB184281）、S. chattanoogensis DSM 40002T（AJ621611）、S. sioyaensis NRRL B-5408T（DQ026654）、S. albofaciens JCM 4342T（AB045880）和S.chrestomyceticus DSM 40545T（AJ621609）等菌株亲缘关系较近。综上所述，鉴定D2菌株为利迪链霉菌（S. lydicus）。

3 讨论

放线菌分布广泛，自1877年发现以来，其产生的活性物质已广泛应用于医药、食品及环境保护等领域，为人类做出了巨大贡献（黄亚丽等，2005）。目前，放线菌的分类需综合化学分类和分子分类等多种分类方法方能确定其精确位置（Hffrench et al.，2007；张茹萍，2011；陆丹丹，2016；田慧，2017）。本研究首先采用经典分类方法（形态及生理生化特征）鉴定D2菌株，发现该菌株具有典型的链霉菌属形态特征；随后通过16S rDNA测序及构建系统发育进化树，发现D2菌株与利迪链霉菌聚于同一分支中，其同源性达99.6%。D2菌株能使明胶液化、牛奶凝固胨化，能利用葡萄糖、果糖、甘露醇，不能使淀粉水解、硝酸盐还原，不产生硫化氢和黑色素，不能利用木糖和淀粉；而利迪链霉菌能使淀粉水解，能利用木糖，弱利用淀粉。由此推测，D2菌株与利迪链霉菌可能属于不同的种，但目前尚不能判定D2菌株是否为利迪链霉菌的一个新种，需要通过与模式种的DNA杂交后进一步分析。

随着研究的深入，近年来放线菌对植物病害的防治作用也逐渐被人们发现和认识。周婧等（2008）从黄瓜、南瓜和甜瓜的根际土壤中筛选到一株生防菌H-5，其对温室甜瓜枯萎病的防效达75.6%。沈文渊（2012）对黄瓜、冬瓜、西瓜和苦瓜枯萎病进行生物防治研究，筛选出放线菌14号对上述4种瓜类枯萎病的抑制率分别为72.11%、70.09%、54.27%和56.41%。梁银等（2013）从南京紫金山麓土壤中分离筛选出一株放线菌，其对黄瓜枯萎病的防治效果为51.85%。吕超（2015）对不同西瓜连作地块进行生防处理，发现接种放线菌Act1可显著降低连作大棚西瓜枯萎病的发病率。庄令（2017）从90株深海链霉菌中筛选出24株对香蕉枯萎病菌具有拮抗活性的菌株，活性率高达26.7%，其中菌株220362的拮抗活性强、嗜盐性高，产生的拮抗物质稳定，初步鉴定为链霉菌属的1个新种。本研究筛选获得的D2菌株对甜瓜枯萎病的最高防效可达73.53%，与上述报道的防治效果基本一致。

目前，报道较多可用于防治甜瓜枯萎病的微生物主要有细菌（庄敬华等，2008；赵青云，2011；黄建凤等，2016）和真菌（黄艳青等，2009；Ainhoa et al.，2009；白飞荣等，2014），而本研究筛選获得的D2菌株属于放线菌，对于丰富枯萎病生防菌资源库及利用放线菌防治甜瓜枯萎病有重要指导意义。另外，利迪链霉菌能产生许多次生代谢产物，如利迪霉素（Lydimycin）、利迪链菌素（Streptolydigin）和苹果酸氧霉素（Malioxamycin）等抗生素（张致平和姚天爵，2005；石玲玲等，2017），其对细菌和真菌的繁殖有极大抑制作用。同时，在利迪链霉菌发酵液所产生的抑菌活性物质中，涉及到的酶多为β-1，3-葡聚糖酶和几丁质酶，其中以β-1，3-葡聚糖酶研究较多（Liu and Balasubramanian，2001；陈恳，2016）。β-1，3-葡聚糖酶能分解真菌细胞壁中的葡聚糖，从而使细胞壁厚度变薄，导致细胞壁暴露，致使细胞因渗透压差而导致死亡（Georgopapadakou，2001）。本研究仅对D2菌株对甜瓜枯萎病抑制效果进行初步研究，下一步将对D2菌株规模化培养条件、抑菌活性物质鉴定及田间应用进行探索，从而为利用该菌开发新的生物农药或生物肥料提供技术指导。

