阴道分泌物干化学法检测在常见阴道疾病诊断中的应用

焦瑞宝，陈 然，周佳丽，刘 娜，章 文，唐吉斌

（铜陵市人民医院临床检验中心，安徽 铜陵 244009）

阴道分泌物检测对阴道炎症的诊断具有重要的作用，通常采用生理盐水涂片镜检法，也有学者推荐采用革兰染色镜检法观察阴道清洁度、滴虫、真菌以及线索细胞[1]。近年来，我国有不少厂家开发出相关试剂盒，借助阴道分泌物干化学法检测来判断阴道微生态及病原体感染的状况[2-3]。本研究采用干化学法，对初诊阴道炎患者阴道分泌物5种酶学指标进行检测。5种酶学指标包括细菌性阴道病（bacterial vaginosis，BV）相关酶学指标[脯氨酸氨基肽酶（proline iminopeptidase，PIP）和唾液酸苷酶（saliva neuraminidase，SNA）]以及外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎相关酶学指标[凝固酶（coagulase，COA）、乙酰氨基葡萄糖苷酶（N-acetylglucosaminidase，NAG）和葡萄糖苷酶（glucosidase，GUS）]。另外，根据阴道分泌物的pH值，对滴虫和真菌进行区分。同时采用革兰染色镜检法，探讨阴道分泌物干化学法检测在BV、外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎诊断中的价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年11—12月于铜陵市人民医院妇科就诊的初诊阴道炎患者1 800例，年龄（42.3±8.4）岁。排除标准：24 h内有性生活、盆浴、阴道灌洗行为患者的样本，肉眼可见的血性样本，经期及绝经期患者样本，局部用药、正在服药或停药不超过1周的患者样本。所有患者均知情同意。

1.2 仪器与试剂

阴道炎五联检试剂盒Ⅱ（干化学酶法）由郑州安图生物工程股份有限公司生产，产品批号为20170622-2；革兰氏染色液（快速法）由珠海贝索生物技术有限公司生产；全自动生殖道分泌物工作站由嘉兴凯实生物科技有限公司生产；日本Olympus CX21生物显微镜。

1.3 方法

由铜陵市人民医院妇科医师常规采集患者阴道分泌物拭子2份，并送检，一支阴道分泌物拭子用于革兰染色镜检涂片，另一支阴道分泌物拭子用阴道炎五联检试剂盒Ⅱ专用稀释液洗脱，常规开启全自动生殖道分泌物工作站，将洗脱后溶液放置在工作站上相应的位置，启动仪器进行自动加样、温育和检测，通过工作站软件对反应板结果进行分析，并给出检测结果。将全自动生殖道分泌物工作站5种酶学指标检测结果及BV、外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎3种疾病检测结果，与革兰染色镜检法检测结果进行比较。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。率的比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 干化学法与革兰染色镜检法在BV诊断中的比较

1 800例患者阴道分泌物干化学法检测BV的阳性率低于革兰染色镜检法（χ2=515.24，P＜0.001）。干化学法在BV诊断中的敏感性为45.39%，特异性为97.14%，阳性预测值为88.18%，阴性预测值为79.12%，符合率为80.61%，不符合率为19.39%。见表1。

2.2 PIP和SNA在BV诊断中的比较

261例BV患者阴道分泌物PIP的阳性率高于SNA（χ2=11.52，P＜0.001）。见表2。

表1 干化学法与革兰染色镜检法在BV诊断中的比较

表2 PIP和SNA在BV诊断中的比较

2.3 干化学法与革兰染色镜检法在外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的比较

1 800例患者阴道分泌物干化学法检测外阴阴道假丝酵母菌病的阳性率高于革兰染色镜检法（χ2=142.36，P＜0.001）。干化学法在外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的敏感性为44.68%，特异性为85.70%，阳性预测值为36.73%，阴性预测值为89.29%，符合率为79.28%，不符合率为20.72%。见表3。

2.4 COA、NAG和GUS在外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的比较

126例外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道分泌物COA均阳性，NAG和GUS检测结果差异无统计学意义（χ2=0.36，P=0.547）。见表4。

表3 干化学法与革兰染色镜检法在外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的比较

表4 NAG和GUS在外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的比较

2.5 干化学法与革兰染色镜检法在滴虫性阴道炎诊断中的比较

1 800例患者阴道分泌物干化学法检测滴虫性阴道炎的阳性率高于革兰染色镜检法（χ2=537.70，P＜0.001）。干化学法在滴虫性阴道炎诊断中的敏感性为92.31%，特异性为96.20%，阳性预测值为34.95%，阴性预测值为99.82%，符合率为96.11%，不符合率为3.89%。见表5。

