HPLC法测定小麦粉中的间苯二酚

2018-09-20 02:48阳文武朱泽兵周浓万
食品工程 2018年3期
关键词:间苯二酚甲醇溶液小麦粉

阳文武朱泽兵周 浓万 莉*

1(重庆市万州食品药品检验所,重庆404000)

2(重庆三峡学院生命科学与工程学院,重庆404000)

间苯二酚,也称雷琐酚、雷琐辛,是苯间位两个氢被羟基取代后形成的化合物,具有杀菌作用,可用作防腐剂,主要用于橡胶粘合剂、合成树脂、染料、分析试剂等方面。间苯二酚具有中等毒性,能刺激皮肤、黏膜,同时可经皮肤迅速吸收,生成高铁血红蛋白而引起发绀、昏睡和致命的肾脏损伤。2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中,间苯二酚属于3类致癌物之一。因间苯二酚有防腐,抗褐变的作用,被用于小麦粉粉或面条粉改良剂中。为规范生产行为,加强小麦粉质量安全监管,2017年底,食药监局发布《进一步加强小麦粉质量安全监管的公告》。《公告》要求,严禁生产企业在小麦粉中添加过氧化苯甲酰、次磷酸钠、硫脲、间苯二酚、过硫酸盐、噻二唑、曲酸等非食品原料。国内外已有报道的间苯二酚检测方法主要有滴定法、紫外分光光度法、高效液相色谱方法,滴定法主要用于间苯二酚原料药的测定;紫外分光光度法准确度低、灵敏度低;高效液相色谱法主要用于化妆品、药品中间苯二酚的测定。本文采用高效液相色谱法检测小麦粉中的间苯二酚,操作简便,准确度、精密度好,灵敏度高,完全能够满足于检验机构日常检测任务的要求。

1 仪器与试剂

Agilent1260型高效液相色谱仪,KH-2000DB超声清洗机,Sartorius万分之一电子分析天平(QUINTIX224-1CN),间苯二酚对照品(购买于中国食品药品检定研究院,编号为BZJ001-1502、质量分数为99.0%),甲醇、甲酸为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 标准溶液配制

2.1.1间苯二酚标准储备液

精密称取间苯二酚标准品0.098 98 g(质量分数为99.0%) 于100 mL容量瓶中,用体积浓度20%甲醇溶液溶解并定容至刻度,得质量浓度为979.9μg/mL的标准储备液,贮存于4℃冰箱中,避光保存。

2.1.2 间苯二酚标准中间液

吸取标准储备液1.0mL于100mL容量瓶中,用体积浓度20%甲醇溶液定容至刻度,得质量浓度为9.799μg/mL的标准中间液,贮存于4℃冰箱中,避光保存。

2.1.3 间苯二酚标准系列工作液

分别准确吸取不同体积的标准中间液,用体积浓度20%甲醇溶液将其稀释成间苯二酚含量分别 为 0.245 μg/mL、 0.490 μg/mL、 2.450 μg/mL、4.900μg/mL、9.799μg/mL的标准系列工作液。临用时配制。

2.2 供试品溶液的制备

准确称取混合均匀的试样1 g(精确到0.001 g)于50mL具塞比色管中,加入体积浓度20%甲醇溶液35mL,涡旋分散均匀,超声处理(功率300W,频率40 kHz) 20 min,冷却至室温后,用体积浓度20%甲醇溶液定容至50 mL刻度线,混匀,静置5 min,取适量上清液过0.22μm滤膜,待液相色谱测定。

2.3 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-体积浓度0.1%甲酸溶液(体积比20∶80),流速 1.0mL/min,检测波长274 nm,柱温35℃,进样量:20μL。在上述色谱条件下,间苯二酚的保留时间为8.921min,且色谱峰分离度良好,色谱图见下页图1、图2、图3。

2.4 检出限

按GB/T16631-2008《高效液相色谱法通则》以3倍信噪比计算最低检测限为10mg/kg。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液20μL,按“2.3”项下色谱条件连续进样6次,测定成分峰面积。结果间苯二酚峰面积的RSD为0.66%。

2.6 加样回收率试验

精密称取已知含量(未检出间苯二酚)的小麦粉9份,每份约1 g,以3份为一组,每组分别精密加入标准中间溶液1.0mL、3.0mL、10mL,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.3”项下色谱条件进样测定,计算加样回收率。结果见表1。

表1 小麦粉中间苯二酚加样回收率结果

每组的平均回收率分别为96.4%、99.2%、99.1%,RSD分别为0.25%、0.18%、0.10%,表明该方法准确度良好。

2.7 稳定性试验

取同一加标试样溶液分别在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h进样测定。结果间苯二酚峰面积的RSD为0.72%,说明加标试样溶液在20 h内稳定。

图1 对照品色谱图

图2 样品色谱图

图3 加标回收色谱图

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法的选择

在供试品溶液制备中,比较了提取溶剂(水、体积浓度20%甲醇、体积浓度50%甲醇),超声提取时间(10min、20min、30min),提取溶剂用量 (25mL、35 mL、50 mL) 对测定结果的影响,最终确定了“2.2”项中的方法。

3.2 色谱条件的选择

系统适用性试验中,比较了甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸铵水溶液、甲醇-体积浓度0.1%甲酸水溶液3种流动相,同时比较了不同流速(0.8 mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min) 对测定结果的影响,最终确定了“2.3”项的色谱条件。间苯二酚的最大吸收波长在274 nm附近,故选择274 nm作为检测波长。

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