4 结论

本研究筛选出一株对甜瓜枯萎病菌有较强拮抗活性的放线菌D2菌株，经形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析，确定D2菌株为利迪链霉菌（S. lydicus），该放线菌对甜瓜枯萎病有较好的防治效果，具有开发成生物农药或生物肥料的潜力。

参考文献：

白飞荣，刘洋，李辉，姚粟，曹艳花，张欣，程池. 2014. 香山黄栌枯萎病叶片真菌的分离与鉴定[J]. 生物学通报， 49（5）：51-53. [Bai F R， Liu Y， Li H， Yao S， Cao Y H， Zhang X， Cheng C. 2014. Isolation and identification of leaf fungi in the leaf of Xiangshan smoke tree[J]. Bulletin of Biology， 49（5）：51-53.]

R. E. 布坎南，N.E. 吉布期. 1995. 伯杰细菌鉴定手册[M].中国科学院微生物研究所《伯杰细菌鉴定手册》翻译组译. 第8版. 北京：科学出版社：1037-1182.[Buchanan R E，Gibbons N E. 1995. Bergeys Manual of Systemaic Bacteriology[M]. Translated by Bergeys Manual of Syste-maic Bacteriology Translation Group， Institute of Microbiology， Chinese Academy of Sciences. The 8th Edition. Beijing：Science Press：1037-1182.]

陈恳. 2016. 利迪链霉菌 E12发酵液及其粗提物的抑菌活性初探[J]. 农药学学报， 18（2）：258-262. [Chen K. 2016. Study on the antagonistic activity of fermentation broth and its crude extract produced by Streptomyces lydicus E12[J]. Chinese Journal of Pesticide Science，18（2）：258-262.]

黄建凤，张发宝，逄玉万，黄巧义，唐拴虎，付弘婷，杨苞梅. 2016. 两株香蕉枯萎病拮抗细菌的筛选及抑菌机理[J].微生物学通报，44（4）：835-844. [Huang J F， Zhang F B， Pang Y W， Huang Q Y， Tang S H， Fu H T，Yang B M. 2016. Inhibition of banana Fusarium wilt by two biocontrol agents[J].Microbiology China， 44（4）：835-844.]

黄亚丽，甄文超，张丽萍，张根伟，田连生，程辉彩，史延茂，李书生. 2005. 草莓重茬病菌的分离及其生物防治[J]. 生物技术，15（6）：74-76. [Huang Y L， Zhen W C， Zhang L P，Zhang G W，Tian L S，Cheng H C，Shi Y M，Li S S. 2005. Separated of causal organisms and biocontrol of strawberry（Fragria ananassa Dach） replant disease[J].Biotechnology， 15（6）：74-76.]

黄艳青，刘学军，徐韶，庄敬华. 2009. 木霉菌对甜瓜枯萎病的防治[J]. 农业科技与装备，（1）：31-32. [Huang Y Q， Liu X J， Xu S， Zhuang J H. 2009. The control effect of Trichoderma against muskmelon wilt[J]. Agricultural Science & Technology and Equipment，（1）：31-32.]

李晨楚，张荣意，康迅，靳鹏飞，谭志琼. 2017. 枯草芽孢杆菌B43对香蕉枯萎病菌抑菌活性及其活性成分分析[J]. 中国南方果树， 46（3）：57-63. [Li C C， Zhang R Y， Kang X， Jin P F， Tan Z Q. 2017. The antimicrobial activity and its active component analysis of Bacillus subtilis B43 against banana blight[J]. South China Fruits， 46（3）：57-63.]

