高效液相色谱法测定甲磺酸多沙唑嗪控释片含量

方宗华, 何 勇, 高永好, 吴宗好

(合肥华方医药科技有限公司，安徽 合肥 230088)

甲磺酸多沙唑嗪控释片是一种长效的选择性α1肾上腺素能受体阻滞剂，具有降低血压和改善良性前列腺增生患者的症状并对血脂产生有利影响的喹唑啉类衍生物[1-3]。本文采用高效液相色谱法对研制的甲磺酸多沙唑嗪控释片的含量进行测定并对其方法进行验证，通过样品的前处理和色谱条件的优化，消除了高分子辅料PEO等对含量测定的干扰，实验证明该法用于甲磺酸多沙唑嗪控释片的质量控制专属可行。

1 仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪(20AD,紫外检测器)；日本GL Sciences lnc WondaSil®C18色谱柱(150×4.6 mm，5μm)；日本紫外可见分光光度计(UV-1700)；METTLER TOLEDO分析天平(AG135)；甲磺酸多沙唑嗪控释片(实验室自制)；甲磺酸多沙唑嗪对照品(中国药品生物制品检定所) ；乙腈(色谱纯) ；水为纯化水；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18；流动相：水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL与三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)；检测波长：246nm；流速：1.0 mL/mL；柱温:室温；进样量为10μL。理论板数：按多沙唑嗪峰计算不得小于2000，分离度：多沙唑嗪峰与相邻杂质峰的分离度应大于2.0。

2.2 专属性试验

2.2.1 对照品溶液的制备

取甲磺酸多沙唑嗪对照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取甲磺酸多沙唑嗪控释片1片，用刀片切碎，全量转移至100mL量瓶中，加甲醇75mL，放置过夜，超声振摇使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心(必要时滤过)，精密量取上清液10mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 空白辅料溶液的制备

取空白辅料混合粉末约291.89 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加入75 mL甲醇，超声使溶散，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.4 测定法

精密量取上述3种溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱图见图1～3。

图1 空白辅料色谱图

图2 供试品色谱图

图3 对照品色谱图

2.2.5 结论

空白辅料在此条件下无干扰，多沙唑嗪峰前后无其他杂质峰影响。由以上试验结果可知，本法专属性强、操作简便，适合本品含量测定。

2.3 线性关系与线性范围

精密称取甲磺酸多沙唑嗪对照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上清液5 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取该对照品溶液1、5、10、15、20、30μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量(ng) 对峰面积(A)进行线性回归，得回归方程。结果见表1及图4。

表1 甲磺酸多沙唑嗪线性回归方程

图4 甲磺酸多沙唑嗪含量测定标准曲线图

结果表明：甲磺酸多沙唑嗪进样量在21.62 ng～648.60 ng的范围内，线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密量取上述同一甲磺酸多沙唑嗪对照品溶液(21.62μg/mL)10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样6次，以峰面积计算相对标准偏差RSD值(%)，结果见表2。

表2 精密度试验结果(n=6)

结果表明，本法精密度良好。RSD(%)=0.30%<2.0%。

2.5 溶液稳定性试验

取甲磺酸多沙唑嗪控释片1片，用刀片切碎，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置过夜，超声振摇使溶解，放冷，加流动相至刻度，摇匀，离心(必要时滤过)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

精密量取上述供试品溶液10μL立即进样，并在2、6、10、24、36 h后，分别进样10μL测定，以峰面积计算RSD(%)，结果见表3。

表3 供试品溶液稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液在36 h内稳定，RSD(%)=0.64%<2.0%。

2.6 中间精密度试验

2.6.1 供试品溶液的制备

取同一批号(170801)甲磺酸多沙唑嗪控释片10片(共6份)，分别将每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置过夜，超声振摇使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.6.2 对照品溶液的制备

取甲磺酸多沙唑嗪对照品约21 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.6.3 测定法

精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各份样品的含量，即得。分别由不同的人，不同仪器，不同时间，依法测定含量，试验结果见表4。

