呋塞米鼻腔喷雾剂局部给药的大鼠急性毒性试验结果

杜建红，何德云，钟元高

呋塞米鼻腔喷雾剂是笔者单位申请课题“呋塞米鼻腔喷雾剂用于战时高原反应急救的研究”研究配制的实验制剂，主要由呋塞米、苯扎氯铵、苯乙醇等成分配制而成。具有利尿作用，临床主要用于高原环境引起的急性肺水肿或脑水肿等水肿性疾病。为了解该药经鼻喷雾给药对局部及全身产生的毒性反应和反应的恢复情况，本研究对该药鼻腔用药的局部及全身毒性反应情况进行实验观察，为临床研究提供资料。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD大鼠220～300 g[成都达硕实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK（川）2016-25]，分笼饲养于空调实验室内，室温（24±2）℃，相对湿度40%～60%，适应性喂养1 w备用。1.2 仪器与试药

1.2.1 仪器 转轮式切片机[德国徕卡（Leica）仪器有限公司，型号2015]，全自动封闭式组织脱水机（常州市中威电子仪器有限公司，型号TSJ-Ⅱ），病理组织漂烘仪（常州市中威医疗仪器有限公司，型号PHY-Ⅲ型），数码三目摄像显微摄像系统（麦克奥迪实业集团有限公司，型号BA200Digital）。

1.2.2 试药 呋塞米鼻腔喷雾剂（0.5%W/W，批号20160301，20160315，20160327， 委托成都军区总医院按研究组方配制，仅用于课题研究），多聚甲醛、氢氧化钠、PBS 磷酸盐缓冲液（pH 7.2～7.4）、无水乙醇、二甲苯、中性树胶、苏木素、伊红等均为分析纯。

1.3 实验方法[1-7]实验前，挑选鼻部皮肤无出血及破损的动物备用，仔细观察并筛选鼻黏膜完整无损伤、出血、水肿及溃烂等病变的大鼠共12只，雌雄各6只，按性别体重随机分为空白组与给药组，每组6只。于实验室分笼饲养观察3 d，无异常反应后用于实验。

固定大鼠头部，用移液器将呋塞米鼻腔喷雾剂分别缓慢滴入给药组大鼠双侧鼻孔内，每孔25 μl，以保证受试样品和鼻腔鼻黏膜充分接触，防止受试样品流出鼻孔外，30 min后肉眼观察鼻黏膜局部损伤情况；第4 h及第8 h后重复上述操作，作为给药组。空白组滴入呋塞米鼻腔喷雾剂赋形剂，其余操作同给药组。 分别观察每只大鼠给药后 1、2、3、4、8、24 h 及第 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 及 14 d的局部和全身毒性反应情况，主要包括黏膜有无充血、水肿、溃疡、行为活动、饮食、排便和口、眼、鼻有无分泌物等情况，并做好详细记录。第14 d实验结束后，脱颈椎处死大鼠，肉眼观察大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胰腺、胃、脾、前列腺、睾丸、卵巢、子宫等主要脏器有无明显病理改变，做好详细记录；解剖取出鼻中隔（含两侧鼻腔黏膜），10%中性甲醛固定，苏木精-伊红染色法染色，光镜下观察并拍照。

2 结果

2.1 一般观察 给药组动物给予试药后，鼻腔局部无充血、水肿及溃烂等特殊反应，大鼠均未出现异常变化，一般活动正常，行为活泼，毛发光亮，饮食、排便无异常，口、眼、鼻无异常分泌物，黏膜无充血，无动物死亡，与空白组比较无显著性差异（P＞0.05）。

2.2 组织病理学检查 试验结束时，脱颈椎处死各组大鼠，解剖肉眼观察各组织器官均未见明显病理学改变。鼻中隔黏膜病理组织学检查结果显示，两组无显著性差异（图1）。

3 讨论

本研究通过鼻腔给药方式，给予大鼠呋塞米鼻腔喷雾剂和呋塞米鼻腔喷雾剂赋形剂，观察大鼠局部给药后局部和全身急性毒性实验结果。结果显示，给药组给药后1～14 d，大鼠鼻腔局部均无异常反应和表现，与空白组比较无显著性差异（P＞0.05），初步证明，呋塞米鼻腔喷雾剂对实验大鼠用药局部及全身均无明显急性毒性反应，具有良好的用药安全性。

图1 各组鼻中隔黏膜病理组织学检查结果