李欢，曹雪梅，陈茹，贾杰，马桂珍，暴增海. 2017. 海洋多黏类芽孢杆菌L1-9菌株粉剂对黄瓜的促生防病作用[J]. 河南农业科学，46（12）：65-69. [Li H，Cao X M，Chen R，Jia J，Ma G Z， Bao Z H. 2017. Effect of marine Paenibacillus polymyxa L1-9 powder on cucumber growth and di-sease occurrence[J]. Journal of Henan Agricultural Scien-ces，46（12）：65-69.]

李瑞琴. 2004. 甜瓜枯萎病病原學及防治技术研究[D]. 杨凌：西北农林科技大学. [Li R Q. 2004. Studies on the pathology & control of Fusarium wilt of melonis[D]. Yang-ling： Northwest A & F University.]

李旭，赵娟，徐帅，吴学宏. 2014. 甜瓜枯萎病及其综合防治研究进展[J]. 中国植保导刊，34（12）：17-21. [Li X， Zhao J， Xu S， Wu X H. 2014. Research progress on Fusarium wilt of muskmelon and its integrated control[J]. China Plant Protection， 34（12）：17-21.]

梁银，张谷月，王辰，王世梅，沈其荣. 2013. 一株拮抗放线菌的鉴定及其对黄瓜枯萎病的生防效应研究[J]. 土壤学报，50（4）：810-816. [Liang Y， Zhang G Y， Wang C， Wang S M， Shen Q R. 2013. Identification and biocontrol effect of a strain of actinomycete antagonistic to wilt disease of cucumber[J]. Acta Pedologica Sinica，50（4）：810-816.]

陆丹丹. 2016. 一株拮抗链霉菌的筛选及活性物质鉴定[D].杭州：中国计量大学. [Lu D D. 2016. Isolation of the antagonist Streptomyces and identification of the active compound[D]. Hangzhou： China Jiliang University.]

吕超. 2015. 生防放线菌Act1防治西瓜枯萎病的田间效果分析[D]. 杨凌：西北农林科技大学. [Lü C. 2015. Analysisi of the field effect on biocontrol actinomycetes 1 preventing watermenlon fusarium wilt[D].Yangling：Northwest A & F University.]

牛梦天. 2016. 黄瓜枯萎病拮抗微生物的筛选及发酵[D]. 石家庄：河北科技大学. [Niu M T. 2016. Screening and fermentation of antagonistic microorganisms against Fusa-rium wilt of cucumber[D]. Shijiazhuang：Hebei University of Science and Technology.]

Sambrook J， Russell D W. 2002. 分子克隆实验指南[M]. 黄培堂译. 第3版. 北京：科学出版社. [Sambrook J， Russell D W. 2002. Molecular Cloning： A Laboratory Manual[M]. Translated by Huang P T. The 3rd Edition. Beijing：Science Press.]

沈文渊. 2012. 瓜类枯萎病菌四种专化型的生物学特性及瓜类枯萎病生物防治研究[D]. 雅安：四川农业大学. [Shen W Y. 2012. Biological characteristics and biological control research on four kinds of gourd Fusarium wilt[D]. Yaan：Sichuan Agricultural University.]

石玲玲，吴慧玲，刘铭，董丹，卢彩鸽，刘伟成. 2017. 利迪链霉菌nsdA基因的克隆及其阻断载体的构建[J]. 生物技术， 27（5）： 409-414. [Shi L L， Wu H L， Liu M， Dong D， Lu C G， Liu W C. 2017. Cloning and disruption vector construction of nsdA in Streptomyces lydicus[J]. Biotechnology， 27（5）： 409-414.]

孙广正，姚拓，赵桂琴，卢虎，马文彬. 2015. 荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望[J]. 草业学报， 24（4）：174-190. [Sun G Z，Yao T，Zhao G Q，Lu H，Ma W B. 2015. Research progress and prospects for controlling plant di-seases using Pseudomonas fluorescens[J].Acta Prataculturae Sinica， 24（4）：174-190.]