由上述试验结果可知：同一供试品(170801)，由不同的人，不同仪器，不同时间，依法测定含量，最低含量为104.13%，最高含量为105.30%，平均含量为104.65%， RSD=0.45%<2.0%，表明用该法测定甲磺酸多沙唑嗪控释片含量，中间精密度良好。

表4 中间精密度试验试验结果

2.7 准确度试验

采用加样回收法，精密称取甲磺酸多沙唑嗪对照品8.17、8.36、8.51、10.02、10.15、10.07、12.41、12.09、12.03 mg共9份，分别置250 mL量瓶中，再精密称处方量的空白辅料约589 mg(共9份)分别置同一250 mL量瓶中，加185mL甲醇，超声振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。另精密称取甲磺酸多沙唑嗪对照品适量(约相当于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪与多沙唑嗪的换算因子为0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

分别精密量取对照品溶液与供试品溶液(9份)各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表5。

表5 准确度试验结果

结果表明，平均回收率为99.59%，RSD(%)=0.58%<2.0%。说明本方测定甲磺酸多沙唑嗪控释片含量准确度高。

2.8 耐用性试验

为了考察变动因素对含量测定的影响，选择调节不同波长、不同流动相比例及不同柱温，来考察在不同的色谱条件下测定的含量数据。耐用性试验结果见表6。

表6 甲磺酸多沙唑嗪控释片在不同条件下试验结果

试验结果：在不同的色谱条件下测定，平均含量为105.52， RSD(%)=0.60%<2.0%。试验结果表明，流动相的比例在(73∶27)～(63∶37)范围内变化、柱温在25～35℃范围内变化、检测波长在244～248 nm范围内变化，对供试品溶液含量测定影响不大，表明本方法耐用性良好。

2.9 重复性试验

2.9.1 供试品溶液的制备

取同一批号(170801)甲磺酸多沙唑嗪控释片10片(共6份)，分别将每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置过夜，超声振摇使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，离心(必要时滤过)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.9.2 对照品溶液的制备

取甲磺酸多沙唑嗪对照品约10.19 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.9.3 测定法

精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各份样品的含量，即得。试验结果见表7。

表7 重复性试验试验结果

由上述试验结果可知：同一供试品(170801)重复测定6次，最低含量为102.50%，最高含量为106.33%%，平均含量为104.15%， RSD=1.58%<2.0%，表明用该法测定甲磺酸多沙唑嗪控释片含量重复性良好。

2.10 三批样品的含量测定

取本品10片，分别将每片用刀片切碎，各全量转移至100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置过夜，超声振摇使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心(必要时滤过)，精密量取上清液10 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取甲磺酸多沙唑嗪对照品适量(约相当于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪与多沙唑嗪的换算因子为0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算每片中C23H25N5O5的含量并计算10片的平均含量，即得。结果见表8。

表8 三批样品的含量测定结果

3 结果与讨论

3.1 流动相的选择

参照有关文献[2-3]中HPLC法测定甲磺酸多沙唑嗪含量选用的流动相为，经试验摸索，我们选用以水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL与三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)为流动相，所得峰形较好，专属性强，溶剂、辅料无干扰。

3.2 检测波长的选择

取甲磺酸多沙唑嗪对照品约12.32 mg，置100 mL量瓶中，加流动性适量，超声使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)，以流动相为空白溶剂，在200～400 nm波长范围内扫描，结果甲磺酸多沙唑嗪溶液在246.5nm波长处有最大吸收，故选用246 nm作为甲磺酸多沙唑嗪控释片含量测定(HPLC法)的检测波长。。

3.3 色谱填充柱的选择[2-3]

参考有关文献[2-3]，其HPLC法测定甲磺酸多沙唑嗪含量，色谱柱均选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。本方法所用的色谱柱为GL Sciences公司生产的(150 mm×4.6 mm，5μm)WondaSil®C18色谱柱。