表5 干化学法与革兰染色镜检法在滴虫性阴道炎诊断中的比较

2.6 COA、NAG和GUS在滴虫性阴道炎诊断中的比较

36例滴虫性阴道炎患者阴道分泌物COA均阳性，NAG的阳性率略高于GUS（χ2=5.36，P＜0.050）。见表6。

表6 NAG和GUS在滴虫性阴道炎诊断中的比较

3 讨论

生殖道感染是妇科门诊常见多发病，阴道分泌物检测对其诊断具有重要的作用，常用检测方法有生理盐水涂片镜检法、革兰染色镜检法。然而，阴道分泌物干化学法检测能否完全替代显微镜镜检法，目前结论尚不一致。

BV主要由阴道加德纳菌、拟杆菌和动弯杆菌等多种微生物引起，是一种无阴道粘膜炎症表现的临床综合征[4]。唐吉斌等[5]认为在BV微生态中，普雷沃菌和拟杆菌是SNA活性增加的主要病原菌，加德纳菌和动弯杆菌则具有PIP活性。PIP和SNA可作为诊断BV的指标。外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎是由真菌或滴虫感染引起的阴道炎症。阴道炎五联检试剂盒Ⅱ与第1代试剂盒比较，除了包括原来就有的NAG检测之外，还增加了COA和GUS检测，共计3种酶学指标，另外可根据滴虫感染pH值升高的特点来对真菌和滴虫感染进行区分[6]。

本研究结果显示，干化学法在BV、外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎诊断中的敏感性分别为45.39%、44.68%和92.31%，特异性分别为97.14%、85.70%和96.20%；阳性预测值分别为88.18%、36.73%和34.95%，阴性预测值分别为79.12%、89.29%和99.82%；符合率分别为80.61%、79.28%和96.11%，不符合率分别为19.39%、20.72%和3.89%。

本研究革兰染色镜检法检测BV的阳性率为31.94%（575/1 800）、检测外阴阴道假丝酵母菌病的阳性率为15.67%（282/1 800）、检测滴虫性阴道炎的阳性率为2.17%（39/1 800），均低于余晓燕[7]报道的35.65%、18.13%和12.18%。这可能与二者研究例数、地区卫生条件以及患者卫生习惯不同有关。

本研究中干化学法有BV假阴性314例，其中219例革兰染色镜检法结果弱阳性，这可能是由于阴道分泌物中存在少量厌氧菌，革兰染色镜检法可直接观察到阴道分泌物细菌种类的变化，而酶含量较低未达到检测阈值造成的。PIP和SNA同时阳性者占BV患者的63.98%（167/261），单纯1种酶阳性者占36.02%（94/261），PIP阳性率高于SNA。这可能与加德纳菌和动弯杆菌比普雷沃菌和拟杆菌更容易引起BV有关。

干化学法有外阴阴道假丝酵母菌病假阳性217例，这可能是由于外阴阴道假丝酵母菌病患者治疗后真菌消失，但真菌死亡后所释放的生化标志物仍部分存在于阴道分泌物中所致，也可能是因为存在具有GUS活性的微生物无乳链球菌、大肠埃希菌等，或存在具有COA活性的微生物金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌等，进而导致仪器误判为真菌感染[8]。282例外阴阴道假丝酵母菌病患者中有156例干化学法结果为阴性，这可能与阴道感染真菌中只有白色念珠菌和热带念珠菌产生NAG，而克柔念珠菌、光滑念珠菌等非白色念珠菌均不产生NAG有关[9]；或者是因为阴道分泌物中真菌较少，涂片可以偶见孢子，但生化标志物含量极低，从而导致干化学法结果为假阴性。

1 761例革兰染色镜检法滴虫性阴道炎阴性患者中有67例干化学法结果为阳性，其中15例是由于阴道分泌物pH值＞4.8，仪器误将真菌判为滴虫所致；其他可能是由具有GUS和COA活性的无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌等杂菌造成[10]。

126例外阴阴道假丝酵母菌病患者和36例滴虫性阴道炎患者阴道分泌物COA的阳性率均为100.00%，分别有52.38%（66/126）和66.67%（24/36）的患者NAG和GUS同时阳性，这说明无论是假丝酵母菌感染还是滴虫感染，都会产生COA，导致干化学法检测COA结果阳性，滴虫感染比假丝酵母菌感染更容易产生上述2种酶。

综上所述，革兰染色镜检法可直接观察菌群密集度、多样性和优势菌[11]，干化学法可实现仪器自动化以及加样、孵育等检测过程的统一化、标准化。仪器通过检测阴道分泌物中化学组分水平，进而推算病原体的存在，容易受病原体水平的影响，也可受阴道分泌物中混杂微生物的干扰，从而影响干化学法检测结果；也可受已死亡病原体内化学成分的干扰，从而影响检测结果。因此，阴道疾病的实验室诊断目前尚不能用干化学法完全替代革兰染色镜检法，需充分利用2种方法的各自优势，互相补充，以提高临床检测结果的准确性。