田慧. 2017. 尖孢链霉菌SN0280次生代谢产物分离鉴定及抑菌活性研究[D]. 沈阳：沈阳农业大学. [Tian H. 2017. Isolation，identification and antibacterial activities of se-condary metabolites of Streptomyces cuspidosporus SN0280[D]. Shenyang： Shenyang Agricultural University.]

王双伍，李赛群，刘建雄，何科佳，肖光辉，杨筱玲. 2010. 甜瓜空间诱变育种研究初报[J]. 湖南农业科学，（23）：28-30.[Wang S W，Li S Q，Liu J X，He K J，Xiao G H，Yang X L. 2010. Preliminary report of space mutation breeding for melon[J]. Hunan Agricultural Sciences，（23）：28-30.]

杨长成，庄敬华，高增贵，魏汉莲，刘秋晨. 2010. 恶霉灵与多菌灵对甜瓜枯萎病的防治效果[J]. 北方园艺，（7）： 151-153. [Yang C C， Zhuang J H， Gao Z G， Wei H L， Liu Q C. 2010. Control effect of carbendazim and hymexazol on Fusarium oxysporum wilt of melon[J]. Northern Horticulture，（7）：151-153.]

姚辉. 2014. 甜瓜枯萎病高效拮抗放线菌的筛选和特性分析[D]. 长春：吉林农业大学. [Yao H. 2014. Screening and Characteristics of antagonistic Actinomycetes against musk-melon fusarium wilt[D]. Changchun：Jilin Agricultural University.]

尹守恒，刘宏敏，杨宛玉，陈中府，吕爱芹，李纪军，张国娜. 2012. 黄淮地区日光温室厚皮甜瓜与韭菜轮作高效栽培技术[J]. 中国蔬菜，（19）： 57-59. [Yin S H， Liu H M， Yang W Y，Chen Z F，Lü A Q，Li J J，Zhang G N. 2012. The high-efficient cultivation technique of the thick skin melon-leek rotation in greenshouse in Huanghuai Area[J]. China Vegetables，（19）：57-59.]

張静，胡立勇. 2012. 农作物种子处理方法研究进展[J]. 华中农业大学学报，31（2）：258-264. [Zhang J， Hu L Y. 2012. The progress of crops seed treatment[J]. Journal of Huazhong Agricultural University， 31（2）：258-264.]

张茹萍. 2011. 烟草黑胫菌拮抗放线菌的筛选、鉴定及其生防效果研究[D]. 泰安：山东农业大学. [Zhang R P. 2011. Screening and identifying of antagonistic actinomyce against Phytophthora parasitica var. nicotianae and biocontrol effects of the antibiotic[D]. Taian： Shandong Agricultural University.]

张永平，杨少军，许爽，陈幼源. 2017. 不同甜瓜品种在采后贮藏过程中生理与品质变化[J]. 江西农业学报，29（4）：32-35. [Zhang Y P，Yang S J，Xu S，Chen Y Y. 2017. Chan-ges in physiology and quality of different melon varieties during storage[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，29（4）：32-35.]

张致平，姚天爵. 2005. 抗生素与微生物产生的生物活性物质[M]. 北京： 化学工业出版社：108-135. [Zhang Z P， Yao T J. 2005. Bioactive Substances Produced by Antibio-tics and Microorganisms[M]. Beijing： Chemical Industry Press：108-135.]

赵青云. 2011. 抗甜瓜枯萎病生防菌及其生物有机肥的生防机理研究[D]. 南京：南京农业大学. [Zhao Q Y. 2011. The antagonistic bacteria against muskmelon Fusarium wilt disease and biocontrol mechanisms of its bio-organic fertilizer[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University.]

周婧，高增贵，何秀玲，庄敬华，张小飞，吴海云. 2008. 甜瓜枯萎病拮抗内生细菌筛选研究[J]. 北方园艺，（2）：225-227. [Zhou J， Gao Z G， He X L， Zhuang J H， Zhang X F， Wu H Y. 2008. Selection of endophytic bacteria for suppression of melon wilt caused by Fusarium oxysporum[J]. Northern Horticulture，（2）：225-227.]

周小林，杨欣娟，丁广建，包卫红，佘德琴，蔡银杰，陆慧. 2007. 甜瓜枯萎病药剂防治试验[J]. 上海蔬菜，（6）： 105-107. [Zhou X L， Yang X J， Ding G J， Bao W H， She D Q， Chai Y J， Lu H. 2007. The chemical controlling experiments of muskmelon fusarium wilt[J]. Shanghai Vegetables，（6）：105-107.]

庄敬华，杨长成，高增贵，徐韶，郑雅楠. 2008. 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B6对甜瓜枯萎病的生防作用[J]. 果树学报，25（6）：891-895. [Zhuang J H， Yang C C，Gao Z G，Xu S，Zheng Y N. 2008. Effects of Bacillus subtilis B6 on melon fusarium wilt[J]. Journal of Fruit Science，25（6）：891-895.]

庄令. 2017. 深海链霉菌拮抗香蕉枯萎病菌活性菌株的筛选及鉴定[J]. 贵州农业科学，45（12）：59-63. [Zhuang L. 2017. Screening and identification of deep-sea stretpomyces with an antagonistic activity against Fusarum oxysporum[J]. Guizhou Agricultural Sciences，45（12）：59-63.]

邹立飞. 2013. 甜瓜枯萎病病原拮抗菌的筛选及利用響应面法优化发酵条件[D]. 海口：海南大学. [Zou L F. 2013. Screening of antagonistic bacteria against Muskmelon Fusarium wilt and optimization of the fermentation condition by response surface method[D]. Haikou： Hainan University.]

Ainhoa M M，Jose A P，Eva L，Antonio R. 2009. Interraction between arbuscularmycorrhizal fungi and Trichoderma harzianum and their effects on Fusarium wilt in melon plants grown in seedling nurseries[J]. Journal of the Scien-ce of Food and Agriculture， 89（11）： 1843-1850.

Cal A D，Sztejnberg A， Sabuquillo P. 2009. Management Fusarium wilt on melon and watermenlon by Penicillium oxalicum[J]. Biological Control， 51（3）： 480-486.

Cao Y，Wang J D，Wu H S，Yan S H，Guo D J. 2016. Soil chemical and microbial responses to biogas slurry amendment and its effect on Fusarium wilt suppression[J]. Applied Soil Ecology， 107： 116-123.

Egamberdiyeva D， Juraeva D，Haitow B，Gafurova L，Jordan D L. 2004. Microbial and biochemical changes induced by rotation and tillage in a calcareous soil under melon，tomato，wheat and cotton production[C]//Proceedings of the 26th Southern Conservation Tillage Conference for Sustainable Agriculture，（15）： 224-228.

Gava C A T，Pinto J M. 2016. Biocontrol of melon wilt caused by Fusarium oxysporum Schlect f. sp. melonis using seed treatment with Trichoderma spp. and liquid compost[J]. Biological Control， 97： 13-20.

Georgopapadakou N H. 2001. Update on antifungals targeted to thecell wall： Focus on beta-1，3-glucan synthase inhibitors[J]. Expert Opin Investig Drugs，10（2）： 269-280.

Hffrench R H， Dowlingb A， Waterfieldb N R. 2007. Insecticidal toxins from Photorhabdus bacteria and their potential use in agriculture[J]. Toxicon， 49： 436-451.

Liu J， Balasubramanian M K. 2001. 1，3-beta-glucan synthase：Auseful target for antifungal drugs[J]. Curr Drug Targets Infect Disord，1（2）： 159-169.

Madadkhah E，Lotfi M，Nabipour A，Rahmanpour S，Banihashemi Z，Shoorooei M. 2014. Enzymatic activities in roots of melon genotypes infected with Fusarium oxysporum f. sp. melonis race 1[J]. Scientia Horticulturae， 135（24）： 171-176.

?zbah?e A，Tari A F，Yücel S，Okur-Bah?e O. 2014. Chemigation for fusarium wilt and root rot management on melon[J]. Bahce， 97： 113-120.

（責任编辑 麻